专利名称：一种高叶黄素含量益眼功能茶的培育方法
技术领域：
本发明涉及一种高叶黄素含量益眼功能茶的培育方法。
技术背景老花眼系困扰全球人类健康的普遍性疾病，无从防治和预防，其形成实质为动脉硬化。老年性黄斑变性是导致后天性失明的首因，全球2500-3000万人受 影响。白内障是视力残疾的最常见原因，我国近400多万盲人中多数因其所致， 每年新生白内障约40万人。叶黄素价格昂贵，素有"植物黄金"之美称，具有良好的保护视觉、抗氧 化、预防动脉硬化等功能，是国际功能食品成分的研究热点，同时也是眼视网 膜和晶状体内唯一被发现的组成色素，但人体不能合成，依赖饮食摄取。众多 研究表明，叶黄素对预防动脉硬化、降低白内障和老年性黄斑变性的发病率具 有重要作用。采用现代生物技术培育新一代茶树品种已成为国内外的研究热点。以茶叶 为载体，培育一种具有预防老花眼、老年性黄斑变性和白内障的功能茶叶很有 价值。 发明内容本发明的目的在于提供一种高叶黄素含量益眼功能茶的培育方法。 本发明的高叶黄素含量益眼功能茶的培育方法，包括以下步骤1) 取名茶品种的成熟种子或幼嫩芽叶为外植体，接种至MS诱导培养基， 于25士1'C下诱导愈伤组织；2) 选择1-2周的愈伤组织，转移至含添加"/。a-胡萝卜素的MS诱导培养基， 培养至愈伤组织进入快速增殖期；3) 挑取新增生的愈伤组织，置于35"C和3000Lux强光下筛选l周，转移至 新鲜的MS诱导培养基，继代培养1周后又置于35"C和3000Lux强光下筛选1 周，将仍成活的愈伤组织转移至新鲜的MS诱导培养基，继代培养1周后再次 置于35'C和3000Lux强光下筛选1周；4) 选择存活的愈伤组织，转移至MS分化培养基，诱导分化成苗，按单株 编号种植；5) 摘取新生的二叶一心嫩芽茶，测定鲜叶中的叶黄素含量；将鲜叶中叶黄 素含量高于0.1%的茶叶植株，利用扦插或微繁的方法进行繁育；6) 摘取新生的二叶一心嫩芽茶，制成绿茶，测定绿茶中的叶黄素含量，保 留绿茶中叶黄素含量高于0.1%的茶叶材料；7) 继续种植扩繁步骤7)筛选的茶叶材料，评价验证叶黄素表达的稳定性， 对稳定的材料进行繁殖，获得叶黄素含量稳定在0.1%以上的茶叶新材料。上述的稳定性是指入选茶叶的叶黄素含量可在不同年份间(2年及以上)、 季节间(2季及以上)以及地点间(2个地点及以上)表达一致，特性不受年份、 季节以及地点的显著影响。本发明中所说的名茶品种是指我国各地的优良茶叶品种。本发明中所说的MS诱导培养基是MS基本培养基添加6BA4mg/L， NAAlmg/L， 0.05%PVP，活性碳5g/L，灭菌前pH调至5.8。本发明中所说的MS分化培养基是MS基本培养基添加2BA4mg/L， KT3mg/L，活性碳2g/L，灭菌前pH调至5.8。本发明具有以下几方面的有益效果本发明以我国国饮茶叶为素材，不仅符合我国的饮食文化，更是紧密符合 全球市场的需求，以茶叶为有效载体，从源头预防老花眼、白内障和老年性黄 斑变性的发生。
具体实施方式
以下通过具体实例进一步说明本发明。实施例1:从名茶品种"西湖龙井"培育叶黄素含量高达0.11%以上的茶叶 及其食用效果以浙江名茶品种"西湖龙井"的新鲜成熟种子为外植体，接种至MS诱导培养基，于25土rc下诱导形成愈伤组织，选择诱导形成l周的愈伤组织，转移至含添加1%01-胡萝卜素的MS诱导培养基，培养至3周左右待愈伤组织进入快 速增殖期，挑取新增生的愈伤组织，置于35。C和3000Lux强光下每次l周，将 愈伤组织转移至新鲜的MS诱导培养基，继代培养1周后又置于35'C和3000Lux 强光下筛选1周，将仍成活的愈伤组织转移至新鲜的MS诱导培养基，继代培 养1周后再次置于35'C和3000Lux强光下筛选1周，选择仍然存活的愈伤组织 转移至MS分化培养基，诱导分化成苗，单株编号种植幼苗981株；采用高效 液相色谱法[色谱柱为C18柱(4.6mmxl50mm; 5pm)，流动相为乙腈-甲醇(95: 5);流速0.7mL/min，检测波长446nm;柱温室温。结果叶黄素在 7.686 17.93pg/mL范围内线性关系良好]测定新生的二叶一心嫩芽茶中的叶黄素 含量，入选叶黄素含量高于0.1%的茶叶植株2株，采用微繁的方法繁育，摘取新生二叶一心的嫩芽茶，按常规加工的方法制成绿茶，测定绿茶中的叶黄素含量，入选绿茶中叶黄素含量高于0.1%的变异系1个，经叶黄素表达的稳定性评 价验证，获得叶黄素含量稳定在0.1°/。以上的茶叶新材料1个---EasyEyeT-2。2006 年以来，以该茶为材料，组织30个老化眼患者进行1年以上的食用跟踪试验， 发现老花眼患者每天饮用该类茶6g左右(每天3次，每次取茶叶2g) ， 6个月 左右可见不同程度的显著效果。实施例2:从名茶品种"径山茶"培育叶黄素含量高达0.15%以上的茶叶及 其食用效果以浙江余杭地方名茶品种"径山茶"的幼嫩芽叶为外植体，接种至MS诱 导培养基，于25土rC下诱导形成愈伤组织，选择诱导形成1周的愈伤组织，转 移至含添加P/。a-胡萝卜素的诱导培养基，培养至3周左右待愈伤组织进入快速 增殖期，挑取新增生的愈伤组织，置于35'C和3000Lux强光下每次l周，将愈 伤组织转移至新鲜的MS诱导培养基，继代培养1周后又置于35。C和3000Liix 强光下筛选1周，将仍成活的愈伤组织转移至新鲜的MS诱导培养基，继代培 养1周后再次置于35。C和3000Lux强光下筛选1周，选择仍然存活的愈伤组织 转移至MS分化培养基，单株编号种植幼苗758多株，采用高效液相色谱法[色 谱柱为C18柱(4.6mmxl50mm; 5pm)，流动相为乙腈-甲醇(95: 5);流速 0.7mL/min，检测波长446nm;柱温室温。结果叶黄素在7.686~17.93pg/mL范 围内线性关系良好]测定新生的二叶一心嫩芽茶中的叶黄素含量，入选叶黄素含 量高于0.1%的茶叶植株3株，采用微繁的方法繁育，于第二年春摘取二叶一心 的嫩芽茶制成绿茶，测定绿茶中的叶黄素含量，入选绿茶中叶黄素含量高于0.1% 的变异系2个，经叶黄素表达的稳定性评价验证，获得农艺性状优良/叶黄素含 量稳定在0.1。/。以上的茶叶新材料1个一EasyEyeT-3。 2007年以来，以该茶为材 料，组织20个老化眼患者进行1年以上的饮用试验，发现老花眼患者每天饮用 该类茶6g左右(每天3次，每次约取茶叶2g) ， 6个月左右可见不同程度的显 著效果。
权利要求
1. 一种高叶黄素含量益眼功能茶的培育方法，其特征在于包括以下步骤1)取名茶品种的成熟种子或幼嫩芽叶为外植体，接种至MS诱导培养基，于25±1℃下诱导愈伤组织；2)选择1-2周的愈伤组织，转移至含添加1％α-胡萝卜素的MS诱导培养基，培养至愈伤组织进入快速增殖期；3)挑取新增生的愈伤组织，置于35℃和3000Lux强光下筛选1周，转移至新鲜的MS诱导培养基，继代培养1周后又置于35℃和3000Lux强光下筛选1周，将仍成活的愈伤组织转移至新鲜的MS诱导培养基，继代培养1周后再次置于35℃和3000Lux强光下筛选1周；4)选择存活的愈伤组织，转移至MS分化培养基，诱导分化成苗，按单株编号种植；5)摘取新生的二叶一心嫩芽茶，测定鲜叶中的叶黄素含量；将鲜叶中叶黄素含量高于0.1％的茶叶植株，利用扦插或微繁的方法进行繁育；6)摘取新生的二叶一心嫩芽茶，制成绿茶，测定绿茶中的叶黄素含量，保留绿茶中叶黄素含量高于0.1％的茶叶材料；7)继续种植扩繁步骤7)筛选的茶叶材料，评价验证叶黄素表达的稳定性，对稳定的材料进行繁殖，获得叶黄素含量稳定在0.1％以上的茶叶新材料。
全文摘要
本发明涉及一种高叶黄素含量益眼功能茶的培育方法，其步骤为取名茶品种的成熟种子或幼嫩芽叶为外植体，诱导形成愈伤组织；选择1-2周的愈伤组织转移至含添加1％α-胡萝卜素培养至愈伤组织快速增殖期，挑取新增生的愈伤组织，置于35℃和3000Lux强光下筛选3次，取存活的愈伤组织分化成苗，按单株编号种植；测定新生二叶一心嫩芽茶中的叶黄素含量，保留叶黄素含量高于0.1％的茶叶植株，进行繁育，摘取新生二叶一心的嫩芽制成绿茶，保留绿茶中叶黄素含量高于0.1％的茶叶材料继续种植，对叶黄素表达稳定的材料进行繁殖，获得高叶黄素的茶叶新材料。本发明的具有益眼功能的茶叶，有助于从源头预防老花眼、老年性黄斑变性和白内障的发生。
文档编号A01H4/00GK101263788SQ20081006138
公开日2008年9月17日 申请日期2008年4月25日 优先权日2008年4月25日
发明者吴殿星, 吴洪成, 周冠华, 周志丹, 王忠华, 舒小丽 申请人:浙江大学