专利名称：：五味子作为饲料添加剂的应用方法
技术领域：
：本发明属于农业畜牧兽医应用领域，具体涉及一种饲料添加剂技术。(二)
背景技术：
：中草药作为饲料添加剂使用，在我国已有几千年的悠久历史，如我国最早的药书《神农草木经》就有"桐叶饲猪，肥大三倍，且易养"的记载。中草药饲料添加剂依据我国中医中药理论，科学组方配伍，不仅具有扶正祛邪、健脾开胃、抗菌促生长、增强动物免疫机能、改善动物产品品质等效果，而且来源广泛、无毒副作用、无残留、无抗药性，引起了国内外学者的广泛兴趣，祖国这一宝贵遗产因而得以不断发掘。《中国词料工业19962020年发展战略》中提出"应该继续努力发掘我国中草药方面的遗产，特别是当今世界'回归'自然声浪日高的情况下，用中草药替代化学合成物、抗生素类添加剂有着广阔的前景"。因此，全面启动天然中草药添加剂的现代化研究和产业化开发，替代传统的抗生素添加剂，对于提高我国畜牧生产水平、增加畜禽产品出口份额，促进国民经济的发展，无疑具有重大的实践意义，不仅势在必行，而且迫在眉睫。目萍，关于中草药作添加剂使用尚不广泛，这方面的研究也多局限于中草药单剂或组方对动物生产性能的影响，并未深入探讨其作用机理。(三)
发明内容本发明的目的在于提供一种制备工艺简单、使用过程方便，在畜禽生产中规模使用能够代替或部分代替抗生素用以防病、治病、改善肉品质的五味子作为饲料添加剂的应用方法。本发明的是这样实现的首先将五味子置于6(TC-7(TC烘箱中烘至恒重，加工粉碎为细末，过40目筛制成五味子原粉，经提取得到黄色黏稠液态提取物，按0.1%~0.4%的比例作为饲料添加剂添加到畜禽饲料中。本发明还有这样一些技术特征1、所述的提取方法为用醇提取，即采用8倍量体积比80%的乙醇回流提取，2h次；2、所述的提取方法为用C02超临界提取，即在30MPa、45'C下用超临界C02提取设备提取2.5h;3、所述的黄色黏稠液态提取物采用高效液相色谱法测定其五味子甲素含量为0.354%，五味子乙素含量为0.664%，具体色谱条件为色谱柱C18Symmetry;流动相甲醇-水75:25;流速l.Oml/min;检测波长254nm;柱温25°C;进样量10^1;4、所述的畜禽饲料包括肉仔鸡、蛋雏鸡、产蛋鸡、热应激产蛋鸡及断奶仔猪日粮；5、所述的应用方法为将五味子置于65。C烘箱中烘至恒重，加工粉碎为细末，过40目筛制成五味子原粉，经用醇提取8倍量80%乙醇回流提取，2h次，得到黄色黏稠液态提取物，以高效液相色谱法测定其五味子甲素含量为0.354%，五味子乙素含量为0.664%，按0.1%的比例添加到肉仔鸡、蛋雏鸡、产蛋鸡、热应激产蛋鸡日粮中；6、所述的应用方法为将五味子置于65'C烘箱中烘至恒重，加工粉碎为细末，过40目筛制成五味子原粉，经用C02超临界提取，在30MPa、45'C下用超临界C02提取设备提取2.5h，得到黄色黏稠液态提取物，以高效液相色谱法测定其五味子甲素含量为0.354%，五味子乙素含量为0.664%,按0.15%的比例添加到断奶仔猪日粮中。本发明人在前人研究的基础上，拟通过对五味子有效成分提取、鉴定后，将其添加至肉仔鸡口粮中，更为系统、深入地研究五味子粗多糖和五味子素对肉仔鸡生产性能的作用、肉质的改善通过免疫接种等方式探讨五味子粗多糖和五味子素的免疫促进作用与抗病毒作用；并对其作用的分子机理进行深入的研究。此外，还对其抗热应激作用与作用的分子机理进行了深入的研究。在畜禽生产中规模使用五味子作为饲料添加剂代替或部分代替抗生素用以防病、治病、改善肉品质。由于单胃动物无法有效分解植物细胞壁，通过多种方法，将五味子原粉中的有效成分提取出来，并利用高效液相色谱技术测定其有效成分的含量。通过比较水提取法，乙醇提取法，索氏提取法，从而确定最佳提取工艺。结果表明以五味子乙素含量为考察指标，最佳提取工艺为8倍量的乙醇，回流提取2次，每次2h，所得提取物中五味-了乙素含量为,1.84%。另外还采用超临界C02萃取工艺提取五味子有效成分，经高效液相色谱测定，五味子甲素、五味子乙素含量如表l所示。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>本发明方法提取的五味子原粉对猪源大肠杆菌和霍乱沙门氏杆菌在高浓度下(lg/ml)有-定抑菌效果。随浓度降低，抑菌效果不明显或无抑菌效果(见表2)。五味子超临界C02提取物在浓度达到0.313g/ml时对猪源大肠杆菌和猪霍乱沙门氏杆菌出现抑菌效果，对猪霍乱沙门氏杆菌的体外抑菌效果优于对猪源大肠杆菌(见表3)。五味子醇提取物对鸡常见病原菌(鸡大肠杆菌、鸡白痢沙门氏杆菌、金黄色葡萄球菌)均具有抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强(见表4)。五味子超临界C02提取物对金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门氏杆菌都有较强的抑制作用(见表5)。表2不同浓度的五味子原粉对仔猪常见病原菌的抑菌直径(mm)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表3不同浓度的五味子超临界C02提取物对仔猪常见病原菌的抑菌直径(mm)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表5不同浓度的五味子超临界C02提取物对肉仔鸡常见病原菌的抑菌直径(mm)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>发明人经过一定阶段的饲养试验，通过测定五味子对肉仔鸡、蛋雏鸡、产蛋鸡、热应激产蛋鸡及断奶仔猪生产性能、养分利用、神经内分泌功能、抗氧化功能、免疫功能、血液生化指标、肠道微生态和肝脏HSP70基因表达水平后，发现五味子作为饲料添加剂具有1)提高肉仔鸡、蛋雏鸡、产蛋鸡、热应激产蛋鸡及断奶仔猪抗氧化功能(通过清除鸡体内过量的脂质过氧化物和提高鸡血清与组织中抗氧化酶的活性实现)的作用；2)增强肉仔鸡、蛋雏鸡、产蛋鸡、热应激产蛋鸡及断奶仔猪免疫功能(特异性免疫、非特异性免疫、肠道免疫);3)具有提高热应激产蛋鸡的生产性能的作用；4)提高热应激产蛋鸡肝脏HSP70基因表达的作用；5)调节常温下产蛋鸡和热应激产蛋鸡神经内分泌的作用。其中仔猪添加0.15%的五味子，肉仔鸡添加0.1%五味子，蛋鸡添加0.1%五味子效果最佳。本发明产品具有天然的抗氧化活性，作为词料添加剂应用于猪、鸡日粮中，能够有效地清除机体内过量的脂质过氧化物，提高机体内抗氧化酶的活性，改善鸡体的脂质稳定性，并能促进机体的免疫功能，改善肠道内环境，此外，还能够显著提高热应激产蛋鸡的生产性能、免疫功能的脂质稳定性。本发明的有益效果有1.来源于天然植物，无污染，无残留，对环境无不良影响。2.促生长作用作为词料添加剂应用于仔猪日粮中，可以提高断奶仔猪的日增重和日采食量，并且能降低断奶仔猪的料重比，降低断奶仔猪的腹泻率。3.抗氧化作用作为饲料添加剂应用于蛋鸡和肉仔鸡日粮中，可以提高鸡体内的抗氧化酶活性，清除鸡体内过量脂质过氧化物，改善鸡的脂质稳定性。作为伺料添加剂应用于仔猪日粮中，可以提高仔猪体内的抗氧化酶活性，清除仔猪体内过量脂质过氧化物，改善仔猪的脂质稳定性。4.免疫促进作用作为词料添加剂应用于蛋鸡和肉仔鸡日粮中，可以提高蛋鸡和肉仔鸡免疫功能。作为饲料添加剂应用于仔猪日粮中，可以提高仔猪免疫功能。5.调节肠道平衡作为饲料添加剂应用于鸡和猪日粮中，可以调节猪、鸡盲肠内环境，抑制有害菌生长，促进有益菌生长，并可断奶仔猪小肠黏膜形态。6.抗热应激作用作为饲料添加剂应用于热应激产蛋鸡日粮中，能提高产蛋鸡生产性能和免疫功能，并改善鸡体的脂质稳定性。具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明实施例l:本实施例将五味子置于65'C烘箱中烘至恒重，加工粉碎为细末，过40目筛制成五味子原粉，经用醇提取(8倍量80%乙醇回流提取，2h次)，以高效液相色谱法测定其五味子甲素含量为0.354%，五味子乙素含量为0.664%，具体色谱条件为色谱柱(C18Symmetry);流动相甲醇-水(75:25);流速l.Oml/min;检测波长254nm;柱温25。C;进样量1CM。按0.1%0.3%的比例添加到肉仔鸡、蛋雏鸡、产蛋鸡、热应激产蛋鸡及断奶仔猪日粮中。经实验证明，本实施例添加五味子醇提取物各组对血清中超氧化物歧化酶(SOD)的活性无显著影响，添加五味子醇提取物0.3。/。能显著提高6周肝脏和肾脏中超氧化物歧化酶(SOD)的活性(见表6、7)。表6五味子醇提取物对肉仔鸡血清中SOD活性的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表9五味子醇提取物对肉仔鸡组织中MDA含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>添加五味子醇提取物0.3%能显著降低能显著提高6周心脏GR活性。添加五味子醇提取物各组对血清GR活性无显著影响(见表IO)。56日龄时，添加0.2%五味子提取物可显著提高肝脏和肾脏GR活性，并且作用效果好于黄霉素组(见表ll)。表IO五味子醇提取物对肉仔鸡血清中GR活性的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>实施例2:本实施例基本过程同实施例1，不同在于采用C02超临界提取，即在30MPa、45'C下用超临界C02提取2.5h，超临界C02提取设备采用HA221-40-48SFE装置，江苏南通华安超临界萃取有限公司，最后得到黄色黏稠液态提取物，产率为12.5%。本实施例将五味子超临界<202提取物以按0.1%0.4%的比例作为饲料添加剂添加到畜禽饲料中。试验证明35日龄时，添加0.2%、0.4。/。五味子超临界C02提取物组可显著提高肉仔鸡肾脏总抗氧化能力。56円龄时，五味子超临界C02提取物可显著提高心脏总抗氧化能力(见表14)。表14五味子超临界C02提取物对肉仔鸡血清和组织中总SOD活性的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>添加五味子超临界C02提取物可显著降低35日龄肉仔鸡血清和56日龄心脏MDA含量，说明五味子提取物具有抑制MDA生成的作用(见表15)。表15五味子超临界C02提取物对肉仔鸡血清和组织中MDA含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>添加五味子超临界C02提取物可显著提高35日龄血清和肝脏GR活性，并且作用效果好于黄霉素组。56日龄时，添加0.2。/。五味子提取物可显著提高肝脏和肾脏GR活性，并且作用效果好于黄霉素组(见表16)。表16五味子超临界C02提取物对肉仔鸡血清和组织中GR活性的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>权利要求1、一种五味子作为饲料添加剂的应用方法，其特征在于首先将五味子置于60℃-70℃烘箱中烘至恒重，加工粉碎为细末，过40目筛制成五味子原粉，经提取得到黄色黏稠液态提取物，按0.1％～0.4％的比例作为饲料添加剂添加到畜禽饲料中。2、根据权利要求1所述的五味子作为饲料添加剂的应用方法，其特征在于所述的提取方法为用醇提取，即采用8倍量体积比80%的乙醇回流提取，2h次。3、根据权利要求1所述的五味子作为饲料添加剂的应用方法，其特征在于所述的提取方法为用C02超临界提取，即在30MPa、45t:下用超临界C02提取设备提取2.5h。4、根据权利要求1或2或3所述的五味子作为饲料添加剂的应用方法，其特征在于所述的黄色黏稠液态提取物采用高效液相色谱法测定其五味子甲素含量为0.354%，五味子乙素含'量为0.664%，具体色谱条件为色谱柱C18Symmetry;流动相甲醇-水75:25;流速l.Oml/min;检测波长254nm;柱温25°C;进样量1(^1。5、根据权利要求1所述的五味子作为饲料添加剂的应用方法，其特征在于所述的畜禽词料包括肉仔鸡、蛋雏鸡、产蛋鸡、热应激产蛋鸡及断奶仔猪日粮。6、根据权利要求5所述的五味子作为饲料添加剂的应用方法，其特征在于所述的应用方法为将五味子置于65'C烘箱中烘至恒重，加工粉碎为细末，过40目筛制成五味子原粉，经用醇提取8倍量80%乙醇回流提取，2h次，得到黄色黏稠液态提取物，以高效液相色谱法测定其五味子甲素含量为0.354%,五味子乙素含量为0.664%，按0.1%的比例添加到肉仔鸡、蛋雏鸡、产蛋鸡、热应激产蛋鸡日粮中。7、根据权利要求5所述的五味子作为饲料添加剂的应用方法，其特征在于所述的应用方法为将五味子置于65'C烘箱中烘至恒重，加工粉碎为细末，过40目筛制成五味子原粉，经用C02超临界提取，在30MPa、45'C下用超临界C02提取设备提取2.5h，得到黄色黏稠液态提取物，以高效液相色谱法测定其五味子甲素含量为0.354%,五味子乙素含量为0.664%，按0.15%的比例添加到断奶仔猪日粮中。全文摘要本发明提供了一种五味子作为饲料添加剂的应用方法，首先将五味子置于60℃-70℃烘箱中烘至恒重，加工粉碎为细末，过40目筛制成五味子原粉，经提取得到黄色黏稠液态提取物，按0.1％～0.4％的比例作为饲料添加剂添加到畜禽饲料中。本发明产品具有天然的抗氧化活性，作为饲料添加剂应用于猪、鸡日粮中，能够有效地清除机体内过量的脂质过氧化物，提高机体内抗氧化酶的活性，改善鸡体的脂质稳定性，并能促进机体的免疫功能，改善肠道内环境，此外，还能够显著提高热应激产蛋鸡的生产性能、免疫功能的脂质稳定性。文档编号A23K1/16GK101411394SQ200810209619公开日2009年4月22日申请日期2008年12月4日优先权日2008年12月4日发明者单安山,石莉莎,裴文芳申请人:东北农业大学