，核苷酸含量 一定时间内能保持稳定，核苷酸含量在样品放置了 266小时内都较稳定。所以建议样品上机 时间为样品制备好之后的60~240小时，上机前样品需要冷藏保存（图38)。
[0104] 实施例4方法检出限、定量限、线性范围、回归方程、回收率等参数
[0105] 1、定量限
[0106] 本方法的定量限采用添加法进行实际测定得到，以10倍信噪比对应的浓度得出仪 器的定量限为〇.5mg/kg，方法的定量限需乘以稀释倍数后累加物种核苷酸浓度，本方法的 稀释倍数为20倍，因而方法的定量限为10mg/kg。
[0107] 2、方法的线性范围和回归方程
[0108]本方法测定的线性范围为:0.5mg/kg~50.0 mg/kg，乘以稀释倍数后，每种核苷酸 的线性范围是l〇mg/kg~1000mg/kg。线性范围覆盖定量限和关注浓度水平，线性相关系数 为0.9999,具有5个数据点，并且通过平行测定3次来进行验证。线性回归方程和相关系数详 见表1~表5。标准回归曲线如附图23~27所示。
[0109] 表1胞嘧啶核苷线性回归方程和相关系数表
[0115] 表4鸟嘌呤核苷线性回归方程和相关系数表
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[0119] 3、正确度（回收率)和重复性试验
[0120]本方法通过在样品基质中加标方法测定回收率的方法来验证方法的正确度。婴幼 儿配方奶粉的5种核苷酸选择2倍定量限、5倍定量限、10倍定量限三个水平进行回收率试 验。每个水平重复进行3次平行单独测定，测定结果如表6和7。五种核苷的线性标准回归曲 线如附图23~27所示。
[0121] 结果表明，本发明方法的总体平均回收率为82.44 %~98.92 %，方法的相对标准 偏差为0.60%~2.27%，能够满足日常检测需要。
[0122] 表6奶粉中不同添加水平的核苷酸回收率范围
[01231
[C
[0125]表7米粉中核苷酸不同添加水平回收率范围
[0126]
[C
[0128」4、经过测足，5柙核苷酸标准物质的
液相色谮图如附图28所不，图中依次为CMP、 UMP、GMP、AMPaMP0
[0129]奶粉样品空白测定以及加标后测定5种核苷酸液相的色谱图分别如附图29~32所 不。
[0130]米粉样品空白测定以及加标后测定5种核苷酸液相的色谱图分别如附图33~36所 不。
[0131 ]实施例5方法稳定性研究
[0132] 另外，本发明还对该方法的稳定性进行了研究，将标准储备液放置三个月，进行期 间核查，比较新旧工作曲线的响应值。
[0133] 结果表明，标准储备液在二个月内稳定。
[0134] 实施例6方法的应用和适用性
[0135] 婴幼儿配方奶粉是非母乳喂养婴儿最重要的营养来源，婴幼儿健康成长是整个社 会普遍关心的重要问题。目前在我国市场上流通的婴幼儿辅助食品主要有国内外厂家生产 的营养乳粉配方食品，还包括部分国外厂家生产的以谷物类为基础的配方食品。我国婴幼 儿配方奶粉市场需求巨大，但基础营养与加工技术研究起步较晚，其中婴幼儿辅助食品的 种类、质量是食品科技工作者研究的一类重要课题。近年来，全球婴幼儿配方奶粉的市场需 求不断增大，婴幼儿配方奶粉的世界产量在2007年至2010年间平均每年以8.2%的速度增 长，从2010年到2014年平均同比增长达到11 %，并且随着中国市场的极速增长，这个数字将 超过20%。根据第四次国家卫生服务调查，我国每年新生婴幼儿约2000万，且自2002年以来 人口出生率以1.24%增长，庞大的婴幼儿消费群体孕育了我国巨大的婴幼儿奶粉市场。同 时，随着收入水平的提高，消费者对孩子的健康成长有着更高的消费意愿，有更多的需求并 有能力购买更高品质的婴幼儿奶粉。我国婴幼儿配方奶粉的市场前景极好。
[0136] 而核苷酸作为一类增强婴幼儿免疫功能的活性物质，经常被添加到各类配方奶粉 中。核苷酸可以维持免疫系统的正常功能，提高人体对各类病菌的抵抗力。核苷酸能促进小 肠成熟，改善肠道吸收功能。还可以刺激双歧杆菌生长，减少婴儿便秘、腹泻的发生。此外核 苷酸还有极好的抗氧化作用，维持肝脏的正常功能。有些国家将核苷酸添加到婴儿奶粉中， 发现核苷酸能加强对免疫的反应并降低腹泻的发生。虽然足月婴儿的临床实验显示这样的 补充对婴儿增长没有明显益处，但对于低出生体重婴儿，关于补充核苷酸后的体重、身高、 头围的改进己有报道。但是我国还没有关于婴幼儿食品、乳品中关于核苷酸检测的国家标 准。
[0137] 本标准采用液相色谱法对婴幼儿配方奶粉中的核苷进行测定。为了验证方法的适 用性，使用本方法对通过进口法检委托的18个婴幼儿配方奶粉样品和17个婴幼儿配方米粉 进行了检测。
[0138] 婴幼儿配方奶粉实际样品的信息表和检测结果如表8所示。
[0139] 表8婴幼儿配方奶粉和米粉实际样品信息与测定结果
[0140]
[0141]
【主权项】
1. 一种食品中核苷酸的高效液相色谱检测法，其特征在于，包括如下步骤：51. 样品前处理：称取待测样品，加入水，调节pH至4~5,涡旋5~lOmin后，加入乙醇溶 液，蜗旋5~10min后8000~12000r/min离心5~15min，用乙醇溶液洗涤，55~70°C旋干，用水定 容，取0.5~2mL过0.22卩111滤膜于进样瓶中，供上机分析；52. 进行高效液相色谱检测。2. 根据权利要求1所述的高效液相色谱检测法，其特征在于，步骤S2所述高效液相色谱 检测的色谱柱为SB-AQ柱。3. 根据权利要求1所述的高效液相色谱检测法，其特征在于，步骤S2所述高效液相色谱 检测的流动相为四丁基硫酸氢铵。4. 根据权利要求1所述的高效液相色谱检测法，其特征在于，步骤S2所述高效液相色谱 检测波长为254nm〇5. 根据权利要求2所述的高效液相色谱检测法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的 柱温在60~70 °C之间。6. 根据权利要求1所述的高效液相色谱检测法，其特征在于，步骤S2所述高效液相色谱 检测的样品上机时间为样品制备好之后的60~240小时，上机前样品需要冷藏保存。7. 根据权利要求3所述的高效液相色谱检测法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的 流动相的pH为2.75 ±0.3。8. 根据权利要求3所述的高效液相色谱检测法，其特征在于，所述流动相的浓度为 1.5mmol〇9. 根据权利要求1所述的高效液相色谱检测法，其特征在于，所述食品为奶粉、米粉和/ 或奶米粉。10. 根据权利要求1所述的高效液相色谱检测法，其特征在于，步骤S1所述调节pH为用 乙酸调节pH在4~5之间。
【专利摘要】本发明公开了一种食品中核苷酸的高效液相色谱检测法，首先样品前处理：称取待测样品，加入水，用乙酸调节pH至4～5，涡旋5~10min后，加入乙醇溶液，蜗旋5~10min后8000~12000r/min离心5~15min，用乙醇溶液洗涤，55~70℃旋干，用水定容，取0.5~2mL过0.22μm滤膜于进样瓶中，供上机分析；接着进行高效液相色谱检测。本发明以乙酸与乙醇作为共沉淀剂，应用SB-AQ柱和四丁基硫酸氢铵分离和检测核苷酸，方法的平均回收率为82.44%～98.92%，相对标准偏差为0.60%～2.27%，且该方法可同时检测奶粉、米粉和奶米粉中的核苷酸，适合多种产品，适用范围广，应用前景好。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105651891
【申请号】
【发明人】易蓉, 韦晓群, 翁文川, 李荀, 王志元, 郑璇, 陈文锐, 吴志航, 张玉文, 黄维龙, 杜斯航
【申请人】广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年2月19日