>[0106] 采用其他实施例提供的色谱条件对标准品溶液和待检溶液进行分析的色谱图与 此相似。
[0107] 实施例6精密度试验
[0108] 采用实施例1提供的检测方法，取同一供试品（批号130701)溶液连续进样6针，以 峰面积计算各指标成分RSD，分别为二苯乙烯苷0.37 %、芍药苷0.33 %、芍药内酯苷0.28 %。 以二苯乙烯苷为参照峰，计算各个共有峰相对保留时间RSD均小于0.20%，13个共有峰相对 峰面积RSD均小于3.05%。
[0109] 实施例7线性关系的考察
[0110] 精密称取二苯乙烯苷、芍药苷、芍药内酯苷适量，加70%乙醇制成含二苯乙烯苷 351.3yg/mL、芍药苷、186.3yg/mL、芍药内酯苷174.9yg/mL的混合对照品溶液，将其作为母 液用70%乙醇逐倍稀释，分别精密吸取10yL，注入液相色谱仪，采用实施例1提供的检测方 法测定，以进样质量浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)进行线性拟合，得线性回归方程 分别为Y = 38 · 2290X+9 · 3690，r = 1 · 0000; Y= 11 · 5062X+10 · 0724，r = 1 · 0000; Υ = 9 · 8139X+ 5.5938，r= 1.0000。二苯乙烯苷、芍药苷、芍药内酯苷分别在35.13~351.3yg/mL、18.63~ 186.3yg/mL、17.49~174.9yg/mL范围内呈良好的线性关系。
[0111] 实施例8稳定性试验
[0112] 取同一对照品溶液，精密吸取1 OyL，分别于0、3、6、10、16、20、24h注入高效液相色 谱仪，以峰面积为指标计算各成分RSD值，结果分别为二苯乙烯苷0.08%、芍药苷0.13%、芍 药内酯苷0.15%。
[0113]取同一供试品（批号130701)内容物，研细，取约1 g，精密称定，按上述供试品溶液 的制备方法制备供试品溶液，精密吸取1 〇yL，分别于0、2、6、9、14、18、24h注入液相色谱仪， 采用实施例1提供的检测方法进行检测，以峰面积为指标计算各成分RSD值，二苯乙烯苷 0.54%、芍药苷0.57%、芍药内酯苷1.30%。以二苯乙烯苷为参照峰，计算各个共有峰相对 保留时间RSD均小于1.05%，13个共有峰相对峰面积RSD均小于2.98%。结果表明对照品溶 液和供试品溶液放置24h稳定性良好。
[0114]实施例9重复性试验
[0115]取同一供试品（批号130701)内容物，研细，取约1 g，精密称定，按上述供试品溶液 的制备方法制备供试品溶液，平行制备6份，采用实施例1提供的检测方法测定，计算质量分 数。二苯乙烯苷、芍药苷、芍药内酯苷的平均质量分数结果分别为0.70、0.35、0.27mg/g，RSD 分别为0.32%、0.76%、1.33%。以二苯乙烯苷为参照峰，计算各个共有峰相对保留时间RSD 均小于0.85%，13个共有峰相对峰面积RSD均小于2.55%。结果表明本方法重复性良好。 [0116]实施例10回收率试验
[0117]取同一供试品（批号130701)内容物，研细，取0.5g，取9份，精密称定，置具塞锥形 瓶中，3份一组，分别精密加入混合对照品溶液(含二苯乙烯苷350.0 yg/mL、芍药苷176.4yg/ 1111^、苟药内酯苷135.6以8/1111^)0.81111^、11111^、1.21111^，再精密加入70%乙醇至5〇1111^，超声提取 (250W，40kHz) 45min，放冷，滤过，取续滤液过0.22μπι滤膜，注入高效液相色谱仪，采用实施 例1提供的检测方法测定，计算回收率。结果二苯乙烯苷、芍药苷、芍药内酯苷的平均回收率 分别为99.58%、100.21%、99.63%，1?0分别为0.94%、0.95%、1.32%。
[0118] 采用实施例2~5的检测方法同样具有良好的精密度、线性关系、稳定性、重复性， 回收率高。
[0119] 由上述试验结果显示:230nm下反应的信息较全面，色谱峰较全面且各色谱峰分离 较好，选择230nm测定苟药苷、苟药内酯苷的含量；同时，选择320nm测定二苯乙稀苷的含量。 并且对3个指标成分进行了峰纯度验证，结果表明在本发明所确定的检测条件下样品中所 测定的3个成分不含其他干扰成分。方法学验证试验结果表明本发明所采用的检测方法耐 用性良好。
[0120] 实施例11采用本发明提供的检测方法对不同批次产品测定试验
[0121]取10批参乌益肾片，按实施例1提供的供试品溶液制备方法和色谱条件进样分析， 分别计算3种成分的量，结果见表2。结果表明，不同批次胶囊中3种成分的含有量差异较小。 [0122]表2样品测定结果(n = 2)
[0123]
[0124] 实施例12指纹图谱的建立与技术参数
[0125] 根据10批参乌益肾片检测所得图谱，标定13个共有峰，采用国家药典颁布的《中药 色谱指纹图谱相似度评价系统A版》进行分析，经数据匹配，以中位数法建立对照指纹图谱， 见图3。10批所测供试品色谱图与对照指纹图谱相似度分别为0.984、0.970、0.977、0.981、 0·992、0·968、0·971、0·978、0·987和0·997。
[0126] 指纹图谱中共有峰的归属:将熟大黄、车前子、泽泻、茯苓、赤芍、泽兰、怀牛膝、枸 杞子、麸炒苍术、太子参、菟丝子、制何首乌药材分别按处方量取样后以实施例1提供的检测 方法进行分析，通过保留时间和DAD扫描分析，指纹图谱中标定的13个共有峰分别来自车前 子、熟大黄、赤芍、菟丝子、麸炒苍术、制何首乌药材，其中1、2、5号峰来源于赤芍，3号峰来源 于菟丝子与车前子，4号峰来源于制何首乌，6、7、8、9、10号峰来源于熟大黄，11、13号峰来源 于熟大黄和制何首乌，12号峰来源于熟大黄和麸炒苍术，结果见色谱图4。
[0127]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种参乌益肾片成分检测方法，其特征在于，取参乌益肾片供试品溶液以及标准品 溶液进行HPLC检测，所述HPLC检测的色谱条件为： 采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A相、酸的水溶液为流动相B相，梯度洗脱程序为:0~ 15min，8% ~20% 乙臆；15~30111；[11，20%~30%乙臆；30~50111；[11，30%~90%乙臆；50~ 60min，90% 乙臆； 根据HPLC检测结果，获得参乌益肾片成分及其含量。2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述HPLC检测的波长为210nm~250nm 和/或320nm。3. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述酸为磷酸、甲酸、冰乙酸或三氟乙 酸中的一种或两者以上的混合物。4. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在所述酸的水溶液中，所述酸的体积 百分数为0.1 %~0.5%。5. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述HPLC检测的流动相流速为0.8~ 1·5mL/min〇6. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述HPLC检测的柱温20°C~40°C。7. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述C18色谱柱为Thermosyncronis C18色谱柱、Agilent5TC-C18色谱柱、Kromasil100-5C18色谱柱、WaterssymmetryC18色 谱柱或？116110111611611^111&(]18色谱柱。8. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述标准品溶液为二苯乙烯苷标准品 溶液、芍药苷标准品溶液或芍药内酯苷标准品溶液中的一种或两者以上的混合物。9. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述参乌益肾片供试品溶液的制备方 法为:取参乌益肾片与乙醇水溶液混合，超声提取，冷却，乙醇水溶液补足减失质量，混匀， 过滤，取续滤液过滤膜，得到参乌益肾片供试品溶液。10. -种参乌益肾片指纹图谱构建方法，其特征在于，取不同批次的参乌益肾片供试品 溶液进行HPLC检测，所述HPLC检测的色谱条件为： 采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A相、酸的水溶液为流动相B相，梯度洗脱程序为:0~ 15min，8% ~20% 乙臆；15~30111；[11，20%~30%乙臆；30~50111；[11，30%~90%乙臆；50~ 60min，90% 乙臆； 根据HPLC检测结果，标定共有峰，以中位数法建立参乌益肾片指纹图谱。
【专利摘要】本发明涉及分析化学领域，特别涉及参乌益肾片成分检测方法及指纹图谱构建方法。该参乌益肾片成分检测方法为：取参乌益肾片供试品溶液以及标准品溶液进行HPLC检测，HPLC检测的色谱条件为：采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A相、酸的水溶液为流动相B相，梯度洗脱程序为：0～15min，8％～20％乙腈；15～30min，20％～30％乙腈；30～50min，30％～90％乙腈；50～60min，90％乙腈；根据HPLC检测结果，获得参乌益肾片成分及其含量。本发明对参乌益肾片指纹图谱和3个指标成分进行分析，快速、简便、准确，可作为全面评价该制剂质量的有效方法之一。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105467052
【申请号】CN201510795368
【发明人】萧伟, 潘有智, 张道利, 秦建平, 李家春, 仲海洁, 黄文哲, 王振中, 周习
【申请人】江苏康缘药业股份有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年11月18日