一种检测克百威残留量的荧光适体层析试纸及其试纸笔的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种检测克百威残留量的荧光适体层析试纸及其试纸笔，属于试纸检测分析技术领域。
【背景技术】
[0002]克百威，是氨基甲酸酷类杀虫剂的主要品种之一，其能有效防治多种农作物和观赏植物上的多种害虫和线虫。克百威在酸性土壤中不易降解，且属于高毒农药。美国等地区已经明确指出不得在相关产品中检出含有残留的克百威农药制剂，但是目前对于克百威农药，我国有些人却还在偷偷使用，因此造成我国农产品出口的严重损失。同时，农药的不合理使用已给人类及生态环境造成了越来越严重的不良后果，农药的污染问题已成为全球关注的热点。
[0003]检测克百威残留的常规的分析技术有气相色谱、液相色谱等。但是克百威是一种热不稳定的物质，在一般的气相色谱操作条件下易降解成酚类，因此检测时需要将克百威衍生化后再进行分析。现在最常用的方法，其灵敏度受到样品的净化、浓缩、衍生化等步骤影响很大，此外，这些分析方法还需要昂贵的精密仪器和熟练的操作人员，对于实验室的要求很高，且远远满足不了大批量样品的初步筛选，尤其是现场检测。
[0004]核酸适体是一种高特异性的配基，其优点在于开发周期短、生产成本低、体外筛选、体外制备、使用方便，在检测分析领域中的应用已经被广泛认可。因此，核酸适体在克百威的快速检测中具有良好的应用前景。
【实用新型内容】
[0005]为了使克百威残留能够快速的被定量检测分析，本实用新型提供了一种灵敏度高、操作简便快速的荧光适体层析试纸及其试纸笔。
[0006]本实用新型采用的技术方案如下:
[0007]本实用新型公开了一种检测克百威残留量的荧光适体层析试纸，其包括底板，所述底板上依次顺序粘贴有样品吸液层、适体结合垫、NC膜和吸水垫，所述NC膜上喷涂有适体互补序列的检测线和由生物素形成的质控线；所述适体结合垫上喷涂有结合了克百威适体的稀土离子高分子纳米微球。
[0008]所述适体结合垫上的稀土离子高分子纳米微球直径为lOOnm，且稀土离子高分子纳米微球的涂层含有铕离子。
[0009]所述克百威适体以稀土离子高分子纳米微球为载体并与其相结合，同时克百威适体上修饰有链霉素分子。
[0010]所述底板为长方形的平板。
[0011]本实用新型还公开了一种检测克百威残留量的荧光适体层析试纸笔，其包括上述方案中所述的试纸以及用于包覆所述试纸的外壳，所述外壳内部设有用于安装试纸的卡槽，外壳的正面设有观察口，所述观察口的位置与试纸上检测线和质控线位置对应；所述试纸的吸液层作为检测端位于所述外壳的一端，所述检测端上设有检测帽。
[0012]运用本实用新型进行检测的方法，包括以下步骤:
[0013](1)将检测区得到检测帽拔开，露出样品吸液层，然后插入待测样品液中，孵育5min后检测；
[0014](2)荧光扫描，检测线位置条带荧光强度与样品中克百威的浓度成反比；无论样品中是否有克百威的存在，质控线都会出现荧光条带，作为对照线。
[0015]本实用新型的有益效果如下:
[0016]1、本实用新型中的荧光适体层析试纸以高亲和力的适体为基础制备而成，并结合时间分辨荧光技术进行检测，其检测结果精确度高、误差小，为大批量初步检测使用提供了便利。
[0017]2、该试纸只需将试纸插入样品液中，5分钟左右就能显示结果，检测速度快。
[0018]3、显示结果更加准确，以荧光条带为检测结果。配用专门的荧光检测仪样品中，克百威含量越高，检测线的荧光值越低。
[0019]4、操作简单，能较好的满足不同层次人员的需要，带有外壳的试纸笔更便于存放和携带，使得该实用新型具有广阔的市场前景和较大的社会、经济效益。
【附图说明】
[0020]图1是本实用新型中检测克百威残留量的荧光适体层析试纸的结构示意图。
[0021]图2是实施例2中的检测结果示意图。
[0022]图3是本实用新型中检测克百威残留量的试纸笔的结构示意图。
[0023]其中:1-底板、2-吸水垫、3 -NC膜、4-适体结合垫、5-样品吸液层、6-检测线、7-质控线、8-外壳、9-检测帽、10-观察口。
【具体实施方式】
[0024]下面结合附图和具体实施例对本实用新型进行详细说明。
[0025]实施例1
[0026]如图1所示，一种检测克百威残留量的荧光适体层析试纸，其包括依次顺序粘贴在底板1上的吸水垫2、NC膜3、适体结合垫4和样品吸液层5，NC膜3上的反应区设有具有互补序列的检测线6和由生物素形成的质控线7。
[0027]所述适体结合垫4上喷涂有以稀土离子高分析纳米微球为载体的克百威适体，其中，高分子纳米微球的直径为lOOnm，高分子纳米微球涂层含有铕离子，提高了稀土离子发出的荧光强度，因此提高了检测的精确度。
[0028]具体检测时，把试纸的样品吸液层5端插入果汁、蔬菜浸出液中，由于毛细作用进行侧向层析，5-10分钟后观察结果。
[0029]其中，将克百威适体固定在适体结合垫上，适体上修饰有链霉素可与质控线上的生物素结合，其互补序列作为检测线，生物素基团作为质控线；当样品中过量存在克百威时，适体不能与互补序列结合，则在检测线处不显示荧光条带，而少量存在时，荧光条带的荧光强度和浓度呈反比，不存在克百威时两条线都显示强荧光条带，达到检测的目的。
[0030]要制成检测克百威残留的适体荧光微球试纸首先需要运用SELEX方法筛选高亲和力的适体，制备检测线上的互补序列，制备荧光微球用于结合适体；整个制备过程中都不需要对克百威农药进行改造和修饰，相比于免疫胶体金层析技术极大地简化了制备过程。
[0031]实施例2
[0032]在实施例1的基础上，本实施例进一步提供检测克百威残留的荧光适体层析试纸的实施检测原理:
[0033](1)把试纸的样品吸液层端插入果汁、蔬菜浸出液中，由于毛细作用进行侧向层析，5-10min观察；
[0034](2)Eu (III)离子可以产生荧光，利用时间分辨荧光速测仪，检测荧光条带的荧光强度；
[0035](3)如图2所示，检测的克百威浓度>50 μ g/mL时，NC膜上出现一条质控线的荧光条带为强阳性；在0.5-50 μ g/mL范围内时，检测线的荧光强度和克百威的浓度呈反比，在0.5 μ g/mL以下时，出现双荧光条带为阴性。检测浓度可以以克百威标准品配成相应的溶液，测定绘制标准曲线，并根据样品相应的检测值计算出待测样中的克百威浓度。
[0036]实施例3
[0037]如图3所不，在实施例1的基础上，本实施例进一步提供一种检测克百威残留量的荧光适体层析试纸笔，其包括实施例1中所述的试纸以及包覆所述试纸的外壳8 ;所述外壳内部设有用于安装试纸的卡槽，外壳8的正面设有观察口 10，观察口 10的位置与试纸上检测线6和质控线7位置对应；所述试纸的吸液层5作为检测端位于所述外壳8的一端，在检测端上设有检测帽9。
[0038]本实施例中，带有外壳8的试纸笔不仅便于存放和携带，还便于检测操作；且样品吸液区有检测帽9盖住，取下检测帽9直接浸入待测液，无需用滴管滴加样品，所述观察口10的设置便于观察检测结果。
[0039]对于所属技术领域的技术人员而言，随着技术的发展，本实用新型构思可以不同方式实现。本实用新型的实施方式并不仅限于以上描述的实施例，而且可在权利要求的范围内进行变化。
[0040]本实用新型未涉及部分均与现有技术相同或可采用现有技术加以实现。
【主权项】
1.一种检测克百威残留量的荧光适体层析试纸，其特征在于:包括底板(1)，所述底板(1)上依次顺序粘贴有样品吸液层(5 )、适体结合垫(4 )、NC膜(3 )和吸水垫(2 )，所述NC膜(3)上喷涂有适体互补序列的检测线(6)和由生物素形成的质控线(7);所述适体结合垫(4 )上喷涂有结合了克百威适体的稀土离子高分子纳米微球。2.根据权利要求1所述的检测克百威残留量的荧光适体层析试纸，其特征在于:所述适体结合垫(4)上的稀土离子高分子纳米微球直径为lOOnm，且稀土离子高分子纳米微球的涂层含有铕离子。3.根据权利要求1或2所述的检测克百威残留量的荧光适体层析试纸，其特征在于:所述克百威适体以稀土离子高分子纳米微球为载体并与其相结合，同时克百威适体上修饰有链霉素分子。4.根据权利要求1所述的检测克百威残留量的荧光适体层析试纸，其特征在于:所述底板为长方形的平板。5.一种检测克百威残留量的荧光适体层析试纸笔，其特征在于:包括权利要求1-4中所述的试纸以及用于包覆所述试纸的外壳(8)，所述外壳内部设有用于安装试纸的卡槽，夕卜壳的正面设有观察口( 10)，所述观察口( 10)的位置与试纸上检测线(6)和质控线(7)位置对应；所述试纸的吸液层(5)作为检测端位于所述外壳(8)的一端，所述检测端上设有检测帽(9)0
【专利摘要】本实用新型公开了一种检测克百威残留量的荧光适体层析试纸及其试纸笔，所述试纸包括底板，所述底板上依次顺序粘贴有样品吸液层、适体结合垫、NC膜和吸水垫，所述NC膜上喷涂有适体互补序列的检测线和由生物素形成的质控线；所述适体结合垫上喷涂有结合了克百威适体的稀土离子高分子纳米微球；所述试纸笔包括试纸以及用于包覆所述试纸的外壳，所述外壳内部设有用于安装试纸的卡槽，外壳的正面设有观察口，所述观察口的位置与试纸上检测线和质控线位置对应；所述试纸的吸液层作为检测端位于所述外壳的一端，所述检测端上设有检测帽。本实用新型灵敏度高、操作简便快速、显示结果形象直观准确、成本低、易于大范围推广应用。
【IPC分类】G01N33/558
【公开号】CN205003160
【申请号】CN201520639745
【发明人】王耘
【申请人】金陵科技学院
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年8月24日