一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法
【专利摘要】本发明涉及一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，属于分析化学技术领域。本发明采用脱脂棉收集唾液样品、经离心和固相萃取后，采用气相色谱?质谱联用法测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质。其步骤包括：a.用脱脂棉采集唾液样品，采集完后脱脂棉置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压得到唾液样品，经高速离心后取上清液；b.唾液样品加入内标物，依次经固相萃取柱富集、溶剂洗脱；c.洗脱液浓缩后复溶，过微孔滤膜，然后采用气相色谱?质谱联用法测定，制作标准曲线，内标法定量。本发明方法可以有效的用于测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质，方法可行，检出限低，精密度好，准确可靠，具有推广应用价值。
【专利说明】
一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法
技术领域
[0001] 本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种专用于分离测定唾液中吡嗪类和吡 啶类物质的方法。
【背景技术】
[0002] 吡嗪类和吡啶类物质是食品、烟草等中的重要香味成分。饮食过程中食品中香味 成分被口腔唾液选择性溶解吸收，那些被吸收的成分才是刺激人体产生感官感受的物质， 决定了食品的风格和风味。目前对食品香味的评价通常以口、鼻、舌、喉等的感知来评价，但 很难排除人为主观性以及由此所产生的不确定性。研究测定唾液中吸收溶解的风味成分， 则能直接、客观的得到决定食品风味的化学成分数据。进行饮食者唾液中吡嗪类、吡啶类香 吃味成分的分析，可为食品、烟草等的香吃味评定提供数据支持，为改善食品风味提供理论 依据。
[0003] 目前，关于香精香料、食品、白酒、烟气等样品中吡嗪类和吡啶类物质的测定已有 大量的报道，然而唾液样品中吡嗪类和吡啶类物质的测定还未见报道。唾液样品基体复杂， 主要成分是水（占99%)，但含有多种有机物如黏蛋白、黏多糖、唾液淀粉酶、溶菌酶、免疫球 蛋白、血型物质、尿素、尿酸和游离氨基酸等，以及无机物和一些气体分子，被分析成分在唾 液中含量极低，还会受到唾液中多种有机成分和无机成分的干扰。因此，开发简单快速、高 选择性、高灵敏度、定量准确的唾液中吡嗪类和吡啶类物质的提取和分离测定方法非常迫 切。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于针对目前唾液中吡嗪类和吡啶类物质分离测定的方法未见文 献报道的现状，以及现有技术的不足，提供一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方 法，该方法可行，精密度好，检出限低，准确可靠，具有推广应用价值。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下： 一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，包括以下步骤： 步骤（1)，样品采集:将脱脂棉置于口腔内，放置0.2-5 min后，取出吸收了唾液的脱脂 棉，置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，经高速离心后 收集上清液得到唾液样品； 步骤(2)，萃取:移取唾液样品，向唾液中加入适量内标物吡啶-D5，其加入量为使最终 样品复溶溶液中内标物浓度为〇. 5-5 mg/L(最终样品复溶溶液即为步骤(3 )用甲醇复溶后 得到的溶液），然后转移至固相萃取柱，吡嗪类和吡啶类物质经固相萃取柱吸附，再经溶剂 洗脱，最后收集洗脱液； 其中，固相萃取柱为硅胶固相萃取柱、氨基固相萃取柱或HLB固相萃取柱;洗脱时采用 二氯甲烷对含有内标物的唾液样品进行洗脱； 步骤（3)，测定:将步骤(2)收集到的洗脱液，经浓缩至近干后，用1-2 mL甲醇复溶，过 0.22 Ml微孔滤膜，滤液采用气相色谱-质谱联用法分析，内标法定量，根据标准曲线计算目 标物含量； 所述的浓缩温度为30-40°C; 气相色谱条件如下： 色谱柱为长度X内径X膜厚为30 mX0.25 mm X 0.25 wn，INNOWAX石英毛细管柱或 相当者;载气氦气，纯度彡99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min;进样口温度:250°C;分流 进样或不分流进样，分流进样时分流比1-30;进样量：1-2 yL;程序升温:初始温度50 °C，保 持1 min，然后以5°C/min升温到130°C，再以20 °C /min升温到230°C，保持10 min; 质谱条件如下：电离方式为电子轰击源，色谱质谱接口温度为250°C，离子源温度为 180-250°C，电离能量为70 eV，溶剂延迟:4.0 min，选择离子监测模式，离子选择参数见表 1〇
[0006] 表1吡嗪类和吡啶类的定量和辅助定性离子
进一步，优选的是步骤(1)中的脱脂棉的质量为0.2-2.0 g。
[0007] 进一步，优选的是步骤（1)中唾液离心转速不低于10000 rpm，离心时间不少于10 min〇
[0008] 进一步，优选的是步骤(2)中唾液移取量为0.5-10 mL。
[0009] 进一步，优选的是步骤(2)中固相萃取柱填料为200-1000 mg;使用前采用5-10 mL 二氯甲烧、5-10 mL甲醇和5-15 mL去离子水依次预淋洗。
[0010] 进一步，优选的是步骤(2)中样品转移至固相萃取柱时，控制流速不大于0.5滴/s; 洗脱时，加入5-10 mL二氯甲烷洗脱，控制洗脱流速不大于5 mL/min。
[0011] 进一步，优选的是步骤(3)中收集到的洗脱液在30-40°C水浴中减压蒸发浓缩至近 干，用1.0-2.0 mL甲醇复溶。减压蒸发时，压力没有具体限制。
[0012] 进一步，优选的是步骤(3)中标准曲线绘制方法如下:配制吡嗪类和吡啶类物质系 列标准溶液，浓度为:0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、l mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，系 列标准溶液中加入内标物吡啶-D5,内标物浓度与样品复溶溶液中内标物浓度相同，内标物 浓度为0.5-5 mg/L，对系列标准溶液进行气相色谱-质谱联用仪分析，得到标准溶液的总离 子流色谱图（如图1所示），根据各物质定量离子峰面积与内标物定量离子峰面积的比值为 纵坐标，以各物质浓度与内标物浓度比值为横坐标，作各测定物质的标准曲线。
[0013]进一步，优选的是所述的吡嗪类物质为2-甲基吡嗪、2,5_二甲基吡嗪、2,6_二甲基 吡嗪、2，3-二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪;所述的吡啶类物质为吡啶、2-丙基吡啶、 3-乙基吡啶、5-乙基-2-甲基吡啶。
[0014] 本发明与现有技术相比，其有益效果为:本发明方法可以有效的用于测定唾液中 吡嗪类和吡啶类物质，方法可行，前处理简单，操作简便，检测限低，精密度好，准确可靠，具 有推广应用价值。
[0015] 以上说明为本发明技术方案的概述，为了更清楚的了解本发明的技术手段，而可 依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其它目的、特征和优点能够更明 显易懂，现特举较佳实施例，并配合附图，详细说明如下。
【附图说明】
[0016] 图1是本发明吡嗪类和吡啶类物质混合标准溶液(2.0 mg/L)的总离子流色谱图； 图2为烟草吸食者唾液样品的总离子流图； 图3为白酒饮用者唾液样品的总离子流图。
[0017] 图中各峰的含义如下：1，6.47 min，吡啶；2,8.32 min，2-甲基吡嗪；3,9.60 min， 2,5-二甲基吡嗪;4,9.75 1^11，2,6-二甲基吡嗪；5，10.18 111111，2,3-二甲基吡嗪；6，10.63 min，2_丙基吡啶；7，10.99 min，3_乙基吡啶；8，11.53 min，三甲基吡嗪；9，11.74 min，5_乙 基-2_甲基[1比啶；10，13.20111；[11，四甲基[1比嗪；13,6.54 111；[11，[1比啶-05。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述，但其并不限制本发明。
[0019] 本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发 明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件 或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的 常规广品。
[0020] 实施例1 一种分离测定烟草吸食者唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，包括以下步骤： 步骤(1)，样品采集:将0.2 g脱脂棉置于烟草吸食者口腔内，放置0.3 min后取出，置于 注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，于10000 rpm转速下离 心时间10 min得到唾液样品。
[0021 ]步骤(2)，萃取:移取2.0 mL唾液样品于离心管中，加入内标吡啶-D5至内标物浓度 为2.0 mg/L;过填料为300 mg的硅胶固相萃取柱，首先加入6 mL二氯甲烧、6 mL甲醇和10 mL去离子水依次预淋洗;样品转移至至经过预淋洗的固相萃取柱，控制流速为0.5滴/s，加 入6 mL二氯甲烷洗脱，洗脱速度为3 mL/min，收集洗脱液。
[0022]步骤（3)，测定：将步骤（2)收集到的洗脱液在35°C水浴中，用减压蒸发浓缩至近 干，用1.0 mL甲醇复溶，过0.22 wii滤膜后进样分析，滤液采用气相色谱-质谱联用法分析， 得到的样品的总离子流色谱图如图2所示，根据标准曲线计算吡嗪类和吡啶类物质的含量。 [0023] 气相色谱条件如下：色谱柱为长度X内径X膜厚为30 mX 0.25 mm X 0.25 wii， INN0WAX石英毛细管柱或相当者;载气氦气，纯度彡99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min; 进样口温度：250°C ;分流进样，分流进样时分流比15;进样量：1 yL;程序升温:初始温度50 °C，保持1 min，然后以5°C/min升温到130°C，再以20 °C /min升温到230°C，保持10 min。 [0024]质谱条件如下：电离方式为电子轰击源(El)，色谱质谱接口温度为250°C，离子源 温度为230°C，电离能量为70 eV，溶剂延迟:4.0 min，选择离子监测模式。
[0025]表2是本方法分析烟草吸食者唾液中吡嗪类和吡啶类物质的试验数据。表2给出了 本分析方法的线性相关系数、精密度(RSD)、检出限、定量限和回收率相关参数，表明该方法 结果可靠，精密度好。采用固相萃取柱净化，操作简便，能有效去除干扰物质，基质干扰显著 降低，从而获得较低的检出限和定量限;通过浓缩提高了目标物的浓度，进一步降低了检出 限；用甲醇复溶后，实现了溶剂交换，样品可进入极性色谱柱分析，不仅保护了色谱柱，还提 高了样品分析的稳定性。因此该方法适合于烟草吸食者唾液中吡嗪类和吡啶类物质的分析 检测。
[0026]表2线性相关系数、精密度(RSD)、检出限、定量限和回收率
n表示实验重复次数。
[0027] 实施例2 一种分离测定白酒饮用者唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，包括以下步骤： 步骤(1)，样品采集:将1.5 g脱脂棉置于烟草吸食者口腔内，放置4.0 min后取出，置于 注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，于15000 rpm转速下离 心时间12 min得到唾液样品。
[0028] 步骤(2)，萃取:移取10.0 mL唾液样品于离心管中，加入内标吡啶-D5至内标物浓 度为1.0 mg/L;过填料为600 mg的HLB固相萃取柱，首先加入10 mL二氯甲烷、10 mL甲醇 和12 mL去离子水依次预淋洗;样品转移至经过预淋洗的固相萃取柱，控制流速为0.25滴/ s，加入10 mL二氯甲烧洗脱，控制流速为4 mL/min，收集洗脱液。
[0029]步骤（3)，测定：将步骤（2)收集到的洗脱液在30°C水浴中，用减压蒸发浓缩至近 干，用2.0 mL甲醇复溶，过0.22 wii滤膜后进样分析，滤液采用气相色谱-质谱联用法分析， 得到的样品的总离子流色谱图如图3所示，根据标准曲线计算吡嗪类和吡啶类物质的含量。 气相色谱条件如下：色谱柱为长度X内径X膜厚为30 mX0.25 mm X 0.25 wn，INNOWAX石 英毛细管柱或相当者;载气氦气，纯度多99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min;进样口温 度：250 °C;不分流进样;进样量:2 yL;程序升温:初始温度50 °C，保持1 min，然后以5 °C/ min升温到130°C，再以20 °C /min升温到230°C，保持10 min。
[0030] 质谱条件如下：电离方式为电子轰击源(El)，色谱质谱接口温度为250°C，离子源 温度为190°C，电离能量为70 eV，溶剂延迟:4.0 min，选择离子监测模式。
[0031] 表3是本方法分析白酒饮用者唾液中吡嗪类和吡啶类物质的试验数据。表3给出了 本分析方法的线性相关系数、精密度(RSD)、检出限、定量限和回收率相关参数，表明该方法 结果可靠，精密度好，采用固相萃取柱净化，操作简便，能有效去除基质对测定的干扰，从而 获得较低的检出限和定量限;通过浓缩提高了目标物的浓度，进一步降低了检出限；用甲醇 复溶后，实现了溶剂交换，不仅保护了色谱柱，还提高了样品分析的稳定性。因此该方法适 合于烟草吸食者唾液中吡嗪类和吡啶类物质的分析检测。
[0032]表3线性相关系数、精密度(RSD)、检出限、定量限和回收率
n表示实验重复次数。
[0033] 实施例3 一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，包括以下步骤： 步骤（1)，样品采集:将0.2 g脱脂棉置于口腔内，放置0.2min后，取出吸收了唾液的脱 脂棉，置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，经高速离心 后收集上清液得到唾液样品;所述的离心转速不低于10000 rpm，离心时间不少于10 min; 步骤(2)，萃取:移取0.5 mL唾液样品，向唾液中加入内标物吡啶-D5至内标物浓度为 lmg/L，然后转移至经过预淋洗的填料为200mg的固相萃取柱，控制流速不大于0.5滴/s，吡 嗪类和吡啶类物质经固相萃取柱吸附，再经5mL二氯甲烷洗脱，控制洗脱流速不大于5 mL/ min，最后收集洗脱液； 转移前固相萃取柱采用5mL二氯甲烷、5mL甲醇和5mL去离子水依次预淋洗。
[0034] 其中，固相萃取柱为硅胶固相萃取柱； 步骤(3)，测定:将步骤(2)收集到的洗脱液在35°C水浴中减压蒸发浓缩至近干，用1.0 mL甲醇复溶，过0.22 wii微孔滤膜，滤液采用气相色谱-质谱联用法分析，内标法定量，根据 标准曲线计算目标物含量； 气相色谱条件如下： 色谱柱为长度X内径X膜厚为30 mX0.25 mm X 0.25 wn，INNOWAX石英毛细管柱或 相当者;载气氦气，纯度彡99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min;进样口温度:250°C;分流 进样，分流进样时分流比1;进样量：1 yL;程序升温：初始温度50 °C，保持1 min，然后以5 °C/min升温到 130°C，再以20 °C /min 升温到230°C，保持 10 min; 质谱条件如下：电离方式为电子轰击源，色谱质谱接口温度为250°C，离子源温度为180 °C，电离能量为70 eV，溶剂延迟:4.0 min，选择离子监测模式，离子选择参数见表1。
[0035]步骤(3)中标准曲线绘制方法如下:配制吡嗪类和吡啶类物质系列标准溶液，浓度 为:0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、l mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，并加入加入内标物 吡啶-D5至内标物浓度为0.5 mg/L，对系列标准溶液进行气相色谱-质谱联用仪分析，得到 标准溶液的总离子流色谱图（如图1所示），根据各物质定量离子峰面积与内标物定量离子 峰面积的比值为纵坐标，以各物质浓度与内标物浓度比值为横坐标，作各测定物质的标准 曲线。
[0036] 所述的吡嗪类物质为2-甲基吡嗪、2,5_二甲基吡嗪、2,6_二甲基吡嗪、2,3_二甲基 吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪;所述的吡啶类物质为吡啶、2-丙基吡啶、3-乙基吡啶、5-乙 基_2_甲基P比啶。
[0037] 实施例4 一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，包括以下步骤： 步骤(1)，样品采集:将2.0 g脱脂棉置于口腔内，放置5 min后，取出吸收了唾液的脱脂 棉，置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，经高速离心后 收集上清液得到唾液样品;所述的离心转速不低于10000 rpm，离心时间不少于10 min; 步骤（2)，萃取:移取10 mL唾液样品，向唾液中加入内标物吡啶-D5至内标物浓度为 0.75 mg/L，然后转移至经过预淋洗的填料为-1000 mg的固相萃取柱，控制流速不大于0.5 滴/s，吡嗪类和吡啶类物质经固相萃取柱吸附，再经10 mL二氯甲烷洗脱，控制洗脱流速不 大于5 mL/min，最后收集洗脱液； 转移前固相萃取柱采用10 mL二氯甲烷、10 mL甲醇和15 mL去离子水依次预淋洗。
[0038] 其中，固相萃取柱为氨基固相萃取柱； 步骤(3)，测定:将步骤(2)收集到的洗脱液在35°C水浴中减压蒸发浓缩至近干，用1.5 mL甲醇复溶，过0.22 wii微孔滤膜，滤液采用气相色谱-质谱联用法分析，内标法定量，根据 标准曲线计算目标物含量； 气相色谱条件如下： 色谱柱为长度X内径X膜厚为30 mX0.25 mm X 0.25 wn，INN0WAX石英毛细管柱或 相当者;载气氦气，纯度彡99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min;进样口温度:250°C;分流 进样，分流进样时分流比30;进样量：2 yL;程序升温:初始温度50°C，保持1 min，然后以5 °C/min升温到 130°C，再以20 °C /min 升温到230°C，保持 10 min; 质谱条件如下：电离方式为电子轰击源，色谱质谱接口温度为250°C，离子源温度为250 °C，电离能量为70 eV，溶剂延迟:4.0 min，选择离子监测模式，离子选择参数见表1。
[0039] 步骤(3)中标准曲线绘制方法如下:配制吡嗪类和吡啶类物质系列标准溶液，浓度 为:0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、l mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，并加入加入内标物 吡啶-D5至内标物浓度为5 mg/L，对系列标准溶液进行气相色谱-质谱联用仪分析，得到标 准溶液的总离子流色谱图（如图1所示），根据各物质定量离子峰面积与内标物定量离子峰 面积的比值为纵坐标，以各物质浓度与内标物浓度比值为横坐标，作各测定物质的标准曲 线。
[0040] 所述的吡嗪类物质为2-甲基吡嗪、2,5_二甲基吡嗪、2,6_二甲基吡嗪、2,3_二甲基 吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪;所述的吡啶类物质为吡啶、2-丙基吡啶、3-乙基吡啶、5-乙 基_2_甲基P比啶。
[0041 ] 实施例5 一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，包括以下步骤： 步骤(1)，样品采集:将1 g脱脂棉置于口腔内，放置3min后，取出吸收了唾液的脱脂棉， 置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，经高速离心后收集 上清液得到唾液样品;所述的离心转速不低于10000 rpm，离心时间不少于10 min; 步骤(2)，萃取:移取6 mL唾液样品，向唾液中加入内标物吡啶-D5至内标物浓度为0.5 mg/L，然后转移至经过预淋洗的填料为700 mg的固相萃取柱，控制流速不大于0.5滴/s，吡 嗪类和吡啶类物质经固相萃取柱吸附，再经8mL二氯甲烷洗脱，控制洗脱流速不大于5 mL/ min，最后收集洗脱液； 转移前固相萃取柱采用7mL二氯甲烷、8mL甲醇和10 mL去离子水依次预淋洗。
[0042]其中，固相萃取柱为HLB固相萃取柱； 步骤(3)，测定:将步骤(2)收集到的洗脱液在40°C水浴中减压蒸发浓缩至近干，用1.0 mL甲醇复溶，过0.22 wii微孔滤膜，滤液采用气相色谱-质谱联用法分析，内标法定量，根据 标准曲线计算目标物含量； 气相色谱条件如下： 色谱柱为长度X内径X膜厚为30 mX0.25 mm X 0.25 wn，INN0WAX石英毛细管柱或 相当者;载气氦气，纯度彡99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min;进样口温度:250°C;分流 进样，分流进样时分流比15;进样量：1.5 yL;程序升温:初始温度50°C，保持1 min，然后以 5°C/min升温到 130°C，再以20 °C /min 升温到230°C，保持 10 min; 质谱条件如下：电离方式为电子轰击源，色谱质谱接口温度为250°C，离子源温度为220 °C，电离能量为70 eV，溶剂延迟:4.0 min，选择离子监测模式，离子选择参数见表1。
[0043] 步骤(3)中标准曲线绘制方法如下:配制吡嗪类和吡啶类物质系列标准溶液，浓度 为:0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、l mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，并加入加入内标物 吡啶-D5至内标物浓度为3 mg/L，对系列标准溶液进行气相色谱-质谱联用仪分析，得到标 准溶液的总离子流色谱图（如图1所示），根据各物质定量离子峰面积与内标物定量离子峰 面积的比值为纵坐标，以各物质浓度与内标物浓度比值为横坐标，作各测定物质的标准曲 线。
[0044] 所述的吡嗪类物质为2-甲基吡嗪、2,5_二甲基吡嗪、2,6_二甲基吡嗪、2,3_二甲基 吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪;所述的吡啶类物质为吡啶、2-丙基吡啶、3-乙基吡啶、5-乙 基_2_甲基P比啶。
[0045]以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本 发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变 化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其 等效物界定。
【主权项】
1. 一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤（1)，样品采集:将脱脂棉置于口腔内，放置0.2-5 min后，取出吸收了唾液的脱脂 棉，置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，经高速离心后 收集上清液得到唾液样品； 步骤(2)，萃取:移取唾液样品，向唾液中加入内标物P比啶-D5,内标物加入量为使最终 样品复溶溶液中内标物浓度为0.5-5 mg/L，然后转移至固相萃取柱，吡嗪类和吡啶类物质 经固相萃取柱吸附，再经溶剂洗脱，最后收集洗脱液； 其中，固相萃取柱为硅胶固相萃取柱、氨基固相萃取柱或HLB固相萃取柱;洗脱时采用 二氯甲烷对含有内标物的唾液样品进行洗脱； 步骤（3)，测定：将步骤（2)收集到的洗脱液，经浓缩至近干后，用1-2 mL甲醇复溶，过 0.22 μπι微孔滤膜，滤液采用气相色谱-质谱联用法分析，内标法定量，根据标准曲线计算目 标物含量； 所述的浓缩温度为30-40Γ; 气相色谱条件如下： 色谱柱为长度X内径X膜厚为30 m X 0.25 mm X 0.25 μπι，INNOWAX石英毛细管柱或 相当者;载气氦气，纯度彡99.999%，恒流模式，流量1.0 mL/min;进样口温度:250°C ;分流进 样或不分流进样，分流进样时分流比1-30;进样量：1-2 yL;程序升温:初始温度50°C，保持 I min，然后以5°C/min升温到130°C，再以20 °C /min升温到230°C，保持10 min; 质谱条件如下：电离方式为电子轰击源，色谱质谱接口温度为250°C，离子源温度为 180-250°C，电离能量为70 eV，溶剂延迟:4.0 min，选择离子监测模式。2. 根据权利要求1所述的分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于:步 骤(1)中的脱脂棉的质量为0.2-2.0 g。3. 根据权利要求1所述的分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于:步 骤(1)中唾液离心转速不低于10000 rpm，离心时间不少于10 min。4. 根据权利要求1所述的分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于:步 骤(2)中唾液移取量为0.5-10 mL。5. 根据权利要求4所述的分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于:步 骤(2)中固相萃取柱填料为200-1000 mg;使用前采用5-10 mL二氯甲烷、5-10 mL甲醇和 5-15 mL去离子水依次预淋洗。6. 根据权利要求5所述的分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于:步 骤(2)中样品转移至固相萃取柱时，控制流速不大于0.5滴/s;洗脱时，加入5-10 mL二氯甲 烷洗脱，控制洗脱流速不大于5 mL/min。7. 根据权利要求6所述的分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于:步 骤(3)中收集到的洗脱液在30-40°C水浴中减压蒸发浓缩至近干，用1.0-2.0 mL甲醇复溶。8. 根据权利要求1所述的分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于:步 骤（3 )中标准曲线绘制方法如下：配制吡嗪类和吡啶类物质系列标准溶液，浓度为：0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、l mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，系列标准溶液加入内标物[!比 啶-D5，内标物浓度与样品复溶溶液中内标浓度相同，内标物浓度为0.5-5 mg/L，对系列标 准溶液进行气相色谱-质谱联用仪分析，根据各物质定量离子峰面积与内标物定量离子峰 面积的比值为纵坐标，以各物质浓度与内标物浓度比值为横坐标，作各测定物质的标准曲 线。9.根据权利要求1所述的分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于:所 述的吡嗪类物质为2-甲基吡嗪、2，5-二甲基吡嗪、2，6-二甲基吡嗪、2，3-二甲基吡嗪、三甲 基吡嗪、四甲基吡嗪;所述的吡啶类物质为吡啶、2-丙基吡啶、3-乙基吡啶、5-乙基-2-甲基 吡啶。
【文档编号】G01N30/02GK105929082SQ201610555349
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年7月14日
【发明人】司晓喜, 刘志华, 朱瑞芝, 张凤梅, 石倩倩, 刘春波, 申钦鹏, 王昆淼, 何沛, 苏钟璧
【申请人】云南中烟工业有限责任公司