一种3-氨基哌啶异构体的hplc分析方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种3-氨基哌啶异构体的HPLC分析方 法。
【背景技术】
[0002] (R)-3_氨基哌啶是Π 型糖尿病新药利拉利汀、阿格列汀的重要中间体。利拉利汀、 阿格列汀分子结构中只有一个手性中心，由中间体(R)-3_氨基哌啶引入，因此(R)-3_氨基 哌啶的光学纯度直接决定了利拉利汀、阿格列汀的光学纯度和药效。
[0003] 相比示差折光检测器，紫外检测器具有更高的灵敏度和稳定性。但由于3-氨基哌 啶及其手性异构体紫外吸收很弱，使用常规的紫外检测存在末端吸收干扰等问题，通常采 用衍生化方法使之紫外吸收增强从而提高检测灵敏度，再通过手性色谱进行分析检测。 [0004] Meek等采用Crownpak? CR+( 150 X 4 · 6mm)手性柱，示差折光检测器直接对3-氨基 哌啶进行检测，Sakarai等采用二对甲基苯甲酰L-酒石酸为衍生化试剂对3-氨基哌啶进行 衍生化，采用GL Science Inertsil 0DS-2(150X4.6mm)手性柱，254nm下对衍生物进行分 析。Watanabe等人采用氯甲酸丙酯为衍生化试剂对3-氨基哌啶进行衍生，采用CHIRALCEL AS-RH (150 X 4.6mm)手性柱在254nm下对衍生物进行分析。孙凤霞等（CN104007202A CN104034814A)采用苯甲酰氯为衍生化试剂对3-氨基哌啶分别进行单衍生化和双衍生化， 使用CHIRAL-AGP( 150 X 4.6mm)手性柱，在254nm下对衍生物进行分析。示差折光检测器灵敏 度低，进样量大，误差较大。而以紫外进行的检测，既衍生化又采用价格昂贵的手性柱。
[0005] 3-氨基哌啶分子结构中有两个氮原子，由于氮原子的孤对电子能量较低，所以3-氨基哌啶在紫外区几乎无吸收，建立快捷的、准确可靠的光学纯度分析方法难度非常的大。 通过与带紫外吸收的手性试剂进行快速双衍生化，得到既有紫外吸收又形成三个手性基团 的衍生物，能够直接在反相高效液相与紫外联用上进行异构体的分析。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种3-氨基哌啶异构体的HPLC分析 方法，可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率分析。
[0007] 为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下： 一种3-氨基哌啶异构体的HPLC分析方法，具体包含如下步骤： 步骤一、衍生化 将3-氨基哌啶溶于有机溶剂中，在一定的温度条件下，以(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯为衍 生化试剂，控制3-氨基哌啶和(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比，进行双衍生化反应，得到 衍生化后的3-氨基哌啶，反应式见式I;
式I 步骤二、分离检测 采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的3-氨基哌啶进行定性、定量和对映 体过量率测定。
[0008] 所述的有机溶剂选自甲苯、二甲苯、石油醚、四氢呋喃、庚烷和己烷中的一种或两 种以上的组合。
[0009] 所述的有机溶剂与3-氨基哌啶的体积比为0.1~300:1，优选的为1~20:1。
[0010] 所述的一定温度是指从0°C到回流温度，优选为15~35°C。
[0011] 本发明的回流温度具体数值与有机溶剂的选择有关，本领域技术人员可以根据溶 剂的选择清楚的确定回流温度的范围。
[0012] 所述的3-氨基哌啶和(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比为1:2~20。
[0013] 所述的紫外检测器的检测波长为210~300nm，优选220~260nm。
[0014] 所述的反相高效液相色谱的色谱柱固定相为烷基键合硅胶，优选的色谱柱固定相 为十八烷基硅烷键和硅胶，最优的为迪马反相十八烷基硅烷键和硅胶柱(250 X 4.6mm，5um， pH 范围2.0 ~8.0)。
[0015] 所述的反相高效液相色谱的流动相由有机溶剂和酸的水溶液组成，有机溶剂选自 甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、四氢呋喃、丙酮和乙腈中的一种或两种;有机溶剂占流动相的 体积比例范围为30%~90%，优选范围为40%~80%。
[0016] 所述的酸的水溶液中的酸选自无机酸或有机酸，包括盐酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙 酸、三氟乙酸、烷基磺酸钠、苯磺酸、取代苯磺酸、五氟丙酸、七氯丁酸、九氟戊酸、十一氟己 酸、十三氟庚酸和十五氟辛酸中的一种或两种及以上的混合物。
[0017] 所述酸的水溶液中的酸的摩尔浓度为0.0 lmmo 1 /L~1 Ommo 1 /L，优选摩尔浓度为 0·lmmol/L~lmmol/L 〇
[0018] 所述酸水溶液的pH值为2 · 0~7 · 0，优选pH值为3 · 0~5 · 0。
[0019] 所述的流动相流速在〇 · 2~3 · OmL/min，优选流速为1 · OmL/min。
[0020] 本发明中，反相高效液相色谱分析条件优选为： 迪马C18色谱柱，流动相为80%乙腈-20%(0. lmmol/L盐酸)水溶液，pH值为3.0。紫外检测 波长为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30°C，进样体积10yL。
[0021 ]与现有技术相比，本发明所取得的有益效果如下： 本发明提供一种衍生化方法，利用反相高效液相色谱与紫外联用对衍生化3-氨基哌啶 进行异构体分析，并建立了对(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯和3-氨基哌啶衍生物的对映异构体 测定的高效液相色谱分析方法。通过对(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯和3-氨基哌啶衍生物异构 体分析，从而实现对3-氨基哌啶的异构体分析。
【附图说明】
[0022]图l:(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(R)-3_氨基哌啶衍生化后色谱图； 图2:(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3_氨基哌啶衍生化后色谱图； 在附图中：1为(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(R)-3_氨基哌啶的衍生物;2为（(R)-a-甲基_ 2-萘乙酰氯-和(S) -3-氨基哌啶的衍生物。
【具体实施方式】
[0023]以下结合附图和具体实施例对本发明进行进一步详细的叙述。
[0024]实施例1: (R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与3-氨基哌啶衍生物的液相色谱分析 1- 1: (R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(R)-3_氨基哌啶衍生物的液相色谱分析 取(R)-3_氨基哌啶3.09g(0.03mol)，溶于30mL甲苯中，30°C下搅拌，缓慢加入(R)-a-甲 基-2-萘乙酰氯19.67g(0.09mol) JLC监测反应，反应结束后蒸干得(R)-a-甲基-2-萘乙酰 氯与(R)_3_氨基哌啶衍生物。
[0025]将(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(R)-3_氨基哌啶衍生物用流动相溶解后采用高效液 相色谱进行检测分析。液相色谱条件:迪马C18色谱柱，流动相为80%乙腈-20%(0. lmmol/L盐 酸)水溶液，pH值为3.0。紫外检测波长为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30°C，进样体积10 yL，保留时间和手性纯度分析见表1，其图谱见图1。
[0026] l-2:(R)_a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3_氨基哌啶的衍生物的液相色谱分析 取(RS)-3-氨基哌啶3.09g(0.03mol)，溶于30mL甲苯中，30°C下搅拌，缓慢加入(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯19.67 8(0.09111〇1)。孔(：监测反应，反应结束后蒸干得(1〇-€[-甲基-2-萘乙 酰氯与(RS)-3-氨基哌啶衍生物。
[0027]将(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3_氨基哌啶衍生物用流动相溶解后采用高效 液相色谱进行检测分析。液相色谱条件:迪马C18色谱柱，流动相为80%乙腈-20%(0. lmmol/L 盐酸)水溶液，pH值为3.0。紫外检测波长为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30°C，进样体积 10yL，保留时间和手性纯度分析见表1，其图谱见图2。
[0028]表1 (R)-a-甲基-2-萘乙酰氯衍生化后的3-氨基哌啶保留时间和手性e.e. %值
实施例2:3-氨基哌啶和(R) -a-甲基-2-萘乙酰氯的衍生化反应条件的考察试验 2- 1:称取(RS)-3-氨基哌啶3.09g(0.03mol)，溶于40mL二甲苯中，在30°C下搅拌，缓慢 加入(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯19.67 8(0.09111〇1)。11(：监测反应，反应结束后蒸干得(R)-a-甲 基-2-萘乙酰氯与(RS) _3_氨基哌啶衍生物。
[0029]将(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3_氨基哌啶衍生物用流动相溶解后采用高效 液相色谱进行检测分析。液相色谱条件:迪马C18色谱柱，流动相为80%乙腈-20%(0. lmmol/L 盐酸)水溶液，pH值为3.0。紫外检测波长为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30°C，进样体积 1 OyL，保留时间和手性e. e. %值同实施例1 -2。
[0030] :取(RS)-3-氨基哌啶3 · 09g(0 · 03mol)，溶于40mL四氢呋喃中，在60°C下搅拌，缓慢 加入(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯19.678(0.09111 〇1)。11(：监测反应，反应结束后蒸干得(R)-a-甲 基-2-萘乙酰氯与(RS) _3_氨基哌啶衍生物。
[0031] 将(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3_氨基哌啶衍生物用流动相溶解后采用高效 液相色谱进行检测分析。液相色谱条件:迪马C18色谱柱，流动相为80%乙腈-20%(0. lmmol/L 盐酸)水溶液，pH值为3.0。紫外检测波长为254nm，流速为1. OmL/min，柱温为30°C，进样体积 1 〇yL，保留时间和手性e. e. %值同实施例1 -2。
[0032]:取(RS)-3-氨基哌啶3.09g(0.03mol)，溶于30mL石油醚中，60°C下搅拌，缓慢加入 (R)-a-甲基-2-萘乙酰氯15.3(^(0.07111〇1)。11(：监测反应，反应结束后蒸干得(R)-a-甲基-萘乙酰氯与(RS) _3_氨基哌啶衍生物。
[0033]将(R)-a-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-3_氨基哌啶衍生物用流动相溶解后采用高效 液相色谱进行检测分析。液相色谱条件