专利名称：：用檀香树种子胚离体快速育苗的方法
技术领域：
：本发明涉及植物再生的方法，具体是用檀香树种子胚离体培养快速苗育的方法。
背景技术：
：檀香树(53/^W，《3乃，L.)是檀香科常绿乔木，原产于印度、印度尼西亚及马来西亚，有很高的药用价值和经济价值。其树干心材含有丰富的挥发油，是名贵的中药材，主要有温中和胃、止痛止血的功效，心材所含的挥发油在医药工业上用途非常广泛。此外，檀香还是日用化妆品生产中的贵重原料。檀香是常绿植物，也作为亚热带地区的绿化树种，因此，大力推广檀香种植对于解决国内檀香资源紧缺具有重大意义。推广种植檀香树需要解决的是种苗的来源，目前檀香树苗主要靠种子繁殖，由于檀香种子成熟后有一定的休眠期，播种前需要半年至一年的沙藏，从播种到萌发成苗，一般需23个月，且种子发芽率低，出苗不整齐，是檀香种苗繁育的一大障碍。文献"檀香体细胞胚胎的发生及植株再生的研究"(食品与药品，200S,10(1):35-37)报道了应用现代生物技术研究开发檀香树种苗的生产，其方法是用檀香树的叶片在附加1.1pmol/LTDZ(thidiazuron,N-苯基-N'-l,2，3-噻二唑-5-脲)的MS培养基(Murashige和Skoog，1962)上诱导体细胞胚胎的发生，再将生成的体细胞胚转移到附加1.4pmol/L的赤霉素的MS培养基上培养，使之发育成苗。该方法培养的周期长，从体细胞胚诱导培养开始到无菌苗生成需要34个月的时间；生成的无菌苗没有根，所得的檀香苗成不了种苗，不能推广应用。CN101213936A公开了一种檀香的组织培养快繁种苗的方法，但它是需要用十年以上的檀香树的嫩芽进行体外培养，其方法需四个步骤一是诱导长出不定芽的培养；二是丛芽繁殖培养；三是生根培养；四是移栽。步骤繁琐，成苗时间长，成本高而且在实际应用中，成功率很低，仅处在理论研究阶段，方法上有待进一步改进。因此，寻求一种实用技术快速培养檀香树苗对于檀香种植业具有重要的实际意义。
发明内容本发明的目的是提供了一种能实际应用于批量生产的，檀香树种苗快速繁育的方法。为达到本发明的目的，所采用的技术方案是用檀香树种子胚离体快速育苗的方法，它是取檀香种胚置于人工培养基上，在25士2'C，无菌黑暗培养IO天，第11天增加光照16小时，黑暗8小时，光照强度为2000lx，培养10天，再将萌发的苗移栽至沙土，在温度26士2'C、相对湿度75±5%、光照强度为150020001x、光照12小时条件下培养30天以上即成种苗，种苗可长成1520公分高，根系发达的树苗，即可移栽至大田。所说的人工培养基为1L的MS培养基中添加26mg的赤霉素或1L的MS培养基中添加1.0~2.0mg6-苄基氨基嘌呤。为了提高种胚的发芽率和成活率，将用作离体培养的檀香树的成熟果实去除肉质的果皮，洗净后，用重量百分浓度为0.1%的HgCl2溶液浸泡815分钟，或510°/。的次氯酸钠水溶液浸泡1520分钟，或用0.51.0%高锰酸钾溶液浸泡2060分钟，浸泡后取出种子用无菌水冲洗，去除水分后备用。本发明的有益效果1.縮短了育苗时间从用种胚开始培养至长成1520公分高，可移栽大田的苗，仅需5060天；2.成苗率高，成苗率可达到87%;3.种苗发芽整齐，便于大规模生产操作；4.成本比组织培养低。下面通过实施例进一步阐述本发明的技术方案具体实施例方式实施例1檀香树种子胚离体育苗1.材料与方法l.l种子采集在10月12月间，采集树龄约为IO年的檀香树成熟(紫黑色)果实，去除外层紫黑色肉质果皮后，用清水洗净，晾干备用。人工培养基的酉己制按文献NarayanaswamiS,NorstogK.Plantembryoculture.BotRev[J]，1964,30:587-628配制MS培养基，高压灭菌(O.lMPa，121°C,15分钟)后冷却至5(TC，按，每lL的MS培养基添加4.8mg赤霉素。1.2种胚离体培养将上述檀香种子剥除红色骨质中果皮，取出种子，用重量百分浓度为10%的次氯酸钠水溶液浸泡15分钟后，用无菌水冲洗5次，吸干表面过多水分，在无菌条件下接种于人工培养基上(每瓶接种3个胚)，在25土rc，黑暗培养。每5天观察一次，记录萌发情况；第ll天转入光照培养(每天16小时光照，8小时黑暗，光照强度为2000k)，培养10天后大部分种胚都己萌发，或长成带12对叶的小苗，即可取出移栽至沙土，在26士2'C温度，相对湿度7080%，多少光照度光照12小时的条件下培养30天，檀香苗生长健壮，根系发达，苗高达1520公分，即可成为栽培生产用苗，同时统计成苗数量，计算成苗率。结果见表l。试验结果表1檀香种胚体外培养成苗情况<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>萌发率计算萌发率=萌发的胚数量/接种的胚数量X100%成苗率计算成苗率二成苗的数量/接种的胚数量X100%实施例2檀香树种子胚胎用不同激素浓度的培养基离体育苗l.材料与方法l.l种子采集同实施例l培养基的配制与实施例1相同方法配制MS培养基并灭菌后，按每1L的MS培养基添加2.0mg或6.0mg赤霉素配制，分别为试验组1、2。1.2种胚离体培养方法同实施例l。剥去皮的种子用O.1%的升汞(HgCl2)溶液浸泡10分钟。种子消毒后的处理方法同实施例1结果见表2表2檀香种胚体外培养成苗情况试验组试验批次檀香种胚总萌发数平均萌发总成苗数平均成苗率接种数量(粒)率(％)(颗)(%)(粒)1958387.48084.212998787.88585.93998989.98686.91907886.76572.222907583.37077.83908088.96875.5实施例3檀香树种子胚胎用其它激素培养基离体育苗l.材料与方法l.l种子采集同实施例l培养基的配制与实施例1相同方法配制MS培养基，按2.0mg/L的用量添加6-苄基氨基嘌呤(6-BA)后，再高压灭菌(O.lMPa，121°C，15分钟)。1.2种胚离体培养方法同实施例1。结果见表3表3檀香种胚在含6-BA的人工培养基上培养的成苗情况试验批次6-BA浓檀香种胚总萌发数平均萌发总成苗数平均成苗率度(mg/L)接种数量(粒)率a)(颗)(%)(粒)11.0995353.53131.321.5904145.52829.532.0954244.22425.2实施例4，种子用不同消毒方法的育苗试验比较材料与方法l.l种子采集同实施例l培养基的配制方法同实施例l1.2种胚离体培养方法同实施例l。剥去硬皮的种子胚的分别用下列不同的消毒剂进行消毒A次氯酸钠溶液；B升汞溶液；C高锰酸钾溶液；种胚消毒后的处理方法及培养条件同实施例l。试验结果见表4<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>权利要求1.一种用檀香树种子胚离体快速育苗的方法，其特征在于取檀香种胚置于人工培养基上，在25±2℃，无菌黑暗培养10天，第11天增加光照16小时，黑暗8小时，光照强度为2000lx，培养10天，再将萌发的苗移栽至沙土，在温度26±2℃、相对湿度75±5％、光照强度为1500～2000lx、光照12小时条件下培养30天以上即成种苗，所说的人工培养基为1L的MS培养基中添加赤霉素2～6mg或6-苄基氨基嘌呤1.0～2.0mg。2.根据权利要求1所说的用檀香树种子胚离体快速育苗的方法，其特征在于在取檀香树的种子胚之前将檀香树的种子用重量百分浓度为0.1%的HgCl2水溶液浸泡515分钟，或用重量百分浓度为515%的次氯酸钠水溶液浸泡520分钟，或用重量百分浓度为0.51.0%高锰酸钾溶液浸泡2060分钟，浸泡后取出种子用无菌水冲洗，去除水分后备用。全文摘要用檀香树种子胚离体快速育苗的方法，涉及植物再生的方法，具体是用檀香树种子胚离体培养快速育苗的方法。它是取檀香种胚置于人工培养基上，在25±2℃，无菌黑暗培养10天，第11天增加光照16小时，黑暗8小时，光照强度为2000lx，培养10天，再将萌发的苗移栽至沙土，在温度26±2℃、相对湿度75±5％、光照强度为1500～2000lx、光照12小时条件下培养30天以上即成种苗，所说的人工培养基为1L的MS培养基中添加2～6mg的赤霉素或1L的MS培养基中添加2.0mg6-苄基氨基嘌呤。本发明的有益效果缩短了育苗时间；成苗率高，成苗率可达87％；种苗发芽整齐，便于大规模生产操作；成本低。文档编号A01C1/00GK101595824SQ200910040708公开日2009年12月9日申请日期2009年7月1日优先权日2009年7月1日发明者振严,曾庆钱,莫小路,蔡岳文,亮袁,邱蔚芬申请人:广东省中药研究所