施例中，酸为磷酸、甲酸、冰乙酸或三氟乙酸中的一种或两 者以上的混合物。
[0056] 作为优选，酸为磷酸。
[0057] 在本发明提供的一些实施例中，在酸的水溶液中，酸的体积百分数为0.1%~ 0.5%〇
[0058]在本发明提供的一些实施例中，在酸的水溶液中，磷酸、甲酸或三氟乙酸的体积百 分数为〇. 1 %。
[0059]在本发明提供的一些实施例中，在酸的水溶液中，冰乙酸的体积百分数为0.5%。 [0060] 作为优选，HPLC检测的流动相流速为0.8~1.5mL/min。
[0061 ] 优选地，HPLC检测的流动相流速为1 .OmL/min。
[0062] 作为优选，HPLC检测的柱温20°C~40°C。
[0063] 优选地，HPLC检测的柱温30°C。
[0064] 作为优选，C18色谱柱为Thermo syncronis C18色谱柱、Agilent 5TC-C18色谱柱、 Kromasil 100-5C18色谱柱、Waters symmetry C18色谱柱或Phenomenex Luna C18色谱柱。
[0065] 在本发明提供的一些实施例中，C18的柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μπι，以 (4 · 6 X 250mm，5μηι)表不。
[0066] 在本发明提供的一些实施例中，HPLC检测的理论板数不低于3000。
[0067 ]作为优选，参乌益肾片供试品溶液的制备方法为:取参乌益肾片与乙醇水溶液混 合，超声提取，冷却，乙醇水溶液补足减失质量，混匀，过滤，取续滤液过滤膜，得到参乌益肾 片供试品溶液。
[0068] 作为优选，乙醇水溶液的体积百分数为60%~80%。
[0069]优选地，乙醇水溶液的体积百分数为70%。
[0070]作为优选，以g/mL计，参乌益肾片与乙醇水溶液的比例为1: (40~60)。
[0071]优选地，以g/mL计，参乌益肾片与乙醇水溶液的比例为1:50。
[0072] 作为优选，超声的功率为100~500W，频率为10~100kHz。
[0073] 优选地，超声的功率为250W，频率为40kHz。
[0074] 作为优选，超声提取的时间为40~50min。
[0075] 优选地，超声提取的时间为45min。
[0076] 在本发明提供的一些实施例中，滤膜的孔径为0.22μπι。
[0077] 在本发明提供的一些实施例中，建立参乌益肾片指纹图谱采用的软件为中药色谱 指纹图谱相似度评价系统。
[0078] 在本发明提供的一些实施例中，参乌益肾片供试品的批次为5~15批次。
[0079] 作为优选，参乌益肾片供试品的批次为10批次。
[0080] 本发明提供了参乌益肾片成分检测方法及指纹图谱构建方法。该参乌益肾片成分 检测方法为：取参乌益肾片供试品溶液以及标准品溶液进行HPLC检测，HPLC检测的色谱条 件为:采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A相、酸的水溶液为流动相B相，梯度洗脱程序为:0~ 15min，8% ~20% 乙臆；15~30111；[11，20%~30%乙臆；30~50111；[11，30%~90%乙臆；50~ 60min，90%乙腈;根据HPLC检测结果，获得参乌益肾片成分及其含量。本发明至少具有如下 优势之一：
[0081] 通过对照品比对，确定了3个成分，分别为二苯乙烯苷（2,3,5,4'_四羟基二苯乙 烯-2-〇-i3_D-葡萄糖苷）、芍药苷、芍药内酯苷，并对其进行定量分析，本发明检测条件下样 品中除目的成分外不含有其它干扰成分。结果显示本发明提供的检测方法具有良好的精密 度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高，耐用性良好；
[0082] 参乌益肾片指纹图谱的分离度、重现性均较好，信息全面，标示出13个共有峰，各 批次样品相似度在〇. 96以上；
[0083] 本发明同时对参乌益肾片指纹图谱和3个指标成分进行分析，快速、简便、准确，可 作为全面评价该制剂质量的有效方法之一。
【附图说明】
[0084]图1示230nm检测波长下的色谱图，其中线A示二苯乙烯苷、芍药苷、芍药内酯苷的 混合对照品溶液，线B示参乌益肾片供试品溶液，线C示不含制何首乌的阴性样品，线D示不 含赤苟的阴性样品；1号峰示苟药内酯苷(albiflorin)，2号峰示苟药苷(paeoniflorin)，4 号峰不二苯乙稀苷（2，3，5，4，-Tetrahydroxystilbene-2-〇-beta_D-glucopyranoside);
[0085] 图2示320nm检测波长下的色谱图，其中线A示二苯乙烯苷、芍药苷、芍药内酯苷的 混合对照品溶液，线B示参乌益肾片供试品溶液，线C示不含制何首乌的阴性样品，线D示不 含赤芍的阴性样品;4号峰示二苯乙烯苷；
[0086] 图3示参乌益肾片指纹图谱；1~13为共有峰；130701、130303、130902、130903、 130904、130905、130607、130102、130103 和 130107 为参乌益肾片批号；
[0087] 图4示参乌益肾片指纹图谱中共有峰的归属;其中1、2、5号峰来源于赤芍，3号峰来 源于菟丝子与车前子，4号峰来源于制何首乌，6、7、8、9、10号峰来源于熟大黄，11、13号峰来 源于熟大黄和制何首乌，12号峰来源于熟大黄和麸炒苍术。
【具体实施方式】
[0088] 本发明公开了参乌益肾片成分检测方法及指纹图谱构建方法，本领域技术人员可 以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本 领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经 通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文 所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0089] 本发明参乌益肾片成分检测方法及指纹图谱构建方法中所用试剂、仪器均可由市 场购得：
[0090] Agilent 1200高效液相色谱仪，DAD紫外检测器（美国安捷伦公司）；Mettler AE240电子分析天平（瑞士梅特勒公司）；BP211D型电子分析天平（德国赛多利斯公司）； Centrifuge 541f5D高速离心机(德国eppendorf公司）；Milli_Q Academic纯水机(美国密理 博公司）;KQ-250DB型超声波清洗仪(昆山超声仪器有限公司）；
[0091] 参乌益肾片（江苏康缘药业股份有限公司生产，批号为130701、130303、130902、 130903、130904、130905、130607、130102、130103 和 130107);对照品二苯乙烯苷（批号 110844-201109,质量分数以94.7%计）、芍药苷（批号110738-201337,质量分数以94.9% 计），购自中国食品药品检定研究院，芍药内酯苷(批号MUST-14031214,纯度298.0%)，购 自成都曼斯特生物科技有限公司；乙腈(色谱纯，美国天地公司），水为超纯水，其余试剂均 为分析纯。
[0092] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0093] 实施例1~5参乌益肾片成分定量检测方法
[0094]对照品溶液的制备:取对照品二苯乙烯苷、芍药苷、芍药内酯苷适量，精密称定，加 70 %乙醇制成含二苯乙烯苷86.86yg/mL、芍药苷60.01yg/mL、芍药内酯苷88.32yg/mL的混 合对照品溶液，即得。
[0095]供试品溶液的制备:取供试品内容物，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 精密加入70%乙醇501^，称定质量，超声（2501，401^取）提取451^11，放冷，再称定质量，用 70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液过0.22μπι滤膜，即得。
[0096] 色谱柱梯度洗脱程序：0~15min，8%~20%乙腈，15~30min，20%~30 %乙腈，30 ~5〇111；[11，30%~90%乙臆，50~60111；[11，90%乙臆。
[0097]进样量为10yL;理论板数按二苯乙烯苷峰计算不低于3000。
[0098] 二苯乙烯苷定量测定检测波长:320nm。
[0099]其他色谱条件选择如表1所示：
[0100]表1本发明实施例1~5的色谱条件 [0101]
[0103] 按照表1所示色谱条件，采用本发明提供的梯度洗脱程序，分别对对照品溶液和供 试品溶液进行色谱分析。其中，采用实施例1中提供的色谱条件对对照品溶液和供试品溶液 进行分析所得色谱图如图1、2所示。
[0104] 图1为230nm检测波长下的色谱图，其中线A示二苯乙烯苷、芍药苷、芍药内酯苷的 混合对照品溶液，线B示参乌益肾片供试品溶液，线C示不含制何首乌的阴性样品，线D示不 含赤苟的阴性样品。1号峰示苟药内酯苷(albiflorin)，2号峰示苟药苷(paeonif lorin)，4 号峰不二苯乙稀苷（2，3，5，4，-Tetrahydroxystilbene-2-〇-beta_D-glucopyranoside) 〇
[0105] 图2为320nm检测波长下的色谱图，其中线A示二苯乙烯苷、芍药苷、芍药内酯苷的 混合对照品溶液，线B示参乌益肾片供试品溶液，线C示不含制何首乌的阴性样品，线D示不 含赤苟的阴性样品。4号峰示二苯乙稀苷（2，3，5，4 '-TetrahydroxystilbeneK-beta-D-glucopyranoside) 〇