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【主权项】
1. 一种通过检测指示活动性结核病的替代标记物抗体诊断结核病的方法，所述方法包 括步骤： 取出结核分枝杆菌来源的分离的分枝菌酸抗原或其合成的类似物在脂质体载体中制 备含分枝菌酸抗原的脂质体； 在电极上固定所述结核分枝杆菌来源的分离的分枝菌酸抗原或其合成的类似物，以在 所述电极上制备结核分枝杆菌来源的固定抗原； 从疑似患有活动性结核病的人类或动物中获得诊断样品，所述诊断样品可能含有针对 所述固定抗原的替代标记物抗体； 稀释部分或全部所述诊断样品，并将所述稀释的样品的部分或全部分为第一样品和第 -?样品； 通过用氧化还原探针与所述第一样品结合制备对照样品，并将所述对照样品暴露于含 有所述分枝菌酸抗原的脂质体； 通过用氧化还原探针与所述第二样品结合制备测试样品，并将所述测试样品暴露于不 含有分枝菌酸抗原的脂质体； 将所述对照样品与所述固定分枝菌酸抗原接触，以使得在所述对照样品中的任何抗体 结合到所述固定分枝菌酸抗原； 将所述测试样品与所述固定分枝菌酸抗原接触，以使得在所述测试样品中的任何抗体 结合到所述固定分枝菌酸抗原；以及 通过电化学阻抗谱比较所述对照样品和所述测试样品中的抗体结合到所述固定分枝 菌酸的程度，观察到的由所述对照样品示出的任何较低的结合是所述诊断样品中存在针对 所述分枝菌酸抗原的抗体的指标，该指标表示所述诊断样品来源的人类或动物患有活动性 结核病，从而由此诊断所述人类或动物患有活动性结核病。2. 根据权利要求1中所述的方法，其中所述分枝菌酸抗原的固定是通过直接将其结合 到自组装单层，以在所述电极上获得含分枝菌酸抗原的自组装单层。3. 根据权利要求2中所述的方法，其中所述自组装单层包括硫醇化的疏水性物质。4. 根据权利要求3中所述的方法，其中所述硫醇化疏水性物质是十八烷硫醇。5. 根据权利要求3或4中所述的方法，其中所述电极是丝网印刷电极，所述电极具有含 所述分枝菌酸抗原的自组装单层，所述自组装单层以涂层的形式在所述丝网印刷电极的表 面上。6. 根据权利要求5中所述的方法，其包括通过首先将所述电极表面暴露于所述疏水性 物质，其后将其暴露于所述分枝菌酸抗原，以形成所述含有分枝菌酸抗原的自组装单层。7. 根据权利要求5中所述的方法，其包括通过将所述电极表面暴露于所述疏水性物质 和所述分枝菌酸抗原的混合物中，以形成所述含有分枝菌酸抗原的自组装单层。8. 根据权利要求5至7中任一项所述的方法，其中所述对照样品和所述测试样品依次 接触相同的丝网印刷电极的固定抗原。9. 根据权利要求5至7中任一项所述的方法，其中当所述对照样品和所述测试样品依 次与所述相同的丝网印刷电极的固定抗原接触时，所述测试样品代替所述对照样品，在所 述丝网印刷电极的固定抗原与所述对照样品进行接触和所述丝网印刷电极的固定抗原与 所述测试样品进行接触之间，无需对所述丝网印刷电极进行任何洗涤。10. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分枝杆菌的感染是引起选自肺 部结核病和肺外结核病的疾病的感染类型。11. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分枝菌酸抗原是从结核分枝杆 菌中提取的，并且所述抗体是抗结核分枝杆菌的抗体，或抗其分枝菌酸组分的抗体。12. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分枝菌酸抗原是选自同源化合 物或非同源化合物的混合物的形式。13. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述诊断样品选自血液样品、脊髓液 样品和天然地含有抗体的样品。14. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述诊断样品选自HIV阳性的人类。15. 根据权利要求14所述的方法，其中所述抗体是低亲和力的抗体。16. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述对照样品和所述测试样品暴 露于所述脂质体，可以包括将所述对照样品与含有所述分枝菌酸抗原的脂质体进行预培 养，并将所述测试样品与不含所述分枝菌酸抗原的脂质体进行预培养。17. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述人类或动物的诊断可以在获得 所述诊断样品的24小时之内进行。18. 根据权利要求17所述的方法，其中所述人类或动物的诊断可在获得所述样品的同 一天进行。19. 一种用于通过检测指示活动性结核病的替代标记物抗体诊断结核病的试剂盒，所 述试剂盒包括一个或多个丝网印刷电极，结核分枝杆菌来源的分离的分枝菌酸抗原或其合 成的类似物，缓冲液形成试剂，氧化还原探针形成试剂和脂质体形成试剂。
【专利摘要】制备了含有分枝菌酸抗原的脂质体以及结核分枝杆菌来源的电极固定抗原。将从疑似患有结核病的人类获得的诊断样品稀释，并将该诊断样品分为第一样品和第二样品。含有所述第一样品和氧化还原探针的对照样品暴露于所述脂质体。含有所述第二样品和氧化还原探针的测试样品暴露于不含分枝菌酸抗原的脂质体。所述对照样品与所述固定抗原接触，以使得在其中的抗体结合到所述抗原。所述测试样品与所述固定抗原接触，以使得在其中的抗体结合到所述抗原。通过电化学阻抗谱比较所述样品中结合的程度。任何观察到的所述对照样品的较低程度的结合是在所述诊断样品中的抗体结合到所述抗原的指标，表明人患有结核病。
【IPC分类】G01N33/569, G01N33/543
【公开号】CN105378482
【申请号】CN201480040159
【发明人】贾恩·阿德里亚努斯·维厄斯库, 卡尔·鲍迈斯特
【申请人】比勒陀利亚大学
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2014年5月15日
【公告号】EP2997371A1, US20160169905, WO2014184768A1