用于豆制品和饮料中碱性嫩黄o快速检测的拉曼光谱法及试剂配方与使用方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种色素类违禁添加物的快速检测技术，尤其设及豆制品和饮料中碱 性嫩黄0现场快速检测的拉曼光谱法、试剂配方及使用方法。
【背景技术】
[0002] 食品安全问题已成为全球关注的焦点，食品安全事件波及面广，造成的社会影响 和经济损失巨大，也对人类生活环境乃至健康安全构成越来越严重的威胁。苏丹红事件、吊 白块事件W及红屯、鸭蛋风波，引起了国内外的广泛关注。一次次的食品安全问题和危机检 验着食品监管部口的能力，如何保障食品安全成为全社会共同关注的问题。
[0003] 碱性嫩黄0碱性嫩黄0,，别名盐基淡黄0、盐基槐黄、碱性巧光黄GR等，英文名称 为Basicflavine0,是一种芳香胺类碱性工业染料，可用于蚕丝、膳绝、皮革、纸、麻的染 色，但严禁作为食品添加剂。毒理学资料表明碱性嫩黄0对皮肤黏膜有轻度刺激，可引起结 膜炎、皮炎和上呼吸道刺激症状，人接触或者吸入碱性嫩黄0都会引起中毒，长期接触会致 癌。因此中国卫生部将其列在《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂 品种名单（第一批）至（第五批）》中，禁止在食品中使用。但在食品中非法添加非食用色 素的现象在市场上已经层出不穷，如碱性澄、碱性嫩黄0等，该些为工业用途的化工产品， 属于食品中的禁用添加物质，却被多次检测出来。目前，食品中碱性澄的测定尚无国家标准 方法，国内有一些相关的文献报道检测碱性嫩黄0的方法主要有，高效液相色谱法和高效 液相色谱-质谱联用法。质谱法虽然灵敏度高，但是，其前处理步骤复杂，仪器设备的投入 比较大，难于普及推广，且前处理操作复杂，时间冗长，有机溶剂污染环境。
[0004] 对于常见的快速检测技术，往往缺乏配套的样品前处理技术，导致基质干扰严重， 检测结果不准确，不能对违禁非法添加样品进行准确、可靠的检测与控制。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种豆制品和饮料中非法添加物碱性嫩黄0的快速检测方 法，采用提取萃取处理技术和表面增强拉曼光谱法对食品中是否添加了碱性嫩黄0进行快 速检测，成本低廉，可现场应用。
[0006] 为适应上述需求，本发明提供简单的食品（如豆制品、饮料）前处理方法，提供检 测试剂配方及其制备方法，提供碱性嫩黄0现场快速的定性和定量分析方法。其步骤如下：
[0007] 1.提取
[0008] 用85%~90%的己膳水溶液作为试样提取试剂。准确称取豆制品（豆皮、腐竹、 豆排卷）试样1.Og，加入4ml提取剂与试样混匀，于室温、8000~1000化pm下离屯、2~5 分钟，吸取离屯、后的上层溶液，加入2ml提取剂，祸旋1~3分钟，W8000~1000化pm离屯、 1~3分钟，弃去上层溶液，下层含待测物溶液，将己膳的提取剂溶液用一次蒸馈水或去离 子水按3 : 1的质量比稀释，过0. 22ym滤膜过滤，待测；取饮料（功能性饮料和碳酸性饮 料）称取10血、混匀、离屯、，在8000巧m下离屯、3min，过0. 22滤膜待测。滤液加入至预先加 好一定量试剂A和B的检测池中。
[0009] 2.提取试剂配方及使用方法
[0010] 豆制品（豆皮、腐竹、豆排卷）；提取剂4血（己膳的3. 5ml，一次蒸馈水或去离子水 0.5ml);萃取剂：含有饱和己膳的正己烧溶液。
[0011] 3.检测
[0012] 将滤液加入至预先加好一定量试剂A和B的检测池中，祸旋或摇振均匀，置检测池 于便拉曼光谱仪检测室中在200~2500cnTi的范围内进行拉曼光谱扫描得到拉曼光谱图， 拉曼谱图中如在780cnTi(波数误差<IScnfi)处有特征峰，则判断样品添加了碱性嫩黄0， 反之则判定样品没有添加碱性嫩黄0。本发明的拉曼光谱法，所述水为二次蒸馈水或去离子 水。
[0013] 4.试剂A为银胶体水溶液，按照公知的方法制备即可；试剂B为可使A凝聚的含 C1-1的电介质，C1-1浓度范围为0. 1M~0.65M，优选为0.lM;pH为1-9,优选为7。
[0014] 所述试剂的用量如下：
[0015] (1)试剂A;100-300yL，优选为lOOuL;
[0016] (2)试剂B;100-300uL，优选为 100uL。
[0017] 0)试样滤液的加样量；100-500yL，豆制品优选为100yL、饮料优选为400yL。
[0018] 5.本发明所述拉曼光谱仪的激光光源发射波长为785nm，是手持式、便携式或台 式仪器。目前，中国检验检疫科学研究院、中检国研（北京）科技有限公司、必达泰克公司 可提供满足测试要求的便携式拉曼光谱仪。
[0019] 利用本发明时，后期的数据采集及结果分析步骤如下：
[0020] (1)用便携式拉曼光谱仪进行检测，激光能量参数选择300mw，积分参数选择3次， 该两个参数调节最佳拉曼峰强度，连续扫描拉曼光谱3次，最后得3次扫描光谱的平均光 谱。每一个光谱的扫描范围是200-2500cm-i，完成一个光谱扫描时间是Imin。
[0021] (2)用具有背景扣除功能的数据处理软件进行数据处理，获得基线平坦的拉曼图 谱，由于波数在200-300cnTi与2100-2500畑14之间谱图无明显特征峰且谱图之间差别很小， 所W选择300-2100cnTi之间作为本实验的考察范围。
[0022] (3)对比阴性豆制品和饮料样品、阳性豆制品和饮料样品拉平基线后的拉曼光谱 图，如780畑1 4 (波数误差<IScnfi)处出现了明显的拉曼峰，且信噪比> 3,则初步判断为添 加了碱性嫩黄0的阳性样品，如780cnTi(波数误差< 15畑14)处没有明显的峰，则初步判断 为没有添加碱性嫩黄0的阴性样品。因此，780cnTi(波数误差<IScnfi)处的特征峰是检测 食品中是否添加了碱性嫩黄0的重要依据，通过该特征峰可W对豆制品和饮料样品碱性嫩 黄0进行初筛分析。
[0023] (4)定量分析；根据780畑14 (波数误差< 15畑14)特征频率处碱性嫩黄0所对应的 相对信号强度与其浓度的线性关系做标准曲线，用该标准曲线可对豆制品、饮料中碱性嫩 黄0进行定量分析。
[0024] 本发明的表面增强拉曼光谱法，样品前处理简单，无需过柱净化过程，直接采用 振荡提取，然后将萃取净化，实验耗材成本低廉，进行食品定性和定量分析，通过拉曼谱图 780畑1 4 (波数误差< 15畑14)是否有碱性嫩黄0特征峰，判断豆制品和饮料中是否添加碱性 嫩黄0。其豆制品检出限线性范围和回收率见表1，饮料检出限线性范围和回收率见表2。 该方法操作简便快速，线性关系良好，分析结果直观可视，如使用便携式拉曼检测仪则可实 现现场快速检测，可对食品中是否添加了碱性嫩黄0进行现场快速的定量和定性检测。
[0025] 表1.饮料中碱性嫩黄0测定结果
[0026] 口ITv4i Lfl.丄-t-K丄人 T口口/ /T \ /.
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【附图说明】
[0029] 图1是碱性嫩黄0标准品水溶液的表面增强拉曼光谱图；
[0030]图2代表性饮料（碳酸饮料）阳性样品和阴性样品的表面增强拉曼光谱图（A.碳 酸饮料阳性样品；B.碳酸饮料阴性样品）；
[0031]图3代表性饮料（功能性饮料）添加碱性嫩黄0的标准曲线图
[0032] 图4代表性饮料（功能性饮料）阳性样品和阴性样品的表面增强拉曼光谱图 (A.功能性饮料阳性样品；B.功能性饮料阴性样品）；
[0033] 图5代表性饮料（功能性饮料）添加碱性嫩黄0百草枯的标准曲线图
[0034] 图6代表性豆制品（豆皮）阳性样品和阴性样品的表面增强拉曼光谱图（A.豆皮 阳性样品；B.豆皮阴性样品）；
[0035] 图7代表性豆制品（豆皮）添加碱性嫩黄0的标准曲线图
[0036] 图8代表性豆制品（腐竹）阳性样品和阴性样品的表面增强拉曼光谱图（A.腐竹 阳性样品；B.腐竹阴性样品）；
[0037] 图9代表豆制品（腐竹）添加碱性嫩黄0的标准曲线图
[003引图10代表性豆制品（豆排卷）阳性样品和阴性样品的表面增强拉曼光谱图（A.腐 竹阳性样品；B.腐竹阴性样品）；
[0039]图11代表豆制品（豆排卷）添加碱性嫩黄0的标准曲线图
【具体实施方式】
[0040] 实施例1 一种用于饮料中碱性嫩黄0现场快速检测的拉曼光谱法，包括W下具体 的步骤：
[00川样品制备：
[0042]称取饮料（功能性饮