专利名称：一种测定降钙素原的试剂及该试剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种测定降钙素原的试剂及该试剂的制备方法，特别是采用胶乳增强免疫比浊法测定血清或血浆中的检测降钙素原的试剂及制备方法，可广泛应用在医学及生物化学技术领域。
背景技术：
血清降钙素原(Procalcitionin，PCT)是由116个氨基酸组成，分子量为13KD的糖蛋白。其半衰期为25-30小时。健康人血浆PCT含量极低，在正常人血中低于0. 5ng/ml。当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时它在血浆中的水平升高；而自身的免疫、过敏和在局部感染、病毒感染、慢性非特异性炎症、癌症发热、移植物宿主排斥反应等疾病时PCT水平不会升高；这就决定了 PCT的高度特异性，因此也可用于各种临床情况的鉴别诊断。PCT浓度和炎症严重程度成正相关，并随着炎症的控制和病情的缓解而降低至正常水平，因而PCT又可作为判断病情与预后以及疗效观察的可靠指标。PCT可在感染后2个小时后检测到，对临床早期诊断具有重要意义，在感染后12 24小时达到高峰。PCT在临床上具有广泛而又重要的应用价值；并且对ICU病人的死亡率及住院时间提供标准。目前检测PCT常用的实验室方法有放射免疫学分析法(RIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、胶体金比色法(GICA)和酶联免疫法(ELISA)，放射免疫学分析法是利用人工合成的多克隆抗体特异地识别和连接合成氨基酸降钙素原。该方法能检测正常人的血清PCT，可靠敏感度为4pm/mL，检测的是游离PCT、结合型PCT和降钙素基因相关肽前体的混合物，而不能区分上述三种物质。该法检测耗时长(19 22h)，而且有放射性元素的污染，标记物稳定性差，废弃物难以处理而使其受到限制。化学发光免疫分析法(CLIA)是利用化学发光物质经催化剂催化和氧化剂氧化，形成一个激发态的中间体；这种激发态的中间体回到稳定基态时，发出光子，利用发光信号测量仪测量光子数，从而间接测定PCT的浓度。目前市场上有管式和板式两种试剂盒，但此法存在吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺直接标记抗体的发光效率低，标记物不稳定的缺点；而且这种直接标记法属于瞬间发光型，很难保证测试结果的稳定性和重复性，还需要特殊的检测仪器。不便于常规实验室开展。而利用生物素-亲和素系统检测PCT的电化学发光免疫试剂盒，需要配套昂贵的全自动电化学发光检测仪，常规实验室无法开展，而且给患者带来不必要的费用，增加患者负担。酶联免疫法是用人工合成的PCT单克隆抗体检测，方法虽特异，但是检测最低限为IOy g/L，对正常人血清中的PCT浓度无法检测出来。中国专利(申请号201110210250. 4)还公开了一种检测降钙素原的试剂盒，利用磁微粒偶联抗体作为固定分离相，生物素-链霉亲和素多级放大体系，用辣根过氧化物酶为催化酶催化发光底物，虽然提高了检测的灵敏度，但是整个反应耗时也较长(至少需要40分钟)，而且样本需要磁性分离预处理。该法需要洗涤反应管，如果是人工洗涤会带来人为误差，如果用仪器洗，则需要另备洗涤仪器，增加实验室的成本
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服上述背景技术的不足，提供一种降钙素原检测试剂及制备方法；所提供的试剂应具有准确度高、重复性好、操作简单、测定时间短、适用于各种类型的全自动生化分析仪的特点；所提供的试剂制备方法应具有制作方便以及成本不高的特点。本发明提供的技术方案是一种测定降钙素原的试剂，包括以下成份及含量a、降钙素原试剂1:
缓冲液10-400mmol/L pH 位为 5-10
I Li 解质10-400mmol/L
表面活性剂0. 01-10g/L
反应加速剂0.01-50g/L
防腐剂2-3 mmol/L
稳定剂4-5 mmol/L
其余是纯化水该试剂I的pH值为7. 0-8. 0 ；b、降钙素原试剂2:
抗人PCT抗体胶乳颗粒0. 0001-0. 05 mg/ml
缓冲液50mmol/L pH 值为 6.0-8.5
防腐剂2-3mmol/L
稳定剂3-4mmol/L 其余是纯化水；所述抗人PCT抗体胶乳颗粒中的羧基胶乳微球的粒径为20nm-500nm ；C、液体型降钙素原参考校准品缓冲液100-300irimo!/L pH 值为 7.2-8.0
防腐剂2-3mmol/L
稳定剂160-17Ommo I /L
降钙素原适量
其余是纯化水；所述液体型降钙素原参考校 准品包括形成系列浓度的5份参考校准品；5份参考校准品中的降I丐素原含量由低到高分别为1. 25ng/ml、2. 5ng/ml、5. 0ng/ml、10. Ong/ml、20. Ong/ml ;或者，制备成单点浓度的降钙素原参考校准品；例如浓度为100ng/ml或500ng/ml的降钙素原参考校准品。所述缓冲液是磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、1，4-哌嗪二乙磺酸(PIPES)缓冲液、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-1乙烷磺酸(HEPES)缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、3-吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸(MOPSO)缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液中的一种或两种以上任意比例的混合。所述降钙素原试剂I中缓冲液的浓度为20-200mmol/L，pH值7. 0-8. O。所述反应加速剂是聚乙二醇或硫酸葡聚糖(DS-50 )。所述反应加速剂浓度优选0. 05_30g/L。所述稳定剂是乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白、氯化钠中的一种或两种以上任意比例的混合。所述电解质是阴离子电解质或阳离子电解质。所述电解质是阳离子中的氯化钠(NaCl )，浓度优选50-200mmol/L。所述表面活性剂是非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂。所述非离子表面活性剂是Theist、Tween系列、聚氧乙烯月桂醚系列、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚中的一种或两种以上任意比例的混合。所述表面活性剂浓度优选0. 5-lg/L。所述抗人PCT抗体胶乳颗粒的浓度优选L 0-10mg/mlo所述抗人降钙素原抗体是羊抗人降钙素原抗体或兔抗人降钙素原抗体或鸡抗人降钙素原抗体或鼠抗人降钙素原抗体。一种测定降钙素原试剂的制备方法，按如下步骤进行I)降钙素原试剂1:按配方量将缓冲液、电解质、表面活性剂、反应加速剂、防腐剂、稳定剂以及纯化水混合均匀，调定PH值至7. 0-8. 0 ；2)降钙素原试剂2:(I)取羧基胶乳微球用缓冲液稀释成0. 01mg/ml的悬浮液；
(2)按Iml的羧基胶乳微球悬浮液加20mgl_乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDAC羧基活化剂)和40mg的N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐(NHS)的比例，加入1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐，立即混匀后在室温将此混合物反应15-30分钟，不断搅拌；(3)用缓冲液或纯化水洗涤羧基胶乳微球，除去未反应的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐，并将胶乳微球在纯化水中悬浮得羧基胶乳微球悬浮液，使其浓度为0. 01mg/ml ；(4)将抗人降钙素原抗体溶于缓冲液中，使抗人降钙素原抗体的蛋白质浓度为0. 25mg/ml ；(5)取步骤(3)中的羧基胶乳微球悬浮液Iml立即加入步骤(4)中的抗人降钙素原抗体Iml ;使该混合液中羧基胶乳微球、抗人降钙素原抗体和缓冲液的浓度分别为0. 005mg/ml、0. 125mg/ml、25mmol/L ；(6)将混合物在37°C反应3小时，不断搅拌；(7)按Iml反应混合物加2. 5 ii I的乙醇胺的比例加入乙醇胺，反应10_30分钟，不断搅拌；(8)离心处理除去未结合的蛋白质和乙醇胺，用缓冲液稀释，使抗人PCT抗体胶乳颗粒的浓度为0. 002-0. Olml/ml,然后加入稳定剂、防腐剂溶解混匀后即得降钙素原试剂2 ；3)液体型降钙素原参考校准品先按配方量将防腐剂、稳定剂及缓冲液混合并分成5份混合液，然后按照需要的降钙素原参考校准品浓度，将相应量的1000ng/ml的降钙素原纯品分别加入上述混合液中，获得5份形成系列浓度的参考校准品；5份参考校准品中的降钙素原含量由低到高分别为1. 25ng/ml、2. 5ng/ml、5. Ong/ml> 10. Ong/ml>20. Ong/ml ;或者，按配方量将防腐剂、稳定剂及缓冲液混合后得混合液，然后在混合液中加入一定量的1000ng/ml的降钙素原纯品，获得单点高浓度的降钙素原参考校准品。例如，该参考校准品中的降钙素原含量为100. Ong/ml或500. Ong/ml ;使用时再用生理盐水稀释成多个不同浓度的参考校准品；这里没有特别的限制，只要制得的降钙素原参考校准品能与样品比较，能够测定样品中降钙素原的含量即可。所述离心处理采用离心机，离心机转速为15000转/分。本发明所提供的PCT测定试剂的反应原理是样品中的PCT与试剂中的抗人PCT抗体胶乳颗粒发生抗原-抗体反应，使反应液浊度增加，在一定范围内反应液浊度与样品中抗原的量呈线性关系，可使用生化分析仪或其它光学检测仪器在520-600nm波长处测定反应液吸光度值，反应液吸光度值与所测PCT浓度成正比。本发明的有益效果是所提供的采用乳胶增强免疫比浊法的降钙素原检测试剂，通过将CG抗体与羧基胶乳微球结合，放大了 CG抗原和抗体反应的表面积，具有准确性高(与化学发光免疫分析法的相关性R2为0. 9991-0. 9998)、重复性好、检测快速(从测定开始到得出结果最多只需要10分钟，甚至更短)的特点，能够在常规生化仪上进行大批量样本测定，大大提高了检测工作效率。该试剂的制备方法操作简便，原料易得(全部选用外购原料)，成本不高，适合各类医学研究单位以及常规实验室应用。
图1显示实施例1中通过本发明方法所得PCT试剂的测定值与化学发光免疫分析法所得的PCT测得值的相互关系。经回归分析y=l. 0062x+0. 6087 ；R2=0. 9991，显示出本实施例1与化学发光免疫分析法具有良好的相关性。图2显示实施例2中通过本发明方法所得PCT试剂的测定值与化学发光免疫分析法所得的PCT测得值的相互关系。经回归分析y=1.0096x+0. 7981 ；R2=0. 9996,显示出本实施例2与化学发光免疫分析法具有良好的相关性。图3显示实施例3中通过本发明方法所得PCT试剂的测定值与化学发光免疫分析法所得的PCT测得值的相互关系。经回归分析y=l. 0092x+0. 7507 ；R2=0. 9998，显示出本实施例3与化学发光免疫分析法具有良好的相关性。图4显示实施例4中通过本发明方法所得PCT试剂的测定值与化学发光免疫分析法所得的PCT测得值的相互关系。经回归分析y=l. 0056x+2. 8301 ；R2=0. 9998显示出本实施例4与化学发光免疫分析法具有良好的相关性。
具体实施例方式本发明检测试剂及校准品所需主要原料1、抗人降钙素原抗体，有许多商品化的抗人降钙素原抗体可供选择，如芬兰DaKo公司、日本UNF公司；该抗体仅与人降钙素原反应，与其它抗原无免疫交叉反应，可以是多克隆抗体或单克隆抗体，这里没有特别限制，只要能与胶乳微球偶联即可。其抗人降钙素原抗体可以是羊抗(即羊抗人降钙素原抗体；以下同)、也可以是兔抗、鸡抗或鼠抗。只要采用已知的免疫电泳法测定，该抗体只与人PCT之间呈现单一的沉定线，抗人降钙素原抗体的滴度大于或等于0. 5mg/mlo2、胶乳微球，有许多商品化的纳米微球可供选择，如德国Merck公司、日本UNF公司、日本JSR公司和Thermo公司；其基本材质是聚苯乙烯或共聚苯乙烯，表面用羧基基团(COOH)修饰，也可不用作任何修饰，这里要根据选择抗体和微球的结合方法不同而选择不同的微球。如选择化学交联法(也可以采用物理吸附法)，则用表面经羧基、氨基、醛基等修饰的微球。本法优选羧基基团修饰的胶乳微球，羧基胶乳微球的粒径优选20nm-500nm,更进一步的优选80nm-300nm。3、降钙素原购自芬兰DaKo公司，用于制备本试剂所需参考校准品，可以是天然降钙素原，也可以是基因重组降钙素原。下面结合实施例详细说明本发明试剂，但这些实施例不应认为是限制本发明的定义。实施例一一)降I丐素原试剂I三羟甲基氨基甲烷(缓冲液)50 mmol/L PH7. 2 吐温-20 (表面活性剂)1.0 g/L NaCL (电解质)200 mmol /I, PEG-6000 (反应促进剂)15 k/L 叠氮钠(防腐剂)3 mmol/L 乙二胺四乙酸二钠(稳定剂)5 mmol/L用纯化水800ml将上述原料溶解后，再补加纯化水定容至1000ml，然后用盐酸调PH 至 7. 2 ;二)降钙素原试剂21.取80nm的羧基胶乳微球用50mmol/L、pH6. 0的MES缓冲液稀释成0. 01mg/ml的
悬浮液；2.按Iml羧基胶乳微球悬浮液加20mgl_乙基_ (3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDAC)和40 mg N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐(NHS)的比例加入1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐，立即混匀后在室温将此混合物反应15-30分钟，不断搅拌；3.用50mmol/L、PH6. 0的MES缓冲液或纯化水洗涤羧基胶乳微球，除去未反应的NHS和EDAC，并将胶乳微球在纯化水中悬浮得羧基胶乳微球悬浮液，其中羧基胶乳微球的含量为 0. 01mg/ml ；4.将羊抗人降钙素原抗体溶于50mmol/L、PH8. 5的硼酸盐缓冲溶液中，使羊抗人降隹丐素原抗体的蛋白质浓度为0. 25mg/ml ；5.取步骤(3)中的羧基胶乳微球悬浮液Iml立即加入步骤(4)中的羊抗人降钙素原抗体Iml ;此时该混合液中羧基胶乳微球、羊抗人降钙素原抗体和缓冲溶液的浓度分别为 0. 005mg/ml、0. 125mg/ml、25mmol/L ；6.将混合物在37°C反应3小时，不断搅拌；7.按Iml反应混合物加2. 5 ii I乙醇胺的比例加入乙醇胺，反应15分钟，不断搅拌；8.用15000转/分离心除去未结合的蛋白质和乙醇胺，用50mmol/L、PH7. 2的M0PS0缓冲液稀释，使羊抗人PCT抗体胶乳颗粒的浓度为0. 01ml/ml,然后加入牛血清白蛋白(稳定剂)3mmol/L、3mmol/L叠氮钠(防腐剂)溶解混勻后即得降I丐素原试剂2 ；三)液体型PCT参考校准品
缓冲液 HEPES100mmol/L (PH7.2)防腐剂广谱杀菌剂2ramol/L
稳定剂乙二胺四乙酸二钠2mm0l/L
稳定剂牛血清白蛋白3mmo I /I
稳定剂氯化钠166mmol/L
其余是纯化水；按照需要的PCT参考校准 品浓度将相应的PCT纯品1000ng/ml加入上述混合液中，制备得形成系列浓度的5个参考校准品；5个参考校准品中PCT含量由低到高分别为5ng/ml、IOng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml。样本检测(与化学发光免疫法分别对比检测30个样本)按照实验操作步骤，向10 ii L样品中加入240 U L的降钙素原试剂1，在37°C孵育3分钟，加入60 u L降钙素原试剂2，37°C孵育10秒后在波长600nm读取吸光度A1，反应至5分钟时读取吸光度A2,计算两次吸光度变化值A A=A2-A10通过与同样处理的校准液比较，计算出样品中的PCT浓度。从表I和图1 (图1根据表I数据绘制)根据结果可看出，本发明方法尽管操作简单，所需时间仅在10分钟以内，也与化学发光免疫法显示非常良好的相关性(相关性R2达到0. 9991)。表I
权利要求
1.一种测定降钙素原的试剂，包括以下成份及含量a、降钙素原试剂1:缓冲液10-400mmol/L pH ' 为 5-10ijl 解成10-400mmol/L表而活性剂O. Ol-lOg/L反应加速剂0.01-50g/L防腐剂2-3mmol/L稳定剂4-5 mmol/L其余是纯化水该试剂I的PH值为7. 0-8. O ；b、降钙素原试剂2:抗人PCT抗体胶乳颗粒O. 0001-0. 05 mg/ml缓冲液50_ol/L pH 值为 6.0-8.5防腐剂2_3mmol/L稳定剂3-4mmol/L其佘是纯化水；所述抗人PCT抗体胶乳颗粒中的羧基胶乳微球的粒径为20nm-500nm ；C、液体型降钙素原参考校准品缓冲液100-30()mmol/L pH 侦为 7.2-8.0防腐剂2-3mmol/L稳定剂160-170mmol/L降钙素原适量其余足纯化水；所述液体型降钙素原参考校准品包括形成系列浓度的5份参考校准品；5份参考校准品中的降I丐素原含量由低到高分别为1. 25ng/ml、2. 5ng/ml、5. 0ng/ml、10. 0ng/ml、20. Ong/ml ;或者，制备成单点浓度的降钙素原参考校准品。
2.根据权利要求1所述的一种测定降钙素原的试剂，其特征在于所述缓冲液是磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、1，4-哌嗪二乙磺酸(PIPES)缓冲液、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-1乙烷磺酸(HEPES)缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、3-吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸(MOPSO)缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液中的一种或两种以上任意比例的混合。
3.根据权利要求2所述的一种测定降钙素原的试剂，其特征在于所述降钙素原试剂I中缓冲液的浓度为20-200mmol/L，pH值7. 0-8. O。
4.根据权利要求3所述的一种测定降钙素原的试剂，其特征在于所述反应加速剂是聚乙二醇或硫酸葡聚糖。
5.根据权利要求4所述的一种测定降钙素原的试剂，其特征在于所述电解质是阴离子电解质或阳离子电解质。
6.根据权利要求5所述的一种测定降钙素原的试剂，其特征在于所述表面活性剂是非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂；所述非离子表面活性剂是Theist、Tween系列、聚氧乙烯月桂醚系列、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚中的一种或两种以上任意比例的混合。
7.根据权利要求6所述的一种测定降钙素原的试剂，其特征在于所述稳定剂是乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白、氯化钠中的一种或两种以上任意比例的混合。
8.根据权利要求7所述的一种测定降钙素原的试剂，其特征在于所述抗人降钙素原抗体是羊抗人降钙素原抗体或兔抗人降钙素原抗体或鸡抗人降钙素原抗体或鼠抗人降钙素原抗体。
9.权利要求1所述一种测定降钙素原的试剂的制备方法，按如下步骤进行1)降钙素原试剂1:按配方量将缓冲液、电解质、表面活性剂、反应加速剂、防腐剂、稳定剂以及纯化水混合均匀，调定pH值至7. 0-8.0 ；2)降钙素原试剂2(1)取羧基胶乳微球用缓冲液稀释成O.01mg/ml的悬浮液；(2)按Iml的羧基胶乳微球悬浮液加20mgl-乙基_(3_二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDAC羧基活化剂)和40mg的N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐(NHS)的比例，加入1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐，立即混匀后在室温将此混合物反应15-30分钟，不断搅拌；(3)用缓冲液或纯化水洗涤羧基胶乳微球，除去未反应的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐，并将胶乳微球在纯化水中悬浮得羧基胶乳微球悬浮液，使其浓度为O. 01mg/ml ；(4)将抗人降钙素原抗体溶于缓冲液中，使抗人降钙素原抗体的蛋白质浓度为O.25mg/ml ；(5)取步骤(3)中的羧基胶乳微球悬浮液Iml立即加入步骤(4)中的抗人降钙素原抗体Iml ;使该混合液中羧基胶乳微球、抗人降I丐素原抗体和缓冲液的浓度分别为O. 005mg/ml、0. 125mg/ml、25mmol/L ；(6)将混合物在37°C反应3小时，不断搅拌；(7)按Iml反应混合物加2.5 μ I的乙醇胺的比例加入乙醇胺，反应10-30分钟，不断搅拌；(8)离心处理除去未结合的蛋白质和乙醇胺，用缓冲液稀释，使抗人PCT抗体胶乳颗粒的浓度为O. 002-0. 01ml/ml,然后加入稳定剂、防腐剂溶解混匀后即得降钙素原试剂2 ；3)、液体型降钙素原参考校准品先按配方量将防腐剂、稳定剂及缓冲液混合并分成5份混合液，然后按照需要的降钙素原参考校准品浓度，将相应量的1000ng/ml的降钙素原纯品分别加入上述混合液中，获得5份形成系列浓度的参考校准品；5份参考校准品中的降钙素原含量由低到高分别为.1.25ng/ml、2. 5ng/ml、5. 0ng/ml> 10. 0ng/ml、20. Ong/ml ;或者，按配方量将防腐剂、稳定剂及缓冲液混合后得混合液，然后在混合液中加入一定量的1000ng/ml的降钙素原纯品，获得单点高浓度的降钙素原参考校准品，其降钙素原含量为.50.Ong/ml 或 100. 0ng/ml。
10.根据权利要求9所述的一种测定降钙素原的试剂的制备方法，其特征在于所述离心处理采用离心机，离心机转速为15000转/分。
全文摘要
本发明涉及一种测定降钙素原的试剂及其制备方法。目的是提供的提供的试剂具有准确度高的特点；提供的试剂制备方法具有制作方便的特点。技术方案是一种测定降钙素原的试剂，包括以下成份a、降钙素原试剂1；b、降钙素原试剂2；c、液体型降钙素原参考校准品；一种测定降钙素原试剂的制备方法，按如下步骤进行1)降钙素原试剂1混合均匀；2)降钙素原试剂2(1)取悬浮液；(2)混合物反应；(3)得羧基胶乳微球悬浮液；(4)调整浓度；(5)取(3)中的悬浮液加入(4)中；(6)反应；(7)加入乙醇胺；(8)离心处理；3)液体型降钙素原参考校准品按配方量混合，按降钙素原含量排列或在混合液中加入降钙素原纯品。
文档编号G01N21/82GK103018464SQ20121053645
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月12日 优先权日2012年12月12日
发明者陈开华, 其他发明人请求不公开姓名 申请人:元升生物科技(上海)有限公司