含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及食品检测技术领域，尤其设及一种快速检测保健食品中维生素化含量 的方法。
【背景技术】
[0002] 维生素化为固醇类衍生物，又称胆巧化醇，主要来源于膳食摄入或紫外线照射下 体内合成，能促进体内巧元素、憐元素的吸收，对儿童何僕病及成人缺巧导致的疾病起到很 好的预防作用。因此，维生素化常被应用于补巧类的保健食品中。
[0003]目前，在我国，对于保健食品中维生素化含量的检测，国家还未给出标准方法，但 是保健食品的检测需求量与日俱增，而对维生素D的检测方法主要有酶联免疫法、高效液 相色谱法、高效液相色谱串联质谱法。
[0004] 其中，酶联免疫法主要针对血浆样品，其操作和设备都较为简单，但是，适用范围 小，无法对基质复杂的保健食品进行检测，例如蜂蜡制品、鱼油制品等。
[0005] 高效液相色谱法，主要依据GB5413. 9-2010的方法，该方法主要针对婴幼儿食品 和乳品，采用正相-反相双系统检测，步骤繁琐，且操作时间长，易损失，对操作人员的技术 要求和实验室仪器条件要求非常高，操作人员在得到预处理样液后需要立刻进入正相系统 分离且收集需要的保留时间段内的液体，并立刻予W氮吹，总处理时间过长则极易破坏维 生素的含量。同时，对于实验室要求很高，需要同时拥有两台液相仪器或一套在线切换装 置，其费用成本很高。
[0006] 高效液相色谱串联质谱法，主要是采用同位素内标检测，该方法灵敏度高，但是同 位素标准价格昂贵，不适用于日常工作大量样品的检测，购买同位素内标的价格超过一般 实验室的检测费用很多倍，且国内没有生产厂家，需从国外购买，等待周期很长。
[0007] 为此，需要建立一种既经济简便，且适用范围广、易普及的方法，用于检测保健食 品中维生素化的含量，为保健食品检测的日常工作提供参考方法。
【发明内容】
[0008] 本发明提供了一种快速检测保健食品中维生素化含量的方法，该方法可W快速测 定保健食品中维生素化含量，样品经固相萃取净化后可消除杂峰的干扰，且峰形较好，回收 率高，快速简便，是测定保健食品中维生素化含量的有效定量方法。
[0009] 一种快速检测保健食品中维生素化含量的方法，包括W下步骤：
[0010] (1)取待测样品，经皂化、萃取后，获得预处理样液；
[0011] (2)采用硅胶柱固相萃取净化技术，对预处理样液进行净化，获得待测样液；
[0012] (3)利用超高效液相色谱技术对待测样液中的维生素进行鉴定，获得保健食品 中维生素化的含量。
[0013] 作为优选，步骤（1)中，所述皂化的溫度为80°C，时间为35min。实验表明，当皂化 溫度为80°C，皂化35min后，即可皂化完全，且被测物质不被破坏，低于此溫度时需要延长 皂化时间，高于此溫度容易使待测物质氧化。
[0014] 作为优选，皂化过程中，采用质量分数为30%的氨氧化钟水溶液作为皂化液处理 待测样品；可使待测样品皂化完全。
[0015] 为防止待测样品在预处理过程中被氧化，影响检测效果，作为优选，皂化过程中， 向待测样品中同时加入抗坏血酸、焦性没食子酸和2, 6-二叔下基对甲酪。更优选，所述抗 坏血酸、焦性没食子酸、2, 6-二叔下基对甲酪与预处理样液的质量比为1.5:1.0:0. 1:10。
[0016] 作为优选，萃取过程中，采用石油酸作为萃取剂。萃取次数至少3次。
[0017] 预处理后的样液无需进行正相-反相双系统操作，而是经固相萃取净化后，直接 进反相UPLC-PDA液相系统。所述的固相萃取净化技术，包括：硅胶柱的活化，预处理样液的 上样、淋洗除杂、样液洗脱并收集、收集液吹干并溶解和过滤。其中，作为优选，采用二氯甲 烧和正己烧淋洗活化硅胶柱，加入所述预处理样液后，依次用正己烧、体积比为1:1的环己 烧：正己烧溶液淋洗硅胶柱去除杂质。所述体积比为1:1的环己烧：正己烧溶液中还加入 体积分数为0. 8 %的异丙醇。
[0018] 优选地，采用体积百分比为40:60的乙酸乙醋：正己烧溶液作为洗脱液，洗脱率更 局。
[0019] 作为优选，步骤（3)中，色谱的条件为：色谱柱：WatersAC卵口YUPLC邸ΗC18柱 (1. 7μπι，2.ImmXlOOmm);流动相：甲醇 + 水巧5+5);流速0. 3mL/min;柱溫：40。二极管阵 列检测器检测；检测波长：264nm;进样量为5μL。
[0020] 与现有技术相比，本发明具有W下有益效果：
[0021] (1)本发明采用固相萃取-超高效液相色谱S阳-UPLC-PDA法检测保健食品中维生 素化含量，改变传统高效液相色谱HPLC法需要正相-反相双系统操作的方法，改善了前处 理时间长、有效成分易破坏、对操作人员技术要求高、对实验室仪器数量要求多等问题，使 得维生素化在经皂化、萃取、定容后直接过固相萃取柱净化，进反相UPLC-PDA液相系统上 样，5分钟内出峰，极大的缩短了实验的时间，提高了检测效率。
[0022] (2)本发明通过改变皂化溫度和皂化时间，使得样品能够皂化充分，减少杂质干 扰、提高了回收率。
[0023] (3)本发明方法能够满足实际工作需要，填补了保健食品中维生素化含量标准方 法的空白，是测定保健食品中维生素化含量的高效、有效的定量方法。
【附图说明】
[0024] 图1为不同体积比例的洗脱液的洗脱效果比较；
[00巧]图2为标准溶液的色谱图；
[0026] 图3为待测样品的色谱图；
[0027] 图4为待测样品加标色谱图。
【具体实施方式】
[002引一、仪器与试剂
[0029] AC卵口ΥI化ASSUPLC超高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器（PDA)(美国 Waters公司）；电子天平（METTLERTOLEDO);加热磁力揽拌器（IKA公司）；固相萃取仪（北 京卓信伟业科技有限公司）；旋转蒸发仪度UCHI公司）；氮吹仪（天津奥特赛恩斯仪器有限 公司）；数控超声清洗器（北京卓信伟业科技有限公司）。
[0030] 维生素D3标准品（Sigma公司）；甲醇（色谱纯，德国默克公司，批号： 口28707408)、正己烧（色谱纯，德国默克公司，批号：Κ45420591410);乙酸乙醋（色 谱纯，德国默克公司，批号：1623268206);异丙醇（色谱纯，德国默克公司，批号： K45535140420);二氯甲烧（色谱纯，TEDIA，批号：1007096);石油酸（分析纯，北京化工 厂，批号：20120927);氨氧化钟（分析纯，杭州萧山化学试剂厂，批号：20131029);抗坏血 酸（广东光华科技股份有限公司，批号：20140102);焦性没食子酸（分析纯，遵义林源医 药化工有限责任公司，批号：121026);无水乙醇（分析纯，安徽安特食品股份有限公司， 1311073601);氯化钢（分析纯，上海试四赫维化工有限公司，批号：140201) ;2, 6-二叔下 基对甲酪（国药集团化学试剂有限公司，批号：F20080509);无水硫酸钢（分析纯，上海试 四赫维化工有限公司，批号：130101,经过400°C烘烤4h);超纯水由Milli-Q超纯水机制得 (美国Millipore公司）；硅胶柱（杭州福裕科技服务有限公司，500mg/6mL)。
[0031] 二、标准溶液的配制
[0032] 避光条件下，准确称取维生素化标准品，用乙醇配制成理论浓度Img/mL的标准 储备液，乙醇逐级稀释后在264nm波长下分光光度计校正并计算校正液实际浓度，然后按 稀释倍数计算标准储备液实际浓度。吸取上述储备液适量，甲醇稀释，配制标准曲线为 0. 1