高效液相色谱法测定塞来昔布胶囊中对磺酰胺基苯肼盐酸盐含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及高效液相色谱技术领域，具体涉及一种高效液相色谱测定塞来昔布胶 囊中对磺酰胺基苯肼盐酸盐含量的方法。
【背景技术】
[0002] 塞来昔布原料生产过程中可能存在对磺酰胺基苯肼盐酸盐带入。该化合物结构与 已知基因毒杂质有类似性，需对其进行限度控制。按照ICH规定基因毒杂质的人体摄入量 不能超过每人每天1. 5呢，因此我们建立了塞来昔布胶囊中对磺酰胺基苯肼的HPLC-UV测 定法，可以更好的控制塞来昔布胶囊的产品质量，更好的对塞来昔布胶囊中可能存在的对 磺酰胺基苯肼盐酸盐杂质进行检测。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是建立一个测定塞来昔布胶囊中对磺酰胺基苯肼盐酸盐含量的方 法，可以更好的控制塞来昔布胶囊的质量，更好的对塞来昔布胶囊中可能存在的对磺酰胺 基苯肼盐酸盐杂质进行检测。
[0004] 本发明的技术方案是：高效液相色谱测定塞来昔布胶囊中对磺酰胺基苯肼盐酸 盐含量的方法，它包括如下步骤： (1) 对照品溶液的制备：称取对磺酰胺基苯肼盐酸盐对照品，加甲醇制成每lml含 500ng的对磺酰胺基苯肼盐酸盐溶液； (2) 供试品溶液的制备：取塞来昔布胶囊内容物加甲醇制成每lml含150mg塞来昔布 的溶液； (3) 测定：高效液相色谱仪的固定相为十八烷基键合石墨碳，流动相A为10mm〇l/L乙 酸铵水溶液-甲醇=45:55~55:45，流动相B为甲醇，柱温为30 °C~40 °C，流动相A初始流 速为0. 78~0. 82ml/min，检测波长为218nm~222nm分别吸取对照品溶液与供试品溶液各 15~25耵，注入高效液相色谱仪，读取数据。
[0005] 所述高效液相色谱仪的检测器为紫外吸收检测器，检测波长为220nm。
[0006] 所述流动相A为10mm〇l/L乙酸铵水溶液-甲醇=50:50,流动相B为甲醇。其运 行梯度方式见表1 :
[0007] 本发明的有益效果是：本发明应用高效液相色谱测塞来昔布胶囊中对磺酰胺基苯 肼盐酸盐含量，分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高，通过检测塞来昔布胶囊中对磺酰 胺基苯肼的盐酸盐含量，控制每粒塞来昔布胶囊中对磺酰胺基苯肼盐酸盐不得过〇. 75呢， 以利于更好控制塞来昔布胶囊的质量，更好的对塞来昔布胶囊中可能存在的对磺酰胺基苯 肼盐酸盐杂质进行检测。
[0008]
【附图说明】：图1为空白辅料溶液色谱图； 图2为对照溶液色谱图； 图3为样品溶液色谱图； 图4为对磺酰胺基苯肼盐酸盐的线性回归图； 图5为流速变化测试结果对比图； 图6为流动相A比例变化测试结果对比图； 图7为进样量变化测试结果对比图； 图8为检测波长变化测试结果对比图； 图9为柱温变化测试结果对比图。
[0009] 以下通过实施例形式再对本发明的内容作进一步详细说明，但不应就此理解为本 发明上述主题范围内仅限于以下实施例。在不脱离本发明上述技术前提下，根据本领域普 通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本发明的范围内。
[0010] 实施例1色谱柱的确定 仪器：高效液相色谱仪ThermoUltimate3000,紫外检测器 色谱柱：WatersXterraRP，150mmX4. 6mmX3. 5〇Mm,十八烷基键合硅胶为填料 流速：〇? 7ml/min; 进样量：2〇Ml; 柱温：35°C; 波长：247nm; 流动相：10mm〇l/L乙酸铵水溶液-甲醇=70:30 ; 对照品溶液的配制：精密称取对磺酰胺基苯肼盐酸盐2mg，至于200ml容量瓶中，加甲 醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。精密量取上述溶液〇. 5ml至于10ml容量瓶中，加甲醇稀 释至刻度，摇匀即得。
[0011] 取流动相、对磺酰胺基苯肼盐酸盐50ng/ml溶液，分别进样记录色谱图。
[0012] 溶剂峰在4.Omin处有较小吸收，对磺酰胺基苯肼盐酸盐在3. 8min处出峰。
[0013] 结论：在该方法条件下，流动相作为溶剂对磺酰胺基苯肼盐酸盐的测定有干扰。
[0014] 实施例2色谱柱的确定 仪器：高效液相色谱仪Thermo Ultimate3000,紫外检测器 色谱柱：Inertsil 0DS_3，150mmX4. 6mmX3.OOMm,十八烷基键合硅胶为填料。
[0015] 流速：0? 7ml/min; 进样量：2〇Ml; 柱温：35°C; 波长：247nm; 流动相：10mm〇l/L乙酸铵水溶液-甲醇=70:30 ; 对照溶液的配制：精密称取对磺酰胺基苯肼盐酸盐2mg，至于200ml容量瓶中，加甲醇 溶解并稀释至刻度，摇匀即得。精密量取上述溶液〇. 5ml至于10ml容量瓶中，加甲醇稀释 至刻度，摇匀即得。
[0016] 供试溶液的配制：精密称取对塞来昔布1. 5g，至10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀 释至刻度，摇匀即得。
[0017] 取流动相，对磺酰胺基苯肼盐酸盐50ng/ml溶液，塞来昔布150mg/ml溶液分别进 样记录色谱图。
[0018] 溶剂峰在4.Omin处有较小吸收，对照溶液的中对磺酰胺基苯肼盐酸盐在3. 89min 处出峰，供试的中对磺酰胺基苯肼盐酸盐在3. 92min处出峰， 结论：在该方法条件下，流动相作为溶剂对塞来昔布中对磺酰胺基苯肼盐酸盐的测定 有干扰。
[0019] 实施例3色谱柱的确定和检测波长 仪器：高效液相色谱仪Waters e2695-2998,二极管阵列检测器。
[0020] 色谱柱：Thermo Hypercarb，150_X4. 6_X3. OOMm,十八烷基键合石墨碳为填 料。
[0021] 流速：0? 8ml/min; 进样量：2〇Ml; 柱温：35°C; 波长：190~400nm; 流动相：10mm〇l/L乙酸铵水溶液-甲醇=70:30 ; 对照溶液的配制：精密称取对磺酰胺基苯肼盐酸盐2mg，至于200ml容量瓶中，加甲醇 溶解并稀释至刻度，摇匀即得。精密量取上述溶液5ml至于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，摇匀即得。
[0022] 取甲醇，对磺酰胺基苯肼盐酸盐500ng/ml溶液，分别进样记录色谱图。
[0023] 溶剂峰在3.Omin处有较小溶剂峰，对照溶液的中对磺酰胺基苯肼盐酸盐在 11. 93min处出峰，对照溶液的中对磺酰胺基苯肼盐酸盐在197nm、217nm、264nm处分别有 最大吸收。
[0024] 结论：在该方法条件下使用十八烷基键合石墨碳为填料的色谱柱，甲醇作为溶剂 对磺酰胺基苯肼盐酸盐的测定无干扰，在217nm处对磺酰胺基苯肼盐酸盐紫外吸收最大， 故采用在217nm附近的波长检测。
[0025] 实施例4检测器和色谱柱的确定。
[0026] 仪器：高效液相色谱仪Waters515-2475,荧光检测器。
[0027] 色谱柱：ThermoHypercarb，250_X4. 6_X5.OOMm,十八烷基键合石墨碳为填 料。
[0028] 进样量：20耵； 柱温：35°C; 激发波长：210-260nm;发射波长：280nm; 流动相：10mm〇l/L乙酸铵水溶液-甲醇（50:50); 在激发波长：210-260nm;发射波长：280nm;波长条件下进样 对磺酰胺基苯肼盐酸盐10Ug/ml溶液，记录色谱图。
[0029] 溶剂峰在2. 3min处有较大吸收，对照溶液的中对磺酰胺基苯肼盐酸盐在 11. 93min处出峰，对照溶液的中对磺酰胺基苯肼盐酸盐在激发波长220nm处有最大吸收。
[0030] 在激发波长：220nm;发射波长：260-360nm;波长条件下进样。
[0031] 对磺酰胺基苯肼盐酸盐10yg/ml溶液，记录色谱图。
[0032] 溶剂峰在2. 3min处有较大吸收，对照溶液的中对磺酰胺基苯肼盐酸盐在 11. 80min处出峰，对照溶液的中对磺酰胺基苯肼盐酸盐在发射波长280nm处有最大吸收。
[0033] 在激发波长：220nm;发射波长：280nm;波长条件下进样。
[0034] 对磺酰胺基苯肼盐酸盐10yg/ml溶液，记录色谱图。
[0035] 溶剂峰在2.lmin处有较大吸收，对照溶液的中对磺酰胺基苯肼盐酸盐在12. 2min 处出峰，溶剂峰对磺酰胺基苯肼盐酸盐检测没有干扰。
[0036] 在激发波长：220nm;发射波长：280nm;波长条件下进样。
[0037] 对磺酰胺基苯肼盐酸盐500ng/ml溶液，记录色谱图。
[0038] 溶剂峰在2.lmin处有较大吸收，对磺酰胺基苯