一种快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄芪甲苷的方法
【专利摘要】本发明公开了一种快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄芪甲苷的方法，包括以下步骤：步骤1：将补中益气丸剪碎后，混匀；步骤2：称取步骤1得到的1重量份补中益气丸碎片，与0.5重量份硅藻土混合，研磨均匀待用；步骤3：取步骤2得到的混合物3g与适量的硅藻土混合后加入到预先放好过滤膜的萃取池中；盖上萃取池的盖子进行静态萃取；萃取结束后得到萃取液；萃取条件为：萃取溶剂为饱和的正丁醇水溶液；萃取温度100℃；静态萃取时间5min；冲洗体积60％；静态循环次数3次。本发明提供了一种快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄芪甲苷的方法，该方法操作简单，检测精度高。
【专利说明】
-种快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄庚甲昔的方法
技术领域
[0001] 本发明设及实验室检测领域，特别是一种快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄 巧甲巧的方法。
【背景技术】
[0002] 2010年药典记录了提取和鉴定补中益气丸中黄巧甲巧的方法:本品小蜜丸适量或 重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取27. Og,加入娃藻±13.5g，研匀，粉碎成粗粉，取 13.5g，精密称定，置索氏提取器中，加入甲醇适量，加热回流至提取液无色，提取液回收甲 醇至干，残渣加水25ml，微热使溶解，用水饱和的正下醇振摇提取6次，每次20ml，合并正下 醇提取液，用氨试液洗涂3次，每次40ml，正下醇液回收溶剂至于，残渣用甲醇溶解，转移至 IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0003] 其液相色谱的参数为：W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；W乙腊一水(35:65)为 流动相；用蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄巧甲巧峰计算应不低于4500。
[0004] 药典的方法操作过程复杂，对操作人员的操作技能要求高。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄巧甲巧的方法， 该方法操作简单，萃取效率高、萃取时间短。
[0006] 本发明提供的技术方案为:一种快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄巧甲巧的 方法，其特征在于，包括W下步骤：
[0007] 步骤1:将补中益气丸粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；
[000引步骤2:将萃取液洗涂、稀释、过滤后，得到滤液；
[0009] 步骤3:将滤液采用液相色谱法进行分析；
[0010] 其中，液相色谱法的分析条件为：
[00川 a)仪器:液相色谱仪
[001^ b)色谱柱规格:碳18色谱柱，4.6*100mm 3.5um [OOU] c)柱溫：4(TC [0014] d)流速：lmL/min [001引 e)流动相：乙腊-水，体积比32:68
[0016] f)检测波长:蒸发光散射检测器。
[0017] 在上述的快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄巧甲巧的方法中，所述的步骤1 具体为：
[0018] Sll:将补中益气丸剪碎后，混匀；
[0019] S12:称取1重量份补中益气丸碎片，与0.5重量份娃藻±混合，研磨均匀待用；
[0020] S13:取S12得到的混合物3g与适量的娃藻±混合后加入到预先放好过滤膜的萃取 池中；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液；
[0021] 萃取条件为：萃取溶剂为饱和的正下醇水溶液；萃取溫度100°C;静态萃取时间 5min;冲洗体积60 % ;静态循环次数3次。
[0022] 在上述的快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄巧甲巧的方法中，所述的萃取池 的体积为10ml。
[0023] 在上述的快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄巧甲巧的方法中，所述的静态萃 取的压力为1500psi。
[0024] 在上述的快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄巧甲巧的方法中，步骤2具体为： 将萃取液在1500化/min的条件下离屯、3min，取上清液。
[0025] 在上述的快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄巧甲巧的方法中，所述的仪器为 岛津LC-20AT高效液相色谱仪。
[0026] 在上述的快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄巧甲巧的方法中，所述的色谱柱 为Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱。
[0027] 在上述的快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄巧甲巧的方法中，所述的ASE萃 取法所采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
[0028] 本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
[0029] 本发明的萃取方法操作简单，萃取效率高、萃取时间短。
【附图说明】
[0030] 图1为本发明的药典的黄巧甲巧的色谱图；
[0031] 图2为本发明按照实施例1所记载的方法测定补中益气丸的色谱图；
[0032] 图3为本发明按照药典所记载的方法测定补中益气丸的色谱图。
【具体实施方式】
[0033] 下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0034] 实施例1:
[00巧]取补中益气丸，剪碎，混匀，取27 . Og，加入娃藻±13.5g，研匀，粉碎成粗粉，取约 3邑，精密称定，与适量ASE Pr邱DE娃藻±混匀装入IOml萃取池中。W水饱和正下醇为萃取 剂，在ISOOpsi和100°C，静态循环萃取3次，每次5min;采用60%的冲洗体积冲洗，用氮气吹 扫90s，收集全部萃取液于50ml收集瓶中。用氨试液洗涂3次，每次40ml，回收溶剂至干，残渣 用甲醇溶解，转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。上述水饱和正 下醇的质量分数W20°C条件下饱和的正下醇水溶液为准。黄巧甲巧类成分在正下醇中的溶 解度比较大，直接采用水饱和提取即可获得较好的回收率，且可W减少实验步骤，提高样品 处理效率。
[0036] 萃取条件(见表1)为：
[0037] 表 1
[00；3 引
[0039] 分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
[0040] a)仪器:岛津LC-20AT高效液相色谱仪；
[0041 ] b)色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱4.6*100mm 3.5um，即碳 18 色谱柱，直径4.6mm，长度100mm，粒径3.5微米;本色谱柱在获得较高灵敏度的同时，又符合 普通高效液相色谱仪的柱压要求；
[0042] C)柱溫:40°C;
[0043] d)流速：ImL/min;
[0044] e)流动相：乙腊-水;20°C条件下的乙腊和水的体积比23:77;
[0045] f)检测波长:蒸发光散射检测器；
[0046] 为了获取上述参数，进行了如下正交实验：
[0047] 首先进行了萃取溫度、次数和时间的单因素实验。溫度定为80、100、120、140°(：，静 态萃取时间为5min，提取次数为2次，W此选出最佳提取溫度为100°C。溫度为100°C，提取时 间为5min，提取次数为1、2、3次，W此筛选出最佳提取次数为3次。萃取溫度为100°C，提取时 间5、IOJOmin，提取次数为2次，W此筛选出最佳提取时间为5min。
[004引在单因素实验中选出了最佳的提取溫度、次数和时间，为消除各因素之间的相互 影响，在上述实验基础上，采用4因素3水平正交实验方案L9(34)安排实验，考察了4个因素 对加速溶剂萃取补中益气丸中黄巧甲巧过程的影响。本实验确定萃取溫度、静态萃取时间、 循环次数W及冲洗体积为考察因素(见表2)。确定从补中益气丸中提取黄巧甲巧的最佳快 速溶剂萃取工艺，结果见表3;
[0049]表2因素水平
[00
[0(
[0(
[0(
[0054] 由极差分析可W看出，提取次数对黄巧甲巧的含量影响最大，其次是提取溫度和 提取时间，而冲洗体积的影响较小。最佳提取工艺组合为提取溫度l〇〇°C，提取时间5min，提 取次数3次，冲洗体积60 %。
[0055] 线性关系
[0056] 精密称取黄巧甲巧对照品21.55mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度， 得到黄巧甲巧对照品储备液，浓度:〇.8258mg/ml。精密移取黄巧甲巧对照品储备液5ml至 IOml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得到黄巧甲巧对照品溶液，浓度0.4129mg/ml。
[0057] 精密吸取对照品溶液(0.4129mg/ml) 1，2，5，10，15，2化1，按实施例1的色谱条件进 样，记录色谱图，测定其峰面积。W进样量的常用对数(C)对其相应峰面积常用对数(A)进行 回归分析，得回归方程4 = 4.9105〔+1.4954^ = 0.9995。结果表明，黄巧甲巧进样量在 0.4129yg~8.25祉g范围内与峰面积线性关系良好。
[005引精密度、重复性和稳定性试验
[0059] 取对照品溶液(0.4129mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，峰面积RSD为1.4%，表 明仪器精密度良好。
[0060] 取同一批号样品，按实施例1的方法制备5份供试品溶液，分别进样，巧憶黄巧甲巧 的峰面积，计算黄巧甲巧含量。结果黄巧甲巧含量的RSD为3.2 %，重复性良好。
[0061] 取同一供试品溶液，室溫下放置，分别于0,2,4,8，1化依法测定。结果黄巧甲巧峰 面积的RSD为2.1%，表明供试品溶液在12h内稳定。
[0062] 加样回收率试验
[0063] 取重量差异项下的本品，剪碎，混匀，取27.Og,加入娃藻±13.5g，研匀，粉碎成粗 粉，取约3g，精密称定，共六份，分别加入对照品储备液(0.8258mg/ml) Iml，按实施例1中的 方法，自"与适量ASE Prep DE娃藻±混匀装入IOml萃取池中"起，同法操作。测定黄巧甲巧 的含量，计算回收率，结果见表4。结果回收率在92.65%~98.20%之间，平均回收率为 96.10%，350为2.2%。
[0064] 表4加样回收率实验结果
[00 化]
[0066]
[0067]样品测定
[006引用实施例记载的方法，对不同批号的5批样品进行处理，按实施例1所记载的色谱 条件测定。另采用中国药典方法制备供试品溶液，在本文确定的色谱条件下进样分析。结果 采用本法测得的5批样品的黄巧甲巧含量分别为3.64、3.42、2.67、3.17、2.72mg/丸，与中国 药典方法测定结果基本一致。结果如表5所示。色谱图见图1~图3。
[0069]表5样品测定结果及与中国药典方法比较
[0070]
[0071] 结论；
[0072] 采用快速溶剂萃取-高效液相色谱法对补中益气丸中的黄巧甲巧进行分析测定。 对萃取条件进行了优化。最佳提取条件为在IOOC的溫提取度下，静态循环萃取3次，每次 5min;采用60%的冲洗体积冲洗，用氮气吹扫90s。经过方法学考察及实际样品测定，其回收 率高，稳定好，精密度高。本法与中国药典方法比较，操作简单、快速，中国药典方法提取补 中益气丸约需要1天至1天半的前处理时间而本方法仅需要约半小时，大大缩短了前处理时 间，且溶剂用量少，萃取效率高，而分析结果无明显差别。因此，快速溶剂萃取法适用于补中 益气丸中黄巧甲巧的测定。
[0073] W上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任 何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄芪甲苷的方法，其特征在于，包括以下 步骤： 步骤1:将补中益气丸剪碎后，混匀； 步骤2:称取步骤1得到的1重量份补中益气丸碎片，与0.5重量份硅藻土混合，研磨均匀 待用； 步骤3:取步骤2得到的混合物3g与适量的硅藻土混合后加入到预先放好过滤膜的萃取 池中；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液； 萃取条件为:萃取溶剂为饱和的正丁醇水溶液;萃取温度100 °C;静态萃取时间5min;冲 洗体积60 % ;静态循环次数3次。2. 根据权利要求1所述的快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄芪甲苷的方法，其特 征在于，所述的萃取池的体积为l〇ml，所述的静态萃取的压力为1500psi。3. 根据权利要求1所述的快速溶剂萃取法萃取补中益气丸中的黄芪甲苷的方法，其特 征在于，所述的ASE萃取法所采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
【文档编号】G01N30/02GK105954384SQ201610254615
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年4月22日
【发明人】陈学松, 廖强, 韦日伟, 钟水桥
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所