专利名称：一种生物杀菌剂可湿性粉剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种防治植物病害的生物杀菌剂可湿性粉剂。
背景技术：
目前，植物病害的防治主要以化学农药为主，而化学农药的长期使用造成对病原 菌的选择压力大，病原菌容易产生抗药性。同时化学农药的高残留、高污染对环境和人、畜 的安全造成严重的影响。因此低毒、低残留的生物农药成为发展的热点。河北农业大学于 2005年11月2日申请了 “一种生物杀菌剂”，专利申请号200510117421. 3，其组份及含量 为玫瑰黄链霉菌(Sti^ptomyces roseoflavus)的诱变菌株0116菌株发酵液93-—96% ； 苯乙基酚聚氧乙烯醚3-—5% ；醋酸钠(CH3COONa). 5-—1% ；醋酸(CH3COOH). 3-—1%。该 新菌种已委托“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”进行保藏，菌株名称玫 瑰黄链霉菌0116，保藏编号CGMCC NO. 1471。玫瑰黄链霉菌(Sti^ptomyces roseoflavus) 的诱变菌株0116菌株以下简称菌株0116，是经一株玫瑰黄链霉菌(Str印tomyces roseoflavus)诱变得到的菌株，其活菌的发酵液对多种重要的植物病原菌有抑制作用，例 如棉花黄萎病病原菌、马铃薯疮痂病病原菌、小麦根腐病病原菌、番茄灰霉病病原菌、黄瓜 白粉病病原菌等。温室及大田试验均表明，0116菌株发酵液对棉花黄萎病有较好的防治效 果。近年来，河北省农作物病虫害生防工程技术研究中心又将该菌株的发酵液应用到对小 麦白粉病、黄瓜白粉病的防治上，且均表现出良好的效果。上述专利申请存在的缺陷是首 先，微生物次生代谢产物应用为农药或者其先导化合物，需要明确该次生代谢产物的准确 结构，0116菌株发酵液中起主要作用的是菌株的次生代谢产物，而对发酵液的组分进行分 离、纯化、结构鉴定成本较大、周期较长。故还不能化学合成，不能进行规模化生产。其次， 由于发酵液的主要成分是水，因此发酵液直接应用于田间的单位用量大，造成包装和运输 成本大。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种能够进行规模化生产、应用于田 间的单位用量小，包装和运输成本较小的生物杀菌剂可湿性粉剂。本发明的目的是以如下技术方案实现的一种生物杀菌剂可湿性粉剂，其组份及 含量为菌株0116繁殖体30-—80% ；载体40-—70% ；润湿分散剂2-—10%。所述的菌株0116繁殖体为菌株0116的菌丝和孢子。所述的载体为白炭黑、高岭土、硅藻土、滑石粉、碳酸钙中的任何一种。所述润湿分散剂为木质素磺酸钙、木质素磺酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺 酸钠、十二烷基硫酸钠中的一种或几种的混合物。本发明申请具有开发周期短、成本低、工艺简单且可开发为多种剂型的特点，能够 进行规模化生产。研究工作表明，菌株0116的活体对植物病原物的抑制作用十分明显，而 且菌株对环境的抗逆能力较强，生长繁殖所需的营养条件较低。活菌制剂的开发其关键在
3于活菌的储存周期要达到1-2年，且选择不影响菌体活性和储存稳定性的载体和助剂。通 过平板测定法对各种载体和助剂进行筛选，确定了白炭黑、硅藻土、高岭土、滑石粉和碳酸 钙五种载体和木质素磺酸钠、木质素磺酸钙、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠和十二烷 基硫酸钠五种润湿分散剂与菌株0116相容性较好，而且，采用定期检测活菌数测定菌株 0116孢子粉储存稳定性，结果表明0116菌株孢子粉18°C贮存18个月活菌率>85%。由于 用菌株0116繁殖体作为可湿性粉剂的主要有效成分，故相较于菌株0116的发酵液来说大 大缩小了田间的单位用量，大大降低了包装和运输成本。为了说明本发明专利申请的实用性，现将本发明专利申请样品的检验、测定方法 及数据公开如下悬浮率的测定方法称取适量样品HI1,精确至0. OOOlgo置于盛有50mL(30士 1°C )标准硬水的200mL 烧杯中，用手摇荡作圆周运动，约每分钟120次，进行2min，将该悬浮液在同一温度的水浴 中放置13min，然后用30 士 1 °C的标准硬水将其全部洗入250mL量筒中，并稀释至刻度，盖上 塞子，颠倒混勻。再放入无振动的恒温水浴锅中，放置30min，用吸管在10 15s内将内容 物的9/10悬浮液移出，不要摇动或搅起量筒内的沉降物，确保吸管的顶端总在液面下几毫 米处。将沉降物全部洗出后冷冻干燥称重m2。总悬浮率=lO/gxKmfng/mJxlOO^。称取样品和沉降物各10mg，检测其活菌数Ii1和n2。孢子悬浮率=lO/gxEOi^-n^/ViJx100%。本发明专利申请样品的总悬浮率> 80%，孢子悬浮率> 90%。润湿时间的测定方法取标准硬水100士 lml，注入250ml烧杯中，将此烧杯置于25士 1°C的恒温水浴中， 使其液面与水浴的水平面平齐。待硬水至25士 1°C时用表面皿称取5士0. Ig试样，将全部 试样从与烧杯口齐平位置一次均勻地倾倒在该烧杯的液面上，但不要过分地扰动液面。加 样品时立即用秒表记时，直至试样全部润湿为止。记下润湿时间。如此重复五次，取其平均 值，作为该样品的润湿时间。本发明专利申请样品的湿润时间< 60s。细度的测定方法称取20g试样(精确至0. lg)，置于250mL烧杯中，加入约80mL自来水，用玻璃棒 搅动，使其完全润湿。将试验筛浸入水中，使金属丝布完全润湿。用自来水将烧杯中润湿的 试样稀释至约150mL，搅拌均勻，然后全部倒入润湿的标准筛中，用自来水洗涤烧杯，洗涤水 也倒入筛中，直至烧杯中粗颗粒完全移至筛中为止。用直径为9 IOmm的橡皮管导出的平 缓自来水流冲洗筛上试样，水流速度控制4 5L/min，橡皮管末端出水口保持与筛缘平齐 为度。在筛洗过程中，保持水流对准筛上的试样，使其充分洗涤，一直洗到通过试验筛的水 清亮透明为止。再将试验筛移至盛有自来水的盆中，上下移动洗涤筛缘始终保持在水面之 上，重复至2min内无物料过筛为止。弃去过筛物，将筛中残余物，先冲至一角再转移至已恒 重的IOOmL烧杯中。静置，待烧杯中颗粒沉降至底部后，倾去大部分水，加热，将残余物蒸发 近干，于100°C烘箱中烘至恒重，取出烧杯置于干燥器中冷却至室温，称重。本发明专利申请 样品的细度> 98%通过74 μ m筛。X(%) = Oii1-m2) XIOOAi1
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式中=Hi1-试样的质量;m2_玻璃皿(或烧杯)中残余物的质量。贮存稳定性试验采用定期涂平板测定Cfu值的方法，本发明专利申请样品在12个月内单位含孢量 均稳定在io8/g以上。在活体条件下测定了 0116活菌可湿性粉剂对黄瓜白粉病的防治效果，具体方法 和结果如下1.试验方法将制剂分别稀释至10mg/mL、5mg/mL、2. 5mg/mL、l. 25mg/mL、l. Omg/mL 后，悬液均 勻喷洒于黄瓜子叶片正面至流失，对照喷清水，每浓度设6个重复(12株苗)。等药液晾干 24h后，将黄瓜叶片上的白粉菌新鲜分生孢子用去离子水刷下，经双层纱布过滤后制成分生 孢子悬浮液(IO5分生孢子/mL)，然后用YW5. 2-A型微型喷雾器将分生孢子悬浮液均勻喷洒 于黄瓜子叶片正面至流失，接种后自然风干，置于塑料盒(87X47X27cm)中，盒中加少量 水(1cm深)，盖塑料薄膜，在16 20°C黑暗条件下保湿24h，移至温室下培养7 IOd后调 查发病。O级无病；1级每张叶片上病斑面积占整个叶片面积5%以下；3级每张叶片上病斑面积占整个叶片面积6% -10% ；5级每张叶片上病斑面积占整个叶片面积26% -50% ；7级每张叶片上病斑面积占整个叶片面积50%以上；9级每张叶片上病斑面积占整个叶片面积100%。计算病情指数，按病情指数计算相对防效。病情指数=[Σ (病叶数X相对级数)/ (调查总叶数X总级数)]X 100。防治效果(％ ) = [ (CK病情指数-PT病情指数)/CK病情指数]X 100。2.试验结果0116活菌可湿性粉剂对黄瓜白粉病有很好的防治效果，其EC5tl值为2. Omg/mL。 5. Omg/mL的防效达82%，试验结果见表1。表10116活菌可湿性粉剂对黄瓜白粉病的防效
具体实施例方式
实施例1，制备60% 0116活菌可湿性粉剂。
将液固双相发酵得到的0116菌株发酵产物于真空冷冻干燥24h，然后粉碎过200 目筛，即得0116菌株繁殖体的粉末，取该粉末6. Og,白炭黑3. Og,十二烷基硫酸钠1. Og于 勻质机中充分搅拌混勻得到60% 0116活菌可湿性粉剂。含菌量(cfu/g)彡108，活菌率(％ )彡90，干燥减量(％ )彡3. 5，悬浮率(％ ) > 80，润湿时间(s) < 60s,细度(通过74 μ m蹄)> 98%,pH值5_8，贮存稳定性18°C贮存12个月活菌率> 85%。实施例2，制备50% 0116活菌可湿性粉剂。将液固双相发酵得到的0116菌株发酵产物于真空冷冻干燥24h，然后粉碎过200 目筛，即得0116菌株繁殖体的粉末。取该粉末5. 0g，硅藻土 4. 4g，木质素磺酸钠0. 6g于勻 质机中充分搅拌混勻得到50% 0116活菌可湿性粉剂。含菌量(cfu/g)彡IO8,活菌率(％ )彡90，干燥减量(％ )彡3. 5，悬浮率(％ ) > 80，润湿时间(s) < 60s, 细度(通过74 μ m蹄)> 98%,pH值5_8，贮存稳定性18°C贮存12个月活菌率> 85%。实例3，制备45% 0116活菌可湿性粉剂。将液固双相发酵得到的0116菌株发酵产物于真空冷冻干燥24h，然后粉碎过200 目筛，即得0116菌株繁殖体的粉末。取该粉末4. 5g，硅藻土 5. 0g，木质素磺酸钠和木质素 磺酸钙的1 1混合物0.5g于勻质机中充分搅拌混勻得到45% 0116活菌可湿性粉剂。含菌量(cfu/g)彡IO8,活菌率(％ )彡90，干燥减量(％ )彡3. 5，悬浮率(％ ) > 80，润湿时间(s) < 60s, 细度(通过74 μ m蹄)> 98%,pH值5_8，贮存稳定性18°C贮存12个月活菌率> 85%。实例4，制备35% 0116活菌可湿性粉剂。将液固双相发酵得到的0116菌株发酵产物于真空冷冻干燥24h，然后粉碎过200 目筛，即得0116菌株繁殖体的粉末，取该粉末3. 5g，高岭土 5. 7g，十二烷基磺酸钠和十二烷 基苯磺酸钠1 1的混合物0.8g于勻质机中充分搅拌混勻得到35% 0116活菌可湿性粉 剂。含菌量(cfu/g)彡108，活菌率(％ )彡90，干燥减量(％ )彡3. 5，悬浮率(％ ) > 80，润湿时间(s) < 60s,细度(通过74 μ m蹄)> 98%,pH值5_8，贮存稳定性18°C贮存12个月活菌率> 85%。
权利要求
一种生物杀菌剂可湿性粉剂，其特征在于，其组份及含量为菌株0116繁殖体30 80％；载体40 70％；润湿分散剂2 10％。
2.根据权利要求1所述的一种生物杀菌剂可湿性粉剂，其特征在于，菌株0116繁殖体 为菌株0116的菌丝和孢子。
3.根据权利要求1所述的一种生物杀菌剂可湿性粉剂，其特征在于，所述的载体为白 炭黑、高岭土、硅藻土、滑石粉、碳酸钙中的任何一种。
4.根据权利要求1所述的一种生物杀菌剂可湿性粉剂，其特征在于，所述润湿分散剂 为木质素磺酸钙、木质素磺酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠中 的一种或几种的混合物。
全文摘要
本发明公开了一种生物杀菌剂可湿性粉剂，其组份及含量为菌株0116繁殖体30-80％；载体40-70％；润湿分散剂2-10％。确定了白炭黑等五种载体和木质素磺酸钠等五种润湿分散剂。而且，采用定期检测活菌数测定菌株0116孢子粉储存稳定性，结果表明0116菌株孢子粉18℃贮存18个月活菌率＞85％。本发明申请具有开发周期短、成本低、工艺简单且可开发为多种剂型的特点，能够进行规模化生产。由于用菌株0116繁殖体作为可湿性粉剂的主要有效成分，能够进行规模化生产，而相较于菌株0116的发酵液来说大大缩小了田间的单位用量，大大降低了包装和运输成本。
文档编号A01N25/14GK101919406SQ20091007468
公开日2010年12月22日 申请日期2009年6月9日 优先权日2009年6月9日
发明者刘大群, 孟庆芳, 张汀, 李亚宁, 李响, 赤国彤, 赵伟金 申请人:河北农业大学