一种酒中edta的lc-ms/ms正离子模式检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品检测技术领域。更具体地，涉及一种酒中EDTA的LC-MS/MS正离 子模式检测方法。
【背景技术】
[0002] 乙二胺四乙酸（EDTA)是一白色结晶颗粒或粉末状，难溶于水，常温下易与铁、铜、 钙等多种金属的多价离子形成稳定的水溶性络合体，以防止微量的金属多价离子引起的变 色、变质、及维生素C等营养物质的氧化、损失。近年来，EDTA作为一种新型的抗氧化剂添 加到酒类等食品中，达到保护营养成份、增加稳定性的作用。
[0003] 但是，EDTA对人体会产生多种负面作用，如刺激皮肤、黏膜、引起哮喘、皮肤发疹等 等，是一种可能引起过敏的物质，被摄取后会引起钙缺乏症、血压降低、肾脏障碍、染色体异 常和原生变异等一系列有害作用。
[0004] 因此，对于食品中EDTA的检测，尤其是对于微量EDTA的检测，至关重要。目前， 目前常用的检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、离子色谱法和毛细管电泳法等，但 是，都存在操作复杂、耗时长、高能耗、检测灵敏度低的问题，尤其是检测灵敏度低的问题， 无法满足大部分的含有微量m)TA的食品的检测。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是克服现有食品中EDTA检测技术的缺陷和不足，目的 是提供一种食品中H)TA的LC-MS/MS检测方法，该方法使用液相色谱-串联质谱仪检测，采 用苯硼酸作为衍生剂以消除酒中糖类的基质干扰，使得质谱响应度获得显著提高，本方法 尤其适用于酒中H)TA的测定。
[0006] 本发明另一目的是提供所述EDTA的LC-MS/MS检测方法的应用。
[0007] 本发明上述目的通过以下技术方案实现： 一种食品中EDTA的LC-MS/MS正离子模式检测方法，包括如下步骤： 51. 待测样品预处理 S11.吸取待测样品于可密闭的容器中，加入20.0 mg/L的苯硼酸溶液和10%胺类甲醇 溶液，密闭混匀处理； S12?步骤SI 1得到的溶液过0? 1 y m~0? 5 y m微孔滤膜，得滤液； 52. 取滤液至进样瓶，再加入胺类甲醇溶液，充分摇匀后，由液相色谱串联质谱测定。
[0008] 其中，优选地，步骤S11中，待测样品：苯硼酸溶液：胺类甲醇溶液的体积比 =0. 5 ~2 :0. 5 ~2 :6 ~10。
[0009] 更优选地，步骤S11中，待测样品：苯硼酸溶液：胺类甲醇溶液的体积比=1 :1 :8。
[0010] 优选地，步骤S11所述混勾处理的具体方法为：800rpm/min~2000rpm/min常温 恒温振荡15min~25min，或800rpm/min~2000rpm/min常温恒温祸旋2min~3min，或 800W ~2000W，30 ~80Hz 条件下超声 2min ~3min。
[0011] 更优选地，步骤S11所述混匀处理的具体方法为：1000rpm/min常温恒温振荡 20min，或 1000rpm/min 祸旋 2min，或 1500W，50 ~60Hz 条件下超声 2min。
[0012] 最优选地，步骤S11所述混匀处理的具体方法为：1000rpm/min常温恒温摇床振荡 20min〇
[0013] 优选地，步骤S12所述微孔滤膜的孔径为0. 2 ym。
[0014] 优选地，步骤S13所述滤液和胺类甲醇溶液的体积比为0. 05~0. 2 :0. 4。
[0015] 更优选地，步骤S13所述滤液和胺类甲醇溶液的体积比为0.1:0.4。
[0016] 另外优选地，上述胺类甲醇溶液为伯胺、仲胺或叔胺甲醇溶液。
[0017] 更优选地，上述胺类甲醇溶液为伯胺甲醇溶液。
[0018] 最优选地，上述胺类甲醇溶液为异丁胺甲醇溶液。
[0019] 进一步具体地，作为一种可实施的优选方案，步骤S2所述液相色谱串联质谱测定 的条件如下： (1) 色谱条件： 1) 色谱柱：Phenomenex Gemini C18,粒径5 y m，50 mm X 4. 6 mm; 2) 进样量：2 yL; 3) 柱温：35 °C ; 4) 流速：0. 2 mL/min ; 5) 流动相：水10v/v%，甲醇80 v/v%，0. 1%异丁胺甲醇溶液10 v/v% ; 6) 洗脱条件：平衡5 min，等度洗脱5 min ; (2) 质谱条件： 1) 离子化方式：电喷雾电离； 2) 扫描方式：正离子扫描； 3) 检测方式：多反应监测，即MRM ; 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达 到检测要求； 4) 监测离子对如下表所示：
表中的*为定M尚子对。
[0020] 利用本发明的检测方法检测EDTA的过程中，当需要定量检测EDTA含量时，以标准 品的特征离子中信号响应高且无干扰的离子为定量离子，进行外标法定量分析(定量离子 对为293. 0/160. 1);以标准溶液的响应峰面积为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，绘制标 准曲线或计算回归方程(标准曲线应至少包含5个浓度点，包括零点);依据测定的待测样品 响应峰面积，在标准曲线上查出或回归方程计算出样品中EDTA的含量。
[0021] 具体的计算方法为：根据标准曲线数据及样品的峰面积数据，通过软件处理可以 (1) 得到样品中EDTA的质量浓度，单位为mg/L，而我国GB2760-2011规定饮料中EDTA的残留量是pFnTA-9- 册链品由FF1TA-9-的话畏祕磨、擒如式;（1)计算；：
式中： W--样品中每1 kg待测样品中EDTA-2Na的残留量，单位为毫克（mg/kg); C一一样品待测溶液中H)TA-2Na的浓度，单位为毫克每升（mg/L); P一一样品的密度，单位为千克每升（kg/L); f--测定时稀释倍数； 1. 274--EDTA-2Na与EDTA的摩尔质量比。
[0022] 另外，当只需定性检测EDTA时，在相同测试条件下，样品中待检测物质与同时检 测的标准品应具有相同的保留时间，偏差在±2. 5%之内；样品中待确证的化合物的二对特 征离子的相对丰度比应与同时检测的标准品一致，相对误差在±30%。样品的LC-MS/MS数 据符合下列要求时，可判定为阳性： a :在相同试验条件下，样品中待测物质与标准品具有相同的保留时间，偏差在±2. 5 % 以内； b :监测离子的信噪比应彡3 ; c :如果达到前两项要求，则计算3个不同的比值。并且在样品含量对应的水平下同时 计算被测物标准响应离子的比值，对未知样品阳性结果的定性鉴定，所得到的离子比率应 在如表2规定范围内； 表2所应用的各种质谱相对离子强度最大允差
另外，由于本方法中用到易燃有毒化学品，例如甲醇，应避免吸入其蒸汽或直接与皮肤 接触，处理此类物质时可在通风橱内操作，必要时可佩带防护手套、防护镜或防毒面具。 [0023] 为了更准确稳定的控制检测质量，每一测定批次应使用已知量的样本做测定结果 的控制试验，做空白样品和添加5. 00 mg/kg水平标准的空白样品；被测物中EDTA的回收率 正常范围应在60. 0~120%，变异系数〈30%。
[0024] 本发明上述的检测方法在检测酒或低糖类非酒精饮料中EDTA含量方面的应用， 也应在本发明的保护范围之内。
[0025] 优选地，是在检测酒中EDTA含量方面的应用。
[0026] 最优选地，所述酒为葡萄酒、啤酒或白酒。
[0027] 本发明具有以下有益效果： 本发明检测方法对待测样品的预处理方法具有以下显著的优势： (1) 正离子模式实现了 m)TA的准确检测； (2) 解决了高糖含量基质效应； (3) -步法处理解决了现有方法耗时长、高能耗的问题，以及高浓度无机盐基质的问 题。
[0028] 本发明方法的样品预前处理仅需要量取三种既定浓度的物质（包括样品、伯胺溶 液和苯硼酸)，而且三种溶液的总用量只需〇. 5~1. 5 mL (具体视实际进样瓶的需求)，即可 实现高达90%~105%的回收率，既快速，准确度又高，定性检测限为0. 0001mg/kg，定量检 测限为0. 〇〇lmg/kg，应用本方法可以解决现有方法检测限过高，无法测定低浓度EDTA的问 题。
[0029] 另外，本发明检测手段也无需应用复杂的分离萃取手段，避免了方法误差。
[0030] 而且，本发明检测过程不需要使用Fe (III) (b)和Cu (II)无机盐，避免了难挥发 物质对质谱检测仪以及检测结果的影响。
【附图说明】
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