一种a/b族链球菌胶体金免疫层析检测装置的制造方法
【专利摘要】本实用新型提供一种A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置。该检测装置能够用于胶体金免疫层析法检测样品中的A/B族链球菌。本实用新型提供的检测装置包括检测试纸和盒体(7)；检测试纸包括从左到右依次连接并设置在底基(1)上的样品垫(2)、结合物垫(3)、包被膜(4)和吸水垫(5)，所述的吸水垫(5)上设有标签识别贴(6)；盒体包括加样孔(10)、标签观察窗口(8)和结果观察窗口(9)，所述的加样孔(10)设有与其相配套的加样孔防污盖(11)。本实用新型旨在提供一种准确、快速、易于区分检测项目名称的检测装置，提高了临床检测效率，便于临床检测的流程化管理的。
【专利说明】
一种A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置
技术领域
[0001]本实用新型涉及胶体金免疫检测领域，具体而言，涉及一种A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置。
【背景技术】
[0002]A族链球菌是在世界范围内普遍存在的以人类为主要生物学宿主的细菌性病原体。在临床上推广使用A族溶血性链球菌快速检测产品快速筛选病原体，对于临床治疗上合理使用抗生素、避免抗生素滥用等具有非常重要的意义。B族链球菌可引起新生儿败血症、肺炎、脑膜炎，甚至死亡。感染后存活的新生儿，还有可能有严重的神经系统后遗症，包括脑积水、智力障碍、小头畸形、耳聋等。因此，对孕妇B族链球菌的检测非常重要和必须。
[0003]胶体金免疫层析法是一种快速、简便、灵敏、直观，并可进行现场检测的方法，而且有实验结果表明，胶体金检测的敏感性正逐步接近和达到ELISA的水平。
[0004]目前依据胶体金免疫层析法原理快速检测A/B族链球菌的试纸条被广泛应用于临床中。现有的检测装置通常将检测项目名称置于外包装盒上。在临床检测中，除去外包装盒的试纸条则不便于识别检测项目的类型，造成检测结果难以被快速、准确的分类和记录。同时现有的检测装置中即便包含具有保护试纸条不被污损的功能的盒体，但该类盒体的检测项目名称通常置于盒体表面，造成检测项目名称遮挡检测结果或需翻转盒体后才能查看的情况，不利于临床检测的流程化管理。该种位置的检测项目名称也易被污损，导致检测装置作废，造成浪费。
[0005]因此，本领域迫切需要提供一种在临床中能够实现快速、准确地检测A/B族链球菌并分类记录的检测装置，便于临床检测的流程化管理，以满足临床检测的需要，实现即时床边检测需求。
【实用新型内容】
[0006]有鉴于此，本实用新型提供了一种A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，所述的检测装置包括盒体，以及位于盒体内的检测试纸;所述的检测试纸包括底基、以及从左到右依次连接并设置在所述底基上的样品垫、结合物垫、包被膜和吸水垫;所述的检测试纸的结合物垫上含有胶体金抗A/B族链球菌单克隆抗体交联物;所述的检测试纸的包被膜上从左到右依次设有一道检测线T和一道质控线C;所述的检测线T包被有固相化的抗A/B族链球菌单克隆抗体，所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体，所述的吸水垫上设有标签识另IJ贴;所述的盒体开设有用于向所述样品垫添加样品液的加样孔、用于观察所述包被膜的结果观察窗口和用于观察所述标签识别贴的标签观察窗口。
[0007]在某些实施方式中，所述的样品垫右端具有搭接在所述的结合物垫上的样品搭接部，所述的结合物垫右端具有搭接在所述包被膜上的结合物搭接部，所述的吸水垫左端具有搭接在包被膜上的吸水搭接部。
[0008]在某些实施方式中，所述的样品搭接部在其延伸方向上与所述的结合物搭接部留有间距。
[0009]在某些实施方式中，所述的检测试纸的样品垫是由玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成的样品垫。
[0010]在某些实施方式中，所述的检测试纸的结合物垫是由聚酯纤维素膜或玻璃纤维膜制成的结合物垫。
[0011]在某些实施方式中，所述的检测试纸的包被膜由硝酸纤维素膜制成的包被膜。
[0012]在某些实施方式中，所述的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置进一步包括一种或多种选自下组的组成部分:用于固定所述检测试纸的固定底座、上盖、干燥剂、滴管、说明书、颜色标签、样品收集管、和样品稀释液。
[0013]在某些实施方式中，所述的加样孔设有与其相配套的加样孔防污盖并用于打开和闭合加样孔。
[0014]在某些实施方式中，所述的加样孔防污盖以可拆卸的方式与盒体连接，以打开和盖合加样孔。
[0015]与现有技术相比，采用本实用新型提供的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，能够利用胶体金免疫层析法对A/B族链球菌进行快速的检测，同时通过吸水垫上设置的标签识别贴和盒体上的标签观察窗口，避免了检测项目名称置于盒体表面时出现的遮挡检测结果以及污损而不能辨认的情况，实现了准确、快速区分检测项目的目的，提高了临床检测效率，便于临床检测的流程化管理。
[0016]进一步的通过设置加样孔防污盖，避免了现有装置中检测试纸从开放的加样孔处污染的情况，完善了盒体对于检测试纸的保护功能。
[0017]由此可以看出，与现有检测装置相比，以上改进能够有效的节约检测流程所需要的时间、减少临床检测中由于检测试纸污染而造成的浪费。
【附图说明】
[0018]图1是本实用新型提供的检测装置结构示意图；
[0019]图2是本实用新型提供的检测装置的盒盖俯视图；
[0020]图3是本实用新型提供的检测试纸结构示意图；
[0021 ]图4是本实用新型提供的检测试纸判定结果为阳性时俯视图；
[0022]图5是本实用新型提供的检测试纸判定结果为阴性时示意图；
[0023]图6是本实用新型提供的检测试纸判定结果为无效时示意图。
[0024]其中:底板I，样品垫2，结合物垫3，包被膜4，吸水垫5，检测线T，质控线C，标签识别贝占6，盒体7，标签观察窗口 8，结果观察窗口 9，加样孔10，加样孔防污盖11。
【具体实施方式】
[0025]下面结合具体实施例的方式对本实用新型的权利要求做进一步的详细说明，但并不构成对本实用新型的任何限制，任何人在本实用新型权利要求范围内所做的有限次的修改，仍在本实用新型的权利要求范围之内。
[0026]为了便于理解本实用新型，下面合实施例来进一步说明本实用新型的技术方案。
[0027]实施例1
[0028]从图1至图2可见，本实用新型的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，包括盒体7，以及位于盒体内的检测试纸，所述的检测试纸包括底基1、以及从左到右依次连接并设置在所述底基I上的样品垫2、结合物垫3、包被膜4和吸水垫5;所述的检测试纸的结合物垫3上含有胶体金抗A/B族链球菌单克隆抗体交联物;所述的检测试纸的包被膜4上从左到右依次设有一道检测线T和一道质控线C;所述的检测线T包被有固相化的抗A/B族链球菌单克隆抗体，所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体;所述的吸水垫5上设有标签识别贴6;所述的盒体7开设有用于向所述样品垫2添加样品液的加样孔10、用于观察所述包被膜4的结果观察窗口 9和用于观察所述标签识别贴6的标签观察窗口 8。
[0029]应当理解的是，实施方式中，通过开设在盒体7上的标签观察窗口8能够观察到位于吸水垫5上的标签识别贴6，从而获得了对检测装置的检测项目依据名称进行准确分类、快速记录检测结果的效果，起到了快速、准确检测A族链球菌或B族链球菌的目的。
[0030]进一步的所述的样品垫2右端具有搭接在所述的结合物垫3上的样品搭接部，所述的结合物垫3右端具有搭接在所述包被膜4上的结合物搭接部，所述的吸水垫5左端具有搭接在包被膜4上的吸水搭接部。
[0031]“搭接”是指，相邻的两个组件的首尾部分重叠，并且在重叠处形成可以允许液体样品移动的连接结构。例如，可以在相邻的两个组件的首尾部分通过按压操作形成较为紧密的重叠结构，使得样品能够从上游组件的尾部通过该重叠结构移动至下游组件上。上游组件可以重叠在下游组件的上方，也可以重叠在下方。在检测时，可以将液体状态的样品(如血液，血浆以及其他体液稀释液等)加样到样品垫2上，该液态状态的样品可以通过吸水作用，沿着样品垫2向与之搭接的结合物垫3移动，接触到结合物垫3后再沿着结合物垫3向与之搭接的包被膜4移动，接触到包被膜4之后再沿着包被膜4向与之搭接的吸水垫5移动。
[0032]这样的移动通常称为层析作用，由此可知，进一步的，所述的样品搭接部在其延伸方向上与所述的结合物搭接部留有间距，可以使得结合物垫上胶体金标记后特异性抗体能够与样品中的待测抗原留有充分的结合时间，如待测样品中存在所要检测的特异性抗原，则可以在含有胶体金标记后特异性抗体的结合物垫处形成抗原一抗体一胶体金复合物;所述的结合物搭接部在其延伸方向上与所述的吸水搭接部留有间距，预留充分的结合时间以便上述抗原一抗体一胶体金复合物于包被膜上形成抗体一抗原一抗体一胶体金复合物，即发生双抗夹心的特异性结合。
[0033]在该实施例中，所述的检测线T和所述的质控线C平行设置。
[0034]样品加到样品垫2上后，其中的物质通过层析作用，依次移动到结合物垫3和包被膜4上。当样品移动到结合物垫3时，其中的待检测抗体，如人抗体，可与结合物垫3上包被的金属胶体标记的特异性抗体相结合，然后含有从结物合垫3上结合或混合的物质的样品继续移动到包被膜4上，并与包被膜4上包被的特异性抗体相结合并且被截留，从而使得样品中的被检物质得以被检测。应该理解的是特异性抗体经包被液包被于包被膜4上，即检测线T;质控线C通常为包被液包被与包被膜4上的羊抗鼠多克隆抗体或羊抗兔多克隆抗体。检测线T与质控线C之间应留有适当间距，而设置为相互平行的区域，更便于区分两者。
[0035]所述的检测试纸的样品垫2可以是由聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成的样品垫，优选玻璃纤维样品垫;玻璃纤维相对于其他材料脱水性好、不黏连样品。
[0036]所述的包被膜4优选硝酸纤维素膜制成的包被膜，硝酸纤维素膜的蛋白固定能力优于其他材料制成的包被膜，能够更好的固化包被在其上的蛋白质，即本实用新型中涉及的A/B链球菌单克隆抗体和羊抗鼠多克隆抗体。
[0037]所述的结合物垫3可由玻璃纤维膜制成，优选地由聚酯纤维素膜制成，聚酯纤维素膜与胶体金的亲和力优于其他材料制成的结合物垫，防止胶体金发生聚集或形成沉淀。
[0038]所述的检测试纸的底基I优选地由PVC板制成的底基，PVC板易于获得，较为便宜，并且具有很好的稳定性，并易于固定上述材料。
[0039]该实施方式中所述的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置进一步包括一种或多种选自下组的组成部分:用于固定所述检测试纸的固定底座、盒体的上盖、干燥剂、滴管、说明书、颜色标签、样品收集管、和样品稀释液。以上组成部分均为检测装置使用时或保存时的常用物品，便于操作，可与检测装置组合成便于临床操作的检测套装。
[0040]该实施例中还提供了与所述的盒体7还包括与加样孔10相配套的加样孔防污盖11用于打开和闭合加样孔10，从而起到防止污染物进入加样孔10的作用。加样孔防污盖11可以存在多种形式，如:与加样孔10尺寸、形状相匹配的薄盖，该薄盖可以相对于加样孔10左右滑动，从而打开和闭合加样孔10;也可以以可拆卸的方式与盒体7相连，不易脱落丢失。
[0041]本申请还提供了该A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置的检测方法:
[0042]I)确认检测项目名称后用移液枪吸取大约100微升样品液由加样孔10加样到样品垫2;
[0043]2)样品液通过吸水垫5的吸水作用，沿着样品垫2向与之搭接的结合物垫3移动，
[0044]若样品液中含有A/B族链球菌，该A/B族链球菌可与结合物垫3上胶体金抗A/B族链球菌单克隆抗体交联物结合形成A/B族链球菌一抗A/B族链球菌单克隆抗体一胶体金复合物，含有所述复合物的样品液继续移动至包被膜4上，并与包被膜4上检测线T处包被的抗A/B族链球菌单克隆抗体结合，形成抗A/B族链球菌单克隆抗体一 A/B族链球菌一抗A/B族链球菌单克隆抗体一胶体金复合物，检测线T出现红色条带，质控线C处也出现红色条带，检测结果为阳性；
[0045]若样品液中不存在A/B族链球菌，检测线T则无红色条带出现，只有质控线C处出现红色条带，检测结果为阴性；
[0046]若检测线T和质控线C均未出现红色条带，则代表操作有误或检测结果无效，需重复试验。
[0047]结果判断:加样10分钟后，观察结果窗口9，参阅图4，当质控线C和检测线T都有红色条带出现时说明样品中含有能够与检测蛋白特异性结合的抗体，A/B族链球菌为阳性；
[0048]参阅图5，当只有质控线C有红色条带而检测线T无红色条带时，说明样品中A/B族链球菌为阴性。
[0049]参阅图6当质控线C和检测线T均未出现红色条带，则代表操作有误或检测结果无效，需重复试验。
[0050]该检测方法可用于孕妇或儿童A/B族链球菌的早期筛查。
[0051]此外，本申请还提供了A/B族链球菌胶体金免疫层析检测试装置中检测试纸的制备方法:检测试纸包括底基1、以及从左到右依次连接并设置在所述底基I上的样品垫2、结合物垫3、包被膜4和吸水垫5;所述的检测试纸的结合物垫3上含有胶体金抗A/B族链球菌单克隆抗体交联物;所述的检测试纸的包被膜4上从左到右依次设有一道检测线T和一道质控线C;所述的检测线T包被有固相化的抗A/B族链球菌单克隆抗体，所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体，所述的吸水垫5上设有标签识别贴6;
[0052]其中:
[0053]I)样品垫2的制备方法是:将样品垫2裁成20mmX 300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，I小时之后取出，于室温干燥16-18小时。
[0054]样品垫2的缓冲液配方如下:2 % BSA、I % PVP、0.5 % Twe en溶解于0.0I的PBS(PH7.4)缓冲液中。
[0055]2)结合物垫3的制备方法:
[0056]①胶体金溶液的配制:将浓度为lmg/ml氯金酸溶液950ml加热煮沸5?10分钟，加入浓度为100mg/ml的柠檬酸三钠溶液50ml，混匀，继续加热5?10分钟，直至溶液变透明玫瑰红色为止。加纯化水补足体积至1000ml。
[0057]②抗A/B族链球菌抗体金标液的配制:取上述胶体金溶液300ml，加入0.1M K2CO3置于室温搅拌，调节溶液的pH值至8.0;取抗A/B族链球菌单克隆抗体6mg，加入浓度为0.015M体积为20mlPBS缓冲溶液中混匀后加入搅拌中的胶体金溶液中；将上述混合溶液室温下搅拌2小时；搅拌结束后加入3%聚乙二醇20000溶液160ml，混匀；室温下以13000转/分钟，离心30分钟分离上述溶液;离心结束后弃去上清液，取沉淀，将该沉淀溶解于10ml的金标抗体保存液中。
[0058]③将上述抗A/B族链球菌单克隆抗体金标液用金标抗体保存液稀释后，铺于结合物垫3上，置于温度为37°C的干燥间内干燥4?6小时;干燥后的金标结合物垫3同干燥剂一同放入密封袋，置玻璃干燥器中保存备用。
[0059]3)包被膜4的制备方法:
[0060]①包被
[0061 ]包被液的制备:取硼酸12g，氢氧化钠2g溶于纯化水并定容至1000ml。
[0062]检测线T:在包被膜4上划线，在膜的一端用记号笔做好质控线C和检测线T的标记，质控线C和检测线T的距离为0.5cm，检测线T与包被膜4下缘的距离为lcm，用上述包被液将抗A/B族链球菌单克隆抗体稀释到1.2mg/mL进行包被，划线浓度为IyL/cm，速度10mm/s。
[0063]质控线C:上述包被液将羊抗鼠多克隆抗体稀释到1.2mg/mL进行包被，划线浓度为IyL/cm，速度 I OOmm/s。
[0064]②干燥
[0065]置于37°C干燥间内4?6小时；干燥完毕后将包被膜4与干燥剂一同放入密封袋置于玻璃干燥器中保存备用。
[0066]另外，A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置中检测试纸的组装方法如下:
[0067]①利用裁切机裁切样品垫2、结合物垫3和吸水垫5，裁切后的样品垫2宽度为10_，长度为58mm;裁切后的结合物3垫宽度为7mm，长度为58mm;裁切后的吸水垫5宽度为10mm，长度为58mm。
[0068]②将宽度为1mm的吸水垫贴5装于PVC底基I上，并且使其下端与包被膜4叠压2mm，然后撕去结合物垫3下端保护膜，将宽度7mm的结合物垫3与包被膜4叠压2mm，进一步在结合物垫3下方粘贴宽度1mm的样品垫2;粘贴时需要将吸水纸、结合物垫3、样品垫2均匀、轻微滚动式推进，以加强粘合力，并防止产生气泡。
[0069]③取出粘贴好的检测试纸置于切板机上，切成宽度为2mm，然后在铝箔袋中放入一包Ig的干燥剂和裁切好的检测试纸，在封口机上将铝箔袋热合封口。
[0070]本实验新型实施例中，检测装置还可含有未图示的滴管、干燥剂、说明书、颜色标签、样品收集管、和样品稀释液。
[0071]前述，本实验新型提供的A/B链球菌检测装置还包括I号抽提液和2号抽提液。所述的抽提液为细胞抽提液，用于裂解采集到的样品中细胞，并将细胞内的蛋白溶解于细胞抽提液中。具体过程:在试管中依次加入5滴I号和2号抽提液，用无菌棉拭子挑取部分样品放入已加入上述抽提液的试管中，在室温下静置2分钟，通过反复将无菌棉拭子的拭子头于上述试管壁上挤压，旋转，尽可能多的获得样品抽提物。承装所述的I号抽提液和2号抽提液的试剂瓶由PVC制成。
[0072]其中:I号抽提液制备过程:称取亚硝酸钠138.75g加入纯化水1000ml。
[0073]2号抽提液制备:量取冰醋酸57.44ml加纯化水至1000m。
[0074]本申请中提供的检测装置使用胶体金免疫层析法，利用位于吸水垫5上的标签识另IJ贴6和盒体7开设的标签观察窗口8相配合，提高了临床检测的效率，同时避免了由于标识不明，造成的检测装置的浪费。
【主权项】
1.一种A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，所述的检测装置包括盒体(7)，以及位于盒体(7)内的检测试纸，其特征在于: 所述的检测试纸包括底基(I )、以及从左到右依次连接并设置在所述底基(I)上的样品垫(2)、结合物垫(3)、包被膜(4)和吸水垫(5);所述的检测试纸的结合物垫(3)上含有胶体金抗A/B族链球菌单克隆抗体交联物;所述的检测试纸的包被膜(4)上从左到右依次设有一道检测线(T)和一道质控线(C);所述的检测线(T)包被有固相化的抗A/B族链球菌单克隆抗体，所述的质控线(C)包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体，所述的吸水垫(5)上设有标签识别贴(6); 所述的盒体(7)开设有用于向所述样品垫(2)添加样品液的加样孔(10)、用于观察所述包被膜(4)的结果观察窗口(9)和用于观察所述标签识别贴(6)的标签观察窗口(8)。2.如权利要求1所述的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，其特征在于:所述的样品垫(2)右端具有搭接在所述的结合物垫(3)上的样品搭接部，所述的结合物垫(3)右端具有搭接在所述包被膜(4)上的结合物搭接部，所述的吸水垫(5)左端具有搭接在包被膜(4)上的吸水搭接部。3.如权利要求2所述的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，其特征在于:所述的样品搭接部在其延伸方向上与所述的结合物搭接部留有间距。4.如权利要求1所述的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，其特征在于:所述的检测线(T)和所述的质控线(C)平行设置。5.如权利要求1所述的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，其特征在于:所述的检测试纸的样品垫(2)是由玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成的样品垫(2)。6.如权利要求1所述的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，其特征在于:所述的检测试纸的结合物垫(3)是由聚酯纤维素膜或玻璃纤维膜制成的结合物垫(3)。7.如权利要求1所述的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，其特征在于:所述的检测试纸的包被膜(4)由硝酸纤维素膜制成的包被膜(4)。8.如权利要求1所述的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，其特征是进一步包括一种或多种选自下组的组成部分:用于固定所述检测试纸的固定底座、上盖、干燥剂、滴管、说明书、颜色标签、样品收集管、和样品稀释液。9.如权利要求1所述的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，其特征在于:所述的加样孔(10)设有与其相配套的加样孔防污盖(11)并用于打开和闭合加样孔(10)。10.如权利要求1或9所述的A/B族链球菌胶体金免疫层析检测装置，其特征在于:所述的加样孔(10)设有与其相配套的加样孔防污盖(11)，所述的加样孔防污盖(11)以可拆卸的方式与盒体(7)连接。
【文档编号】G01N33/558GK205426926SQ201620261940
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2016年3月30日
【发明人】张兆鸿
【申请人】珠海华澳生物科技有限公司