一种威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将威灵仙粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；步骤2：将萃取液离心分离后，得到上清液；步骤3：将上清液采用液相色谱法进行分析。本发明提供了一种威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的测定方法，该方法操作简单，检测精度高，能够有效的同时测定威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的含量。
【专利说明】
-种威灵仙中齐澈果酸和常春藤皂昔元的测定方法
技术领域
[0001] 本发明设及实验室检测领域，特别是一种威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的测 定方法。
【背景技术】
[0002] 2010年药典记录了提取威灵仙中常春藤皂巧元的方法:取本品粉末(过四号筛)约 4g，精密称定，置索氏提取器中，加乙酸乙醋适量，加热回流3小时，弃去乙酸乙醋液，药渣挥 干溶剂，连同滤纸筒转移至锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放 冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置水浴上蒸 干，残渣加2mol/L盐酸溶液30ml使溶解，加热回流2小时。立即冷却，移入分液漏斗中，用水 IOml分次洗涂容器，洗液并入分液漏斗中。加乙酸乙醋振摇提取3次，每次15ml，合并乙酸乙 醋液，70°C W下浓缩至近干，加甲醇溶解，转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
[0003] 其用液相色谱仪测定的方法为：W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；W乙腊-水 (90:10)为流动相;检测波长为205nm。理论板数按齐墳果酸峰和常春藤皂巧元峰计算均应 不低于3000。
[0004] 为了解决药典方法中操作过于复杂的问题，我们通过大量实验得到了一种通过 ASE快速萃取法来分离和测试威灵仙中的齐墳果酸，具体来说，其萃取过程中分为除杂和提 取步骤，除杂步骤中溶剂为乙酸乙醋，提取步骤中的溶剂为稀乙醇，其能够非常好的测定威 灵仙中的齐墳果酸，其与药典方法测定的精度一致，但是在实际应用中发现，采用该ASE快 速萃取法来同时测定常春藤皂巧元时，其测定浓度偏低，虽然常春藤皂巧元和齐墳果酸的 化学简式均为C30化8化，但是在提取过程中，还需要进一步调整提取溶剂，才能同时测定常春 藤皂巧元和齐墳果酸。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的测定方法，该方法 操作简单，检测精度高，能够有效的同时测定威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的含量。
[0006] 本发明提供的技术方案为：一种威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的测定方法， 包括W下步骤：
[0007] 步骤1:将威灵仙粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；
[000引其中，所述的步骤1具体为：
[0009] Sll:将将威灵仙粉碎后与适量的石英砂混合；
[0010] S12:向铺设有娃藻±的萃取池内加入Sll中的混合物，然后加入石英砂使萃取池 内的固体达到萃取池的池口，盖上萃取池的盖子进行萃取;收集萃取液；
[0011] 萃取时分为两步进行，即脱脂步骤和提取步骤；
[0012] 所述的脱脂步骤时控制参数为：萃取溶剂为乙酸乙醋和乙酸甲醋；萃取溫度110 °C;静态萃取时间3min;冲洗体积100%;静态循环次数1次；乙酸乙醋和乙酸甲醋的体积比 为 1:1;
[0013] 所述的提取步骤时控制参数为：萃取溶剂为乙醇、甲醇、水的混合溶液;萃取溫度 120°C;静态萃取时间5min;冲洗体积100%;静态循环次数2次；乙醇、甲醇、水的混合溶液中 包括30wt %乙醇、15wt %甲醇和余量的水混合而成；
[0014] 步骤2:将萃取液离屯、分离后，得到上清液；
[0015] 步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析；
[0016] 其中，液相色谱法的分析条件为：
[0017] a)仪器:双立元液相色谱仪
[001引 b)色谱柱规格:碳30色谱柱2.1*150mm 3皿
[0019] C)柱溫：2(TC
[0020] d)流速:0.5mL/min
[0021] e)流动相：乙腊-水，体积比62:38
[0022] f)检测波长:205nm。
[0023] 在上述的威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的测定方法中，所述的萃取池的体积 为10ml。
[0024] 在上述的威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的测定方法中，所述的脱脂步骤和提 取步骤中的操作压力均为ISOOpsi。
[0025] 在上述的威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的测定方法中，所述的脱脂步骤和提 取步骤中的吹扫时间为60s。
[0026] 在上述的威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的测定方法中，步骤2具体为:将萃取 液置水浴上蒸干，残渣加2mol/L盐酸溶液30ml使溶解，加热回流2小时;立即冷却，移入分液 漏斗中，用水IOml分次洗涂容器，洗液并入分液漏斗中；加乙酸乙醋振摇提取3次，每次 15ml，合并乙酸乙醋液，70°C W下浓缩至近干，加甲醇溶解，转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻 度，摇匀，在1500化/min下离屯、3min，取上清液。
[0027] 在上述的威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的测定方法中，所述的仪器为化ermo U3000UHPLC液相色谱仪。
[0028] 在上述的威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的测定方法中，所述的色谱柱为 Thermo Acclaim C30。
[0029] 在上述的威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的测定方法中，所述的ASE萃取法所 采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
[0030] 本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
[0031 ]本发明的检测方法操作简单，精度与药典方法的精度一致，重复性好，能够有效的 同时测定威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的含量。
【具体实施方式】
[0032] 下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0033] 实施例1:
[0034] -种威灵仙中齐墳果酸和常春藤皂巧元的测定方法，包括W下步骤：
[0035] 步骤I:将威灵仙粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；
[0036] 其中，所述的步骤1具体为：
[0037] Sl 1:将将Ig威灵仙粉碎后与2g石英砂混合；
[0038] S12:向铺设有Ig娃藻±的萃取池内加入Sll中的混合物3g，然后加入石英砂使萃 取池内的固体达到萃取池的池口，盖上萃取池的盖子进行萃取;收集萃取液；
[0039] 萃取时分为两步进行，即脱脂步骤和提取步骤;脱脂步骤得到的溶液舍弃，提取步 骤得到的溶液作为萃取液；
[0040] 所述的脱脂步骤时控制参数为：萃取溶剂为乙酸乙醋和乙酸甲醋；萃取溫度110 °C ;静态萃取时间3min ;冲洗体积100 % ;静态循环次数1次；操作压力ISOOpsi ;吹扫时间 60s;乙酸乙醋和乙酸甲醋的体积比为1:1;
[0041] 所述的提取步骤时控制参数为：萃取溶剂为乙醇、甲醇、水的混合溶液;萃取溫度 120°C ;静态萃取时间5min;冲洗体积100% ;静态循环次数2次;操作压力ISOOpsi ;吹扫时间 60s;乙醇、甲醇、水的混合溶液中包括30wt %乙醇、15wt %甲醇和余量的水混合而成；
[0042] 步骤2:将萃取液置水浴上蒸干，残渣加2mol/L盐酸溶液30ml使溶解，加热回流2小 时;立即冷却，移入分液漏斗中，用水IOml分次洗涂容器，洗液并入分液漏斗中；加乙酸乙醋 振摇提取3次，每次15ml，合并乙酸乙醋液，70°C W下浓缩至近干，加甲醇溶解，转移至IOml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，在1500化/min下离屯、3min，取上清液；需要说明的是，本实施 例中所有设及体积比的参数均为20°C的条件下的体积比。
[0043] 步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析；
[0044] 其中，液相色谱法的分析条件为：
[0045] a)仪器:Thermo U3000UHPLC双S元液相色谱仪
[0046] b)色谱柱规格：ThermoAcclaimC30 2.1*150mm3um，即碳30色谱柱，直径2.1mm， 长度 15〇111111，粒径311111;
[0047] 。）柱溫：20。[
[004 引 d)流速:0.5mL/min
[0049] e)流动相：乙腊-水，体积比62:38
[(K)加]f)检测波长：205nm。
[00引]对比例1
[0052]威灵仙样品经粉碎机粉碎，过=号筛，约Ig,精密称定，与适量石英砂混合均匀，待 用，在预先放好过滤膜的ASEKlOml萃取池中先加入Ig娃藻±，后加入混合均匀的样品，再 加入适量石英砂，轻轻振摇使之与池口在同一水平线下2mm处，梓紧萃取池上盖。萃取(包括 除杂和提取2步，见表1的A沈条件方法)结束后，置水浴上蒸干，残渣加2mol/L盐酸溶液30ml 使溶解，加热回流2小时。立即冷却，移入分液漏斗中，用水IOml分次洗涂容器，洗液并入分 液漏斗中。加乙酸乙醋振摇提取3次，每次15ml，合并乙酸乙醋液，70°C W下浓缩至近干，加 甲醇溶解，转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，在1500化/min下离屯、3min，取上清液， 进入LC测定即得。
[0化3] 表1
[0化4]
[0化5]
[0056] 1.1实施例1的萃取方法的重现性验证：
[0057] 取相同批号的样品（批号：150410(Z))0.5g，共6份，精密称定，按ASE提取方法提取 供试品溶液，进样量为化L，W上述的色谱条件平行试验，测得样品中威灵仙的齐墳果酸和 常春藤皂巧元含量见表2，RSD为2%和1.68%，试验表明ASE提取方法重复性良好，结果详见 表2;
[0化引 亲2 [0化9]
[0060] 1.2实施例1的萃取方法的精确度测试
[0061] 采用实施例1的ASE萃取和检测方法、对比例1的萃取和检测方法W及药典的萃取 和检测方法对威灵仙进行萃取和检测，威灵仙为3批，批号分别为150410(Y)，1510124， 150410(Z);检测结果如下表3;
[0062] 表 3
[0063]
[0064] W上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任 何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的测定方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:将威灵仙粉碎后米用ASE萃取法萃取得到萃取液； 其中，所述的步骤1具体为： Sl 1:将将威灵仙粉碎后与适量的石英砂混合； S12:向铺设有硅藻土的萃取池内加入SI 1中的混合物，然后加入石英砂使萃取池内的 固体达到萃取池的池口，盖上萃取池的盖子进行萃取;收集萃取液； 萃取时分为两步进行，即脱脂步骤和提取步骤； 所述的脱脂步骤时控制参数为：萃取溶剂为乙酸乙酯和乙酸甲酯；萃取温度110°c;静 态萃取时间3min;冲洗体积100%;静态循环次数1次；乙酸乙酯和乙酸甲酯的体积比为1:1; 所述的提取步骤时控制参数为：萃取溶剂为乙醇、甲醇、水的混合溶液；萃取温度120 °C ;静态萃取时间5min;冲洗体积100% ;静态循环次数2次；乙醇、甲醇、水的混合溶液中包 括30wt %乙醇、15wt %甲醇和余量的水混合而成； 步骤2:将萃取液离心分离后，得到上清液； 步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析； 其中，液相色谱法的分析条件为： a) 仪器:双三元液相色谱仪 b) 色谱柱规格:碳30色谱柱2.1*150mm 3um d) 流速:0 · 5mL/min e) 流动相：乙腈-水，体积比62:38 f) 检测波长：205nm〇2. 根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的测定方法，其特征在于， 所述的萃取池的体积为l〇ml。3. 根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的测定方法，其特征在于， 所述的脱脂步骤和提取步骤中的操作压力均为1500psi。4. 根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的测定方法，其特征在于， 所述的脱脂步骤和提取步骤中的吹扫时间为60s。5. 根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的测定方法，其特征在于， 步骤2具体为：将萃取液置水浴上蒸干，残渣加2mol/L盐酸溶液30ml使溶解，加热回流2小 时;立即冷却，移入分液漏斗中，用水IOml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中；加乙酸乙酯 振摇提取3次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，70°C以下浓缩至近干，加甲醇溶解，转移至IOml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇勾，在15000r/min下离心3min，取上清液。6. 根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的测定方法，其特征在于， 所述的仪器为Thermo U3000UHPLC液相色谱仪。7. 根据权利要求6所述的威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的测定方法，其特征在于， 所述的色谱柱为Thermo Acclaim C30〇8. 根据权利要求1所述的威灵仙中齐墩果酸和常春藤皂苷元的测定方法，其特征在于， 所述的ASE萃取法所采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
【文档编号】G01N30/02GK105954383SQ201610254599
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年4月22日
【发明人】陈学松, 欧妮, 陈翠玲, 钟水桥, 李仁乔
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所