专利名称：：Muscodorsp.属植物内生真菌ZJLQ024及其用途和杀菌剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及微生物学及杀菌剂领域，具体地说，本发明涉及一种新Muscodor属植物内生真菌和基于或源自它的挥发性混合物及其它们的用途。
背景技术：
：真齒是微生物中的一个庞大的家族，真菌与人类的关系非常密切，真菌可用以制造医药、食品、化工等工农业上重耍的产品。著名的青霉素和头孢霉素是迄今为止真茼带给医药界的最珍贵的药物之一，也是目前最重要的抗生素，被广泛应用于细菌感染疾病的治疗上，并挽救了千千万万人类的生命。植物内生真菌(endophyticfungi)是真菌的一个軍:要类群，据Dreyfuss和Chapel估计内生真菌总数达100万种。现在已:"少数几种被用于医药、农艺生产或工业应用方面，但是植物内生真菌资源还远远未被充分发掘。内生真菌具有多种多样的生态学功能，内牛真菌的牛态学功能很可能是与其多样性相关，而内牛真菌的多样性意味着其化学多样性m。内生真齒可以产生各种各样的次生代谢产物，它们在人类生活、生产中具有重耍的应用潜力，如内生真菌可以产生紫杉醇等抗肿瘤化合物；oreganicacid等新抗肿瘤活性物质；抗白色念珠菌、须癣毛癣菌和红色发癣茼等病原真菌的新化合物cryptocin、cryptocandin等；产生具有抗幽门螺杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷氏菌和鼠伤寒沙门氏菌等病原细菌的periconicins、rhizoctonicacid等。现在已发现多种不同的微生物P、〈j/'半.控制植物病害的生物活性物质，包括杀虫剂、杀菌剂及植物生K调节剂等。H前对十控制农作物生产过程中的病原微生物、建筑材料霉变微牛物及人类或动物牛存环培的病原微牛物的研究也有许多，而目.也有重要的进展，但主要还是依靠化学合成方'汰来生产杀菌剂或杀虫剂。使用化学合成药剂带来--系列的严重后果1)高残留由T化学合成药剂，包括其多种原材料具有致癌性和毒性，进入动植物体内不容易排除，环境降解能力差，造成农药残留量高；2)破坏生态平衡生物长期进化与适应，fi然界中各种生物相对数量达到动态平衡，使用化学药剂造成有苦生物的天敌数量大大减少；3)抗药性的产生fi然界屮的病原菌及昆虫类的某因P、-丫]很强的突变能力，不合理用药、肓目用药促使抗药性的迅速产生。由于上述种种的缺点，化学合成药剂的使用也越来越受限制，开发新的、作用机理独特且对人畜和生态环境无害的牛物制剂越来越被重视，也成为现代农药行业发展的重要方向。许多种真菌能产生一些低浓度挥发性气体，而且有些挥发性气体还具有抗菌、杀虫或杀病毒的功能，如Dennis&Webster等发现木霉(Trichoderma)产生的挥发性气体物质能抑制立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporam)、终极腐霉(Pythiumultimum)等的生长。Strobel等从热带木本植物分离到能产生挥发性混合物质(volatilecompounds,VOCs)的四种Muscodor属内生真菌，它们分别为樟属植物锡兰肉桂(Cmnamomumzeylanicum)内生真菌Muscodoral'bus、蕨卩十银桦(Grevilleapteridifolia)内生真菌Muscodorroseus、热带木质藤本植物(Paulliniapaullinioides)内生真菌Muscodorvitigentis、凤梨属植物Ananasananassoides内生真菌Muscodorcrispans。Muscodoralbus、Muscodorroseus、Muscodorvitigentis禾UMuscodorcrispans产生的VOCs刈'真-菌、细菌及病祐等具有抑杀作用，在防治或杀灭农作物生产过程中的病原微生物、建筑材料霉变微牛物及人类或动物牛存环境中的病原微牛物具有重要的应用价值，他们并H.也进行了相关的商业化开发。利用真菌产生的VOCs的应用研究目前还不多见，S加bel等关TMuscodor属相关内生真菌的研究成果及开发应用，证明Muscodor属真茼产生的VOCs是寻找新型化合物、新型药物或新型药物中间体的重要途径，也是开发新型生物制剂的重要资源。利用真菌产生的VOCs来控制农作物生产过程屮的病原微生物、建筑材料霉变微生物及人类或动物生存环境的病原微生物，3仃对非靶标生物无毒害，不污染环境，不破环生态平衡，不会诱导有害微生物、ftiVR昆虫等产生抗药性的优点。
发明内容本发明耍解决的技术问题是提供-f巾VOCs产生快、能持久抑制多种植物病原真茼、细菌及酵母的新颖Muscodor属真茼菌株及其产生的挥发性化和物的组合。为了解决上述技术问题，本发明提供-一种植物内生真菌，该植物内生真菌Muscodorsp.菌株保藏名称为ZJLQ()24，保藏单位屮国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2009年1月8日，保藏地址北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所，保藏号CGMCC2863。本发明还同时提供了利用上述植物内牛真菌制成的活休制剂，其是包括Muscodor属真菌ZJLQ()24的培养活菌、透气吸湿性固体载体、稳定剂、微^几索、碳氮营养源及生长素等组成的稳定性活体制剂。i:述活体制剂可采用以——F方法制成将内生真茼Muscodorsp.ZJLQ024的活化培养，接入种子培养液，用搅拌机将菌丝体搅碎后，添加种子if;《液使菌体恢复生长，接入固体培养基，真空冷冻千燥后包装。本发明还同时提供了上述植物内生真菌或其活体制剂的用途，其特征是用于抑制或杀灭病原微生物或霉变微生物。作为本发明的植物内牛真菌或活休制剂的用途的改进病原微牛物为农作物牛产过程中的病原微生物、或人类或动物生存环境中的病原微生物；所述霉变微生物为建筑材料霉变微生物。木发明还同时提供了一种杀菌剂，该杀菌剂包含0.65%1.0.2%2-甲基-丙酸甲酯、28%78%2-甲基丙酸、0,6%2.5%1-乙烯基-1-甲基-2.4-二(1-甲基乙烯某)—环己烷、().l()%0.4%石竹烯、0.06%1%2，6-二甲某-6-(4-甲基-3-戊烯)二环[3丄1]庚-2-烯、0.8%3.5%1，2,3，4，5，6,7，8-八氢化-1，4-二甲基-7-(1-甲基亚乙基)奠、5.8%11%1，2，3，'1，'la，5，6,8a-八氢化-'la，8-二甲基-2-(丄-甲基乙基)萘、0.05%0.2%的3，3，7，i丄-四甲基三环[6.3.0.0(2，4)]-f--一碳-8-烯、(),3%2.8%a-水丼烯、4%45%f3-水丼烯、(),1%().6%反式1-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、0.08%0.4%顺式1-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、0.25%4%反式3-甲基-6-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、0.03%0.28%顺式3-甲某-6-(1-甲棊乙基)-2-环己烯-1-醇;其余为溶剂;以上百分比均为体积百分比。作为本发明的杀菌剂的改进该杀菌剂包含0.68%0.72%2-甲基-丙酸甲酯、28%28.5%2-甲基丙酸、2%2.5%丄-乙烦基-丄-甲基-2.4-一(丄-甲基乙烯基)-环己垸、().1()%().14%石竹烯、().12%().腦2，6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯)二环[3丄1]庚-2-烯、2%2.5%1，2,3，4，5，6,7，8-八氢化-1，4-二甲基-7-(1-甲基亚乙基)奧、1().26%1.0.76%1，2，3，4，4a，5，6，8a-八氢化-4a，8-二甲基-2-(1-甲基乙基)萘、0,14%0.18%的3，3，7，11-四甲基三环[6.3,0,0(2，4)]卜一碳-8-烯、2.38%2.8%a-水芹烯、43.5%45%P-水芹烯、0.5%0.54%反式1-甲基-4-(卜甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、0.34%0.38%顺式1-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、3.85%4%反式3-甲基-6-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、0.22%0.26%顺式3-甲基-6-(丄-甲基乙基)-2-环己烯-丄-醇；其余为溶剂。溶剂为常规溶剂，例如为丙酮、环乙烷、甲醇等。它可抑制或杀死农作物生产过程中的病原微生物、建筑材料霉变微生物及人类或动物生存环境中的病原微生物。内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024产生的VDCs是有效的杀菌剂，对立枯丝核菌、终极腐霉、尖孢镰刀菌、细链格孢(Altemariaaltemata)、曲霉(Aspergillussp)、灰葡萄孢(Botrytiscnerea)、蚕旦葡萄孢(Botrytisfabae)、圆形刺盘孢(Colletotrichumorbiculare)、泻根亚隔孢壳(Didymellabryoniae)、褐孢霉(Fulviafulva)、淡紫拟青霉(:Paecilomyceslilaciinus)、指状青霉(Pen化iillumdigitatum)、柿盘多毛孢(Pestalotiadiospyri)、稻梨孢菌(Pyriculariaoryzae)、齐整小核菌(Sclerotiumrolfsii)、核盘齒(Sclerotiniasclerotioram)、大,辛仑枝菌(Verticilliumdahliae)、酉良酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、大肠杆茼(Escherichiacoil)和叶杆茼(Phyllobacteriumsp.)等多种病原丝状真菌、酵母菌及革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都具有抑制或杀火作用。内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024.具有产生VOCs速度快，持效性长的特点，能降解终极腐霉和稻梨孢菌的细胞壁，并且此VOCsP、0独的使人愉悦的香味。内生真菌Muscodorsp.菌株Z.JLQ()2'1能利Ilj大麦^、细米糠、小米粉和蔗糖等为碳源，能利用蛋白胨、酵母粉、酵母膏、麸皮、豆饼粉和玉米浆干粉等为氮源，能在谷物或麦类、马铃薯葡萄糖琼脂、燕麦葡萄糖琼脂或麦芽汁葡萄糖琼脂上生长，并产生具有抑菌活性的VOCs。内生真茼Muscodorsp.茼株ZJLQ024不能以葡萄糖、果糖、麦芽糖、可溶性淀粉、糊精、乙酸钠、丙酸钠、酒石酸铵、柠檬酸钠、内fl词酸钠和丙三醇中的任何--种为唯一碳源，不能以尿素、硝酸钠、硝酸铵、硫酸铵屮的任何一种为唯一氮源。内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024核糖体脱氧核糖核酸内转录间隔区(IntemaltranscribedspacerofribosomalDNA，ITSrDNA)、核糖体脱氧核糖核酸大亚基(28Sr:DNA)、核糖核酸聚合酶II亚基(RNApolymeraseIIsub皿it，RPB2)、P-微管蛋白(beta-tubulin)基因具有独特的序列。内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024的活性载体制剂具有商业开发用途，ZJLQ()24培养物及其产生的VOCs可以用于处理或防止建筑材料和建筑物巾有毒霉茼，可以用于水果和食品的保鲜防霉，可以用于防止或杀灭粮食和饲料屮的有害霉菌，可以用于农业生产中土壤的处理、花卉或果疏病害的防治。本发明的VOCs能从生L(在谷物或麦类、马铃薯葡萄糖琼脂、燕麦葡萄糖琼脂或麦芽汁葡萄糖琼脂上的新颖内牛真菌M:uscodorsp.菌株ZJLQ024培养物上分离得到。该VOCs可作为薰蒸剂用作农作物生产过程中的病原微生物、建筑材料霉变微生物及人类或动物生存环境中的病原微生物的抑制或杀灭，具有从中开发出新型、高效、无毒的天然杀菌剂的巨大潜力。本发明的Muscodoi邻.ZJ:LQ024活体制剂或内生真菌:M:uscodorspZJLQOM培养过程屮产生的VOCs及包含一种或多种水芹烯或2-环己烯-1-醇衍生物的合成杀菌剂的用途。它们适用于工业、农业、养殖业和服务行业等。例如它们可以处理或防止建筑材料和建筑物中有毒霉菌；nj以用f水果和食品的保鲜防霉；nj以用f防止或杀灭粮食和饲料中的有害霉菌；可以用于农业牛产中土壤的处理、花卉或果疏病害的防治。——F面结合附图对木发明的具体实施方式作进一步洋细说明。图1是Muscodorsp.ZJLQ024菌落图；图2是Muscodorsp.ZJLQ024菌丝扫描电镜图；图3菌株ZJLQ024核糖体rDNA内转录间隔区(InternalTranscribedSpacer,ITSrDNA)构建的进化树；图4菌株ZJLQ024核糖休大亚基(28Sr:DNA)构建的进化树；图5菌株ZJLQ()24RNA聚合酶II(RNApolymeraseIIsubunit，RPB2)构建的进化树；图6茼株ZJLQ()24beta-tubulingene构建的进化树；图7是Muscodorsp.ZJLQ024产生的挥发性气体(VOCs)对植物病原真菌的影响(扫描电镜图片)A:终极腐霉PytWumultimum，B:稻梨孢菌Pyriculariaoryzae，C:Muscodorsp.ZJLQ02'l禾口Pyriculariaoryzae，D:Muscodorsp.ZJLQ()2'l禾PPythiumultimum，[OO35]图8是Muscodor.sp菌株ZJLQOM活性载休制剂和M:uscodor.sp菌株ZJLQOM大麦粒培养物对植物病原菌抑制率对照；A、曲霉Aspergillus.S:P;:B、尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporam);C、灰葡萄孢Botrytiscinerea;D、终极腐霉(Pythiumultimum);a、曲霉Aspergillus.SP;b、尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporam);c、灰葡萄孢Botrytiscinerea;d、终极腐霉(Pythiumultimum);注其中大写A、B、C、D为病原菌与Muscodorsp,菌株ZJLQ024大麦粒培养物对峙培养结果；小写a、b、c、d为病原菌与Muscodorsp.菌株ZJLQ024活性载体制剂对峙培养结果；图9是Muscodorsp菌株ZJLQ()24挥发性混合物VOCs防治采收后水果腐烂试验对比图；A、Muscodorsp茼株ZJLQ024培养物；B、空白对照。具体实施例方式实施例l、内生真菌菌株的分离纯化(i)植物组织标本的采集从中国浙江凤阳山国家自然保护区(凤阳山自然保护区位于浙江省西南部龙泉市境内，地理位置为U『()6'119°15'E,27°46'27°58'N,1候为典型的中亚热带海洋性季风气候)，在海拔12001500m采集植物标木，其中包括中华猕猴桃(Chinesegoosebeery)和喜树(Camptothecaacuminata)，采集部位包括根、茎、叶和果实，釆集后保存于保鲜袋，在4t条件下保存时间不超过48h。(2)内生真菌的分离培养将步骤(1.)的植物标本组织j-tjfi来水冲洗表面的灰S及附着物，凉干表面水份，经75%无水乙醇和0.5%次氯酸钠表面消毒。根、茎、叶和果实根据表皮组织用75%无水乙醇消毒的时间控制在3(卜6()s，().5%次氯酸钠消力时间为2-丄0min。表面消毒后用无菌水冲洗三次，无菌滤纸吸干表面水份后用无菌卩术刀切成3X3mm大小的组织片，置于马铃:薯葡萄糖琼脂(potatodextroseagar,PDA)培养基上(含氨卞青霉素100ugZml和硫酸链霉素60ugZml)，90mm的培养皿中约接12块组织片。25E生化培养筘巾培养，直至植物组织周闱长出菌丝体，挑取菌丝尖端置于新鲜的PDA培养基上，培养纯化后保存于PDA斜面培养基和液体冷冻培养基中，PDA斜面培养基培养物加液体石蜡常温保存，液体冷冻培养基屮培养物保存于-80。C超低温冷柜。将表面消毒处理过的材料不做剪切直接植于PDA平板上作为对照检查表面消毒是否彻底，确保分离得到的真菌是植株的内生真菌ffl]非表面附生菌。本发明人将采集的标本置f保温冰盒中带回实验室进行分离，共分离得到i58株内牛真菌菌株。实施例2、产挥发性混合物VOCs的内生真菌筛选采用有格培养皿对峙培养法，将融化好的:PDA培养基倒入有格塑料培养皿(90mm)巾，直径5mm的不锈钢打孔器切取内生真茼茼饼，接入培养皿一侧，25。C培养2d-5d后，在:P:DA平板另一侧接入病原指示菌，同时以只接病原指示菌为对照，用pamfilm封n膜膜封n，待对照指示菌长满培养皿一侧后，观察内生真菌对指示病原菌菌落的生长及抑菌情况，测量指示菌菌落直径，筛选出能产生挥发性混合物VOCs并且能抑制植物病原菌生L(的内生真菌。对分离纯化后的i58株内牛真菌菌株进行了牛物活性筛选，分别以灰葡萄孢、立枯丝核菌、终极腐霉为指示菌，其中Muscodorsp,属的5个齒株ZJLQ()23、ZJLQ()24、ZJ:LQ070、ZJLQ151、ZJLQ374产生具有抗菌活性的VOCs，对三种指示菌灰葡萄孢、立枯丝核菌、终极腐霉都具有很强的抑制活性，特别是ZJLQ()23、ZJLQ024、ZJLQ070三个菌株产生的挥发性混合物VOCs能完全杀死灰葡萄孢、立枯丝核菌、终极腐霉。Muscodorsp.菌株ZJLQ024保藏在屮国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物屮心，保藏日期2009年1月8日，保藏号CGMCC2863。实施例3、Muscodorsp.菌株ZJLQ024抑菌活性谱的测试将内牛真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024及Muscodoral'bus(如^利200480025237.X所告知)在PDA培养基....匕生长活化l()-15d备用(培养温度为25"C)。分别将灰葡萄孢、立枯丝核菌、细链格孢、齐整小菌核、终极腐霉、尖孢镰刀菌黄瓜专化型、圆形剌盘孢、大丽轮枝菌、核盘菌、柿盘多毛孢、稻梨孢茼、指状青霉、蚕豆葡萄孢、褐孢霉、泻根亚隔孢壳、曲霉、淡紫拟青霉在PDA培养基....匕活化，转接入PDA新鲜培养棊上，在25t:下生长3-7d后使用；酿酒酵母在YEPD同体培养基上划线，挑单菌落，接种fYEPD液培养液中摇菌(200r/min，30°C)，'18h后使用；大肠朴菌、叶朴菌先在LB固休培养基上划线，挑单菌落接种于L:B液休培养液中，37i:培养24h备用。将融化好的PDA培养基倒入有格塑料培养皿(9()mm)中，用直径为5mm的不锈钢打孔器切取内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024菌饼，用接种针接入培养皿.'侧，在25"C条件下分别培养3d、5d、7d后，在PDA平板另一侧接入病原指示茼，同时以只接病原指示菌为对照，parafilm封口膜封口，培养-一定时间后观察菌落的生长及抑菌情况。(其屮酿酒酵母、大肠杆菌、叶杆菌采用划线法接种，其余真菌均采用菌饼接种法)，以Muscodoralbus菌株为阳性对照，测试结果见表1。表1Muscodorsp.菌株ZJLQ024和Muscodoralbus对指不菌的抑菌活性<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注表内数据为指示菌的存活率。Muscodorsp,菌株ZjLQ024与Muscodoralbus之间相互不抑制对方的生长，Muscodorsp.菌株ZJLQ()2'1也不会影响木霉Trichodermasp.的生K。Muscodorsp.菌株ZJ:LQ024对对尖孢镰刀菌和淡紫拟青霉的抑制性相对较弱，Muscodoralbus对尖孢镰刀菌和淡紫拟青霉及指状青霉的抑制性都不强，而Muscodorsp.齒株ZJLQ()24能完全抑制指状青霉的生长，对尖孢镰刀菌和淡紫拟音霉的抑制性也比Muscodoralbus耍强。Muscodorsp.菌株ZJLQ024和Muscodoralbus对其它所选的指示菌都具有很强的抑制/杀火作用。Muscodorsp.菌株ZJLQ024-产生的VOCs能分解终极腐霉和稻梨孢菌的菌丝细胞壁，从而导致终极腐霉和稻梨孢菌菌体崩溃致死，但是Muscodoralbus只能抑制病原菌生K,rfn不能降解终极腐霉和稻梨孢菌菌丝体。用真空冷冻扫描电了显微镜(sca皿ingelectronmicroscopy,SEM)拍摄Muscodorsp.菌株ZILQ024产牛的VOCs对终极腐霉和稻梨孢菌的细胞壁分解情况。显微镜为HITACHIS-3()()()N,冷冻系统为ALT021()()。将准备好的材料切割成0.8cmX0.8cm左右的大小(培养基尽量簿)，用专用胶水粘贴在样品台匕置于液氮巾进行冷冻固定，温度为-1.89°C;之后移入真空状态的ALTO21()0系统巾进行升温升华，控制温度在-96°C，时间5min;升华完毕后开始降温到-140°C以下时，电喷雾镀金2min;之后将样品缓慢送入固定平台上，调整位置后打开HITACHIS-3000N显微系统的操作软件进行观察(图7)。Muscodorsp.菌株ZJLQ024和Muscodoralbus培养不同时间的培养物对病原菌的抑制作用比较，结果表明Muscodorsp.菌株ZJLQ024培养3d时间后接种病原指示菌，其抑制效果明显比Muscodoralbus强，培养5d和7d后它们之间没有明显区别，说明ZJLQ024产活性VOCs快，可以更快的抑制病原菌的生长，并且具有持效久的特点。实施例4、内生真茼ZJLQ024形态学及生理生化鉴定菌株ZJLQ024通过形态学、分子系统学及产生的VOCs组分等手段进行鉴定。参照文献[1-2]方法，采用PDA、麦芽汁琼脂(maltextractagar，MEA)和促孢培养基进行插片培养，诱导菌株Z儿Q024产孢，但经多种促孢诱导方式(光照及化学试剂)都没有产生分生孢了和产孢结构。对内生真菌ZJLQ024的菌落形态、颜色、生K速率及显微形态特征进行观察，在:P:DA、M:EA和促孢培养基(KH2:P04ig，KN03丄g，MgS04*7H2()().5g，KCl().5g，可溶性淀粉().2g，葡萄糖().2g，蔗糖(),2g，琼脂15g,水1000mL,自然pH值)上均不分泌色素，菌落致密呈白色(见图1),没有分生孢子或产孢结构形成。利用真空冷冻扫描电子显微镜对茼株ZJLQ024的茼丝形态进行观察，菌丝呈绳索状缠绕(如图2所示)。[OO59][参考文献][l]魏景超，真菌鉴定手册.上海科学技术出版社，1979[2]HawksworthDL，KirkPM，SuttonBC，etal.l995.Ainsworth&Bisby，sDictionaryoftheFungi.8thedn.CambridgeUniversiityPress,London.真菌舌争典(第八片反)，伦敦剑桥出版社在基础培养基(硝酸铵2g、磷酸二氢钾1g、氯化钾0.5g、硫酸镁0.5g、硫酸亚铁0.()lg、葡萄糖3()g、琼脂2()g)匕加入葡萄糖、果糖、麦芽糖、可溶性淀粉、糊精、乙酸钠、丙酸钠、酒石酸铵、柠檬酸钠、丙酮酸钠和丙三醇中的其中任何一种为唯--碳源时，Muscodorsp.菌株ZJLQ024-均不能iP:常生长，加入尿素、硝酸钠、硝酸铵、硫酸铵中的其中任何-一种为唯一氮源时，Muscodorsp.菌株Z儿Q024也均不能正常生长。但是以大麦粉、细米糠、小米粉和蔗糖为碳源，以蛋白胨、酵母粉、酵母膏、麸皮、豆饼粉和玉米浆干粉为氮源时，MuscodOTsp.菌株ZJ:LQ024均能良好牛长(碳氮源利用及牛长情况见表2)。表2Muscodorsp.菌株Z几Q024碳氮源利用情况Afuscoctorsp.ZJLQ024Muscodora/Jbus葡萄糖-373菌落稀琉蔗糖190菌落稀疏29.3苗落稀琉果糖-28.0菌落稀琉麦芽糖-菌落稀疏42.0菌落稀琉可溶件淀粉-菌落稀疏46.0菌落稀疏人主粉247菌落致密，菌丝体CJ色，48.3菌落致密，苗丝体白色,气气生菌丝十:富生菌丝丰富小米粉27.0菌落致密，菌丝体白色，48.3菌落致密，菌丝体白色，气气生菌丝丰富生菌丝丰富细米糖19.0菌落致密，菌丝体白色，40.7菌落致密，菌丝休白色,气1生菌丝t-富生菌丝丰富甘油-菌落稀疏32.7菌落稀疏乙酸钠-7.0丙酸钠丙頃酸钠8.0140菌落稀疏酒石酸铵-38.0茵落稀琉杆據酸钠8.0菌落稀疏-菌落稀疏糊枏-37.7菌落稀疏蛋lli胨16.3菌落致密，菌丝体白色，42.3茵落致密，菌丝体白色，气1生菌丝中-宫生菌丝丰富酵母粉21.0菌落致密，菌丝体白色，45.3茵落致密，菌丝体白色，气气生菌丝卞富生菌丝丰富酵母裔21.3菌落致密，菌丝体白色，45.7菌落致密，菌丝体白色，气1生菌丝丰宫生菌丝丰富豆饼粉24,7菌落稀疏，无气生菌丝47.0菌落稀疏，无气生苗丝玉米浆粉273菌落致密，菌丝体白色，45.7菌落致密，苗丝体白色，气气生菌丝丰富生菌丝丰富麸皮34.7菌落致密，菌丝体白色，46.0菌落致密，菌丝体白色，气气生菌丝丰宫生菌丝丰富尿素-6,0菌落稀疏销酸纳11.0菌落稀疏35.3菌落稀疏銷酸铁-40.0菌落稀疏硫酸铵-32.0注:表中"-"表示菌株不能牛长内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ()24最适生长温度测试，在PDA培养基上将冻存管中的内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024进行活化，活化后用无菌不锈钢打孔器切取直径5mm的菌饼，分别转接于PDA和MEA培养基l:，移入1.0、1.5、20、25、28、30、35和40"C条件下的生化培养箱中，15d后测量菌落生长直径。内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ()24在高于3(rC时不能生长，最佳的生长温度为25t:，在MEA培养棊上，25。C培养15d的菌落直径为23-28mm,在PDA培养基上，25。C培养15d的菌落直径为26-35mm，测试时以菌株Muscodoralbus为对照，测试结果如表3所述。表3内牛真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024最佳牛长温度测试(单位mm)菌株温度("C)1015202528303540PDA1012222615NNNZJLQ024MEA818222515NNNMuscoc/orPDA141445534814NNalbusMEA131334403812NN注N代表不能生长。内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024耐高温测试在PDA培养基....匕将冻存管屮11的内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024进行活化，活化后ltj无菌不锈钢打孔器切取.宵径5mm的菌饼，分别转接于PDA和MEA培养基上，移入30、35和40t:条件下的生化培养箱中分别处理24h、48h、72h和12()h,处理后将培养皿取出置f25°C的生化培养箱中丄0d，之后再观察菌落牛长情况并日.测量菌落牛长直径，测试时以菌株MuscodOTalbus为对照。内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ()24在3()°C条件—F虽然不能止常生长，但处理12()小时后W转移到25"C条件下还是能正常生长，Muscodorsp.菌株ZJLQ024不能耐35°C以i:的高温，测试结果如表4所述。表4内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024耐高温测试(单位mm)温度(1C)茵株^24h48h72h120h24h48h72h120h24h48h72h120hZJLQ02419191919NNNNNNNNMuscodora/bus42444343363328N3422NN注N代表不能生长。实施例5、Muscodorsp.内生真菌ZJLQ024分子系统学分析Muscodorsp.内生真菌ZJLQ024分子系统学特性主要分析了其ITSrDNA、28SrDNA、RPB2和beta-tubulin基因，并进行系统发育分析。首先是Muscodorsp.内生真菌ZJLQ024的总DNA提取ZJLQ024菌株接种于PDA培养基上，25t:培养3-5d，再移接至PDB液体培养基中，25°C、150rpmZmm培养4d。用滤纸滤取菌丝，吸水纸吸T水份后在液氮中研成粉末，按每管约l()()mg的量分装于丄.5m:L离心管中。采用DNeasyPlantMiniKits(QIAGEN)，按厂商的程序提取基因组DNA。在l()()mg菌体粉末中加入4()()u1裂解缓冲液API和4P1l()()mg/mlRNaseA贮存液，剧烈振荡混匀60s，65。C保温10min裂解细胞，隔3min振荡混匀1次；裂解液巾加130P1缓冲液AP2，混匀，冰浴5min后14()00r|3m/min离心5min;取k清液至QIAs'hredder离心柱，14000rpm/min离心2min;将滤过液移至1.5mle卯endorf管，力n1.5倍沉淀缓冲液AP3/E，用枪头吸打混匀；取65()pl反应液至DNeasy微型柱，11()00rpm/min离心lmin，弃去收集管中的滤液；将余下的反应液移至DNeasy微型柱，11000rpm/min离心lmin，弃去收集管和滤液；将DNeasy微型柱置f另一收集管，加500p1缓冲液AW至DNeasy微型柱，ii000rpm/min离心imim弃去收集管中的滤液；将DNeasy微型柱重新置于收集管中，加5()()p1缓冲液AW至DNeasy微型柱，14()()()rpm/min离心2min，弃去收集管和滤液；将DNeasy微型柱置丁'另.1.5mleppendorf管上，加100ul预热(65°C)的缓冲液AE至DNeasy膜l:，室温静止5min，110()0rpm/min离心1min，收集滤液即为基因组DNA。-20E保存备用。取5ul样品在1,4%Agarose胶上电泳，检测DNA的分子大小，同时取lul稀释5()倍，测定OD260/OD280，检测DNA含量及质量。ITSrDNA的扩增采用通用引物ITS1(5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3')和ITS4-(5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'),PCR体系DNA模板(lOOng/liL)1.0liL，10XPCR缓冲液(含25mmolZLMg(:l2)5.0uL，dNTPs(5mmo'l/L)1,0uL，引物(50pg/mL)各0.5pL，TaqDNA聚合酶(2U/'PL)1PL，加水补足50PL,混匀后在MJResearch公司的:M:inicyclerPTC-丄50型PCR仪上进行PCR反应，PCR反应条件94°C3min;94°C4()s，55°C5()s,72°C60s，30个循环;72°Cl()min。PCR扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳，PCR扩增产物用QIAGEN公司的Q1AquickPCR纯化试剂盒纯化在PCR反应产物巾加5倍体积的PB缓冲液，涡旋混匀；将k述混合液转至QIAquick微型柱中，离心柱置于2mL收集管上，13000rpm离心30-60s;弃去收集管中的滤液，将微型柱至新放M收集管屮；加(X75mLPE缓冲液至微型柱屮，1.300()rpm离心30-60s;弃去收集管中的滤液，将微型柱重新放冋收集管中，14000rpm离心lmin;将微型柱置于1.5mL离心管上，加3()PLEB缓冲液或水，静止lmin后13()00rpm离心lmin，收集滤液即为纯化的:PCR产物。纯化后的PCR产物-20T保存各用。取2"L滤液在琼脂糖凝胶上电泳，估算浓度。28SrDNA基因的扩增采用通用弓|物LROR(5'-ACCCGCTGAACTTAAGC-3')和LR5(5'-ATCCTGAGGGAAACTTC-3')，PCR体系DNA模板(1()0ng/U:L)5.0u:L，10X:PCR缓冲液(含25mmol/L:MgCl2)5.0u:L，dNTPs(5mmol/L)1,0uL，引物(50pg/mL)各0.5pL，TaqDNA聚合酶(2U/UL)1PL，加水补足50uL，混匀后在MJResearch公司的MirdcyclerPTC-150型PCR仪上进行PCR反应，PCR反应条件9'rC3min;94°C3()s，52°C50s,72°C60s，35个循环;72°Cl()min。PCR扩增产物经丄.O%琼脂糖凝胶电泳，PCR扩增产物用QIAGEN公司的Q1AquickPCR纯化试剂盒纯化在PCR反应产物中加5倍体积的PB缓冲液，涡旋混匀；将上述混合液转至QIAquick微型柱中，离心柱置丁'2m:L收集管上，13000rpm离心30-60s;弃去收集管中的滤液，将微型柱重新放回收集管中；加0J5mLPE缓冲液至微型柱中，1300()rpm离心30-60s;弃去收集管中的滤液，将微型柱重新放回收集管中，14000rpm离心lmin;将微型柱置于1.5mL离心管上，加30pLEB缓冲液或水，静止lmin后1.300()rpm离心l.min，收集滤液即为纯化的PCR产物。纯化后的PCR产物-2(TC保存备用。取2uL滤液在琼脂糖凝胶--匕电泳，估算浓度。R:P:B2基因的扩增采用通用弓I物frpb2-5f(5'-GAYGAYMGWGATCAYTTYGG—3■')禾Pfipb2—7cr(5■'—CCCATRGCTTGYTTRCCCAT—3')，PCR体系DNA模板(100ng/u:L)5.0u:L，10X:PCR缓冲液(含25mmol,.,LM:gCl2)5.0u:L，dNTPs(5mmolZL)1.0PL，弓I物(50ug/mL)各0.5uL，TaqDNA聚合酶(2U/UL)1uL，加水补足50u:L，混匀后在MJResearch公司的MMcyclerPTC-150型:PCR仪上进行PCR反应，PC:R反应条件:94°C3min;94°C30s.，53°C5()s，72°C90s,35个循环;72°Cl()min。PCR扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳，PCR扩增产物用QIAGEN公司的QIAquickPCR纯化试剂盒纯化在PCR反应产物中加5倍体积的PB缓冲液，涡旋混匀；将....匕述混合液转至QIAquick微型柱中，离心柱置于2mL收集管上，i3000rpm离心30-60s;弃去收集管中的滤液，将微型柱重新放回收集管中；加().75mLPE缓冲液至微型柱中，13()()()rpm离心30-60s;弃去收集管中的滤液，将微型柱重新放回收集管中，14000rpm离心lmin;将微型柱置于1.5mL离心管匕加30PLEB缓冲液或水，静止lmin后1.3()()()rpm离心13lmin,收集滤液即为纯化的PCR产物。纯化后的PCR产物-20。C保存备用。取2uL滤液在琼脂糖凝胶上电泳，估算浓度。beta-tubulin基因的扩增采用通用引物BT丄(5■'—AACATGCGTGAGATTGTAAGT—3')禾卩BT22(5■'—TCTGGATGTTGTTGGGAATCC-3')，PCR体系:DNA模板(1()()ng/uL)5.0uL,1()XPCR缓冲液(含25腿ol/'LMgCl2)5.0uL，dNT:Ps(5mmol/L)1.0u:L，引物(50ug/mL)各0.5uL，TaqDNA聚合酶(2U/pL)1uL，加水补足50pL，混匀后在MJResearch公司的MinicyclerPTC-150型:PCR仪上进行:PCR反应，PCR反应条件94。C3min;94°C30s，53°C50s,72°C90s，35个循环；72°Cl()min。PCR扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳，PCR扩增产物j-ljQIAGEN公司的QIAquickPCR纯化试剂盒纯化在PCR反应产物中加5倍体积的PB缓冲液，涡旋混匀；将上述混合液转至QIAquick微型柱中，离心柱置f2mL收集管....匕，130(K)rpm离心30-60s;弃去收集管中的滤液，将微型柱重新放回收集管中；加0.75mLPE缓冲液至微型柱中，13()()()rpm离心3()-60s;弃去收集管中的滤液，将微型柱重新放回收集管中，14000ipm离心lmin;将微型柱置丁'1.5m:L离心管上，加30uLE:B缓冲液或水，静止lmin后13()00rpm离心1min，收集滤液即为纯化的PCR产物。纯化后的PCR产物-20。C保存备用。取2u:L滤液在琼脂糖凝胶上电泳，估算浓度。纯化后的PCR产物进行连接反应，连接体系(l.()PL)如下2XT4连接酶缓冲液5uL，PCR纯化产物2uL，PGEM-T载体1iiL，T4连接酶1uL，ddH201liL。混匀样品，4"C连接过夜。将l()PL连接混合液转化感受态细胞，感受态细胞的转化程序如下从-8crc超低温冰箱中取ioou:l感受态细胞悬液，放置冰上解冻；加入dna连接液1()PL，轻轻摇匀，冰....匕放置3()min;42。C水浴中热击90s，热击后迅速置于冰上冷却3-5min;向离心管中加入0.8m:LLB液体培养基(不含Amp)，混匀后37"C、80rpm振荡培养lh，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基冈；将i:述菌液5000rpm离心30s，倒掉部分培养基，保留约300uL，摇匀后取100u:L涂布于含100ug/pLAmp的蓝白斑筛选平板上(在含适当抗生素的预制9()mm琼脂平板屮央滴加40uL3%X-gal和7uL20XIPTG.，用-一个无菌的涂布器涂匀，37。C温浴直至全部液体吸收)，正面向....匕放置().5h，待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿，37"C培养16-24h;挑取白色克隆，LB液休培养，保存，进行插入片段验证和测序分析。CTAB法抽提质粒用无齒牙签挑取分离的单菌落接种到5ml含l()()lig/mLAmp的LB液体培养基中，37'C振荡培养12h至对数生长后期，将1.5m:L过夜培养菌液加入1.5mL离心管中，12000rpm离心3()s，弃去l:清液，将离心管倒置使l:清液全部流尽，加入2()0uLSTET(含糖)，充分悬浮菌体，加入4u:L浓度为10mg/m:L的溶菌酶，颠倒混匀，室温放置5min，沸水煮50s,1.200()rpm离心l()min，ltj牙签去除沉淀，上清加入5uL10mg/mL的RNase，颠倒混匀，68。C水浴10mm,力卩入10uI5%(w/v)CTAB，混匀室温放置3mm，12000i-pm离心5min，沉淀悬浮f300uL1.2mol/LNaCl溶液中，涡旋，加入750uL无水乙醇，室温放置5min，i2000rpm离心2mim沉淀用500u:L70%乙醇冲洗，i2000rpm离心2mim沉淀于空气或温箱中千燥后，溶解于2()p1TE或双蒸水中。提取出来的质粒经验证后，送公司测序，测序由上海生工生物工程服务有限公司完成。内生真菌Muscodorsp.茼株ZJLQ024的ITSrDNA、28SrDNA、RPB2和beta-tubulin某因序列如附件序列表所述(SEQIDNO:1---SEQIDNO:4)。内生真菌Z儿Q024的ITSrDNA、28SrDNA、RPB2及beta-tubulin基因序列在GenBank....匕进行BLAST搜索。基fBLAST结果，用软件ClustalX1.81将菌株Z.JLQ()2'1基因序列与包括:M:uscodOT属在内的相关属进行系统发育分析。系统发牛树的构建由软件EAUP*4.()W0完成，应用最大简约法中的启发式搜寻法进行系统发生分析，具体设置如下用逐步添加法生成树，添加随机序列，重复1000次；树-对分-重接法作为分枝交换运算法则；序列中竿.个缺口作为第五种碱基对待，插入的序列若与其他序列不同源则被删除；应用fi举分析评估树的可靠性，设置fi举值为1000个重复。从构建的系统发育树结果确定，ZJLQ024为Muscodor属的新种，与已知的Muscodor属真菌Muscodoralbus、Muscodorroseus、Muscodorvitigentis禾UMuscodorcrispans不同。实施例6、内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ()2'1产生的VOCs分析内牛真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024产牛的VDCs采用固相萃取/气相色谱Z质谱技术(Solidphasemicroextraction/Gaschromatograph/Massspetra，SPME/GC/MS)分析。将Muscodorsp.菌株ZJLQ024菌株接种TPDA培养基上，25。C培养3-5d，切取菌饼转接到PDA或MEA培养基l:，用封口膜将一次性塑料培养皿封口，25。C生化培养筘里培养--定时间(3d、5d、10d)，用细针头从培养肌边缘钻-一小孔。将固相微萃取不绣钢保护针管插入GC/MS的进样室，推出萃取头，使萃取头暴露GC气化室屮，24.(rC活化20分种，之后将萃取头縮冋保护针管，立即插入己准备好的待测培养皿中，推出萃取头，使萃取头暴露在培养皿中，不能碰到菌丝，室温K萃取45分钟后，立即将萃取头縮回保护针管，立即插入GCZM:S的进样室，推出萃取头，萃取头暴露GC气化室中，240T解吸3()秒，进行色谱测定。分析操作条件及器材如下仪器、试剂及GC/MS条件固相微萃取装置(美国S邵elco公司)，萃取头涂层为50/30pMDVB/CAR/PDMS;气相色谱仪-质谱仪(Agilent6890NGC/5975BinertXL:MS)，石英毛细管柱H:P-5MS(30mX250umX0.25um);数据检索应用NIST05数据库。色谱条件载气为氦气，柱流量1.0mL*min—1;汽化室温度240°C，色谱柱初始温度30。C，保持3min,以5°C*min—1升温速率升至22()°C。质谱条件EI电离源，电离电压70eV，离子源温度230t:，四极杆温度i50。C，接口温度28(rC,扫描范围20-45()amu，不分流。通过GC/M:S分析，得到各成分的总离子流图，根据标准图谱和有关文献确定各组分的化学成分，并按峰面积归一法计算各组分的相对百分含一，测试分析结果见表5:表5内生真菌Muscodorsp.菌株ZJLQ024.和Muscodoralbus培养5d产生的VOCs15RTPossiblecompoundMrTotalarea(%)(min:s)ZJLQ024M.albus3.286Propanoicacid,2-methyl-，methylester2-甲基-丙酸甲酯1020.704.394.510l國Butanol，3-methyl-3-甲基-l-丁醇88-0.477.092Propanoicacid,2-methyl-2-甲基丙酸8828.2629.1213.515.alpha.-Phellandrenea-水芹烯1362.5813.928Cyclohexene,1-methyl"4-(1-methylethyliSe加)誦1誦甲基-4-(1■甲基亚乙基)环己烯1361.0514.321.beta.-Phell加dreneP-水芹烯13644.2516.998PhenylethylAlcohol苯乙醇122-1.2517.2662-Cyclohexen-l-ol，"methyl"4"(l-metJjylethyl)-,trans-反式小甲基4-(1-甲基乙基)-2-环己烯-卜醉1540,5217.8242-Cyclohexen-l"Ol，l-methyl-4-(l-methylethyl)-,cis-顺式-l-甲基-4《l-甲基乙基)-2-环己烯-l隱醉1540.3619.5002-Cyclohexen-l-ol，3-methyl-6-(l-methylethyl)-，trans"反式-3-甲基-6<1-甲基乙基)-2-环己烯-l-醇1543.9119.8542-Cyclohexen-1-ol,3-methyl-6"(l-methylethyl)-，cis-顺式-3-甲基-6-(1-甲基乙基>2-环己烯-l-醇1540.2421.1872-Cyclohexen-1-one,3-methyN6"(1-methylethyl)"3-甲基冬(l-甲基乙基)-2-环己烯小酮1520.5021.242Aceticacid,2-phenylethylester乙酸-2-苯乙酯1642.7923.883Caryophyllene~[11]石竹烯-[ll]204-0.3123.93824.9581,4-Methanoazulene，decahydFO~4,8,8-trimethyl-9-methyl咖,[lS-(i.alpha"3ELalpha.,4.alpha.,8a.alpha)]-i1S<1alpha^Mlpha^alpha^aalpha)]-十氢"4,8，8-三甲基-9-亚甲基-1，4-亚甲基长叶烯204Cyclohexane，1-ethenyl-1-methyl-2，4-bis(l-methylethenyl)隱，[1S-(l.alpha■，2.beta.,4.beta5]-[11alpha^betMbeta)]-l-乙烯基小甲基-2,4-二(l-甲基乙烯2040,112..230.7125.690Caiyophyllene旭石竹烯2040.120.1826.058Bicyclo[3.1.1]hept-2-ene，2,6-dimethyl-6-(4-methyl-3-pentenyl)-2，6-二甲基-6"(4-甲基-3-戊烯)二环21)4[3丄l]庚-2-烯0.150.65Azulene,1,2,3,4，5，6,7，8"Octahydro-l,4-dimethyl-7-(1-methylethenyl)-,26.141S-(1.alpha.,4.alphi,7.alpha0]-E1S一1alphMalplla^alpha)]-1,2,3,4,5,6,7,8-八贫化-1,4-—甲基_-7-(1-甲基亚乙基)奧_2042.270.63Azulene,1,2，3，3a^，5,6，7"Octahydro-l，4-dimethyl-7-fl-methylethenyl)-，27.431[1R-(1,alpha"4.alpha>，7.alpha.)]-E1R-《1alphMalpliaJalpha)]-1，2，3，3M,5，6，7誦八氢化-1，4-」甲基_-7-(1-甲基亚乙基)奥_2040.240.4917Naphthalene,1,2，3，5，6,7，8,8a-octahydro-l,8a-dimethyl-7-(1-methylethenyl)誦，27.540[lS(l.alphjL，7.alph￡U，8aalpha.)-204ilS-halpha^alpha^aalpha)]-l，2，3，5，6，7,8,8a-八氢化-l，8a-二甲基_-7-(1-甲基亚乙基)紫_0.47Naphthalene,1，2,3，4，4a^，6，8a-octahydro墨4a^-dimethyl-2-(l-methylethenyl)誦，27.670[2R-(2.alpha"4a.alpha"8a.beta.)]-204^R-^alphMaalpha^abeta)]-1^JAAa^ASa-八S化4a^二甲基_-2-(1-甲基乙基)蔡_10.4613.827.839A加lene,1，2，3，5，6，7，8，8a-octahydro-l,4-dimethyl-7々1-methylethenyl)-，-fcommonname:valencene)flS^lalphaJalpha^abet^]-l，2，3,5，6,7，8，8a-八氢化-1,4-二甲基-7-(1-甲基亚乙基)奥_2040.61.4031,849Tricyclo[6.3.0.0(2，4)]undec-8"ene，3,3,7,1l-tetr咖ethyl-3，3，7，11-四甲基二环[6.3.0.0(2，4)]H碳-8-稀2040.160.11主要的抗菌活'l(a)2-甲基-丙酸甲酉旨(Propanoicacid，2-methy卜，methylester);(b)2-甲基丙酸(Propanoicacid，2-methy卜)；(c!n-乙烯基-卜甲基-2.4-二(卜甲基乙烯基)-环己烷(Cyclohexane，1—etheny卜1—methyl—2，4—bis(1—methylethenyl)—，[IS—(1.alpha.，2.beta.，4.beta.)]—);(d)石竹烯(Caryophyllene);(e)2，6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯)二环[3丄1]庚-2-烯(-Bicyclo[3丄l]hept-2-ene,2，6-dimethyl-6-(4-methyl-3-pentenyl)-);(01，2，3,4，5，6，7,8-八S化-1，4-二甲基-7-(1-甲基亚乙基)奧(Aziilene，1，2，3，4，5,6，7，8-oetahydro-1，4-dimethyl-7-(l-methylethenyl)-，[丄S-(丄.alpha.'4.alpha.，7.apha.)]-);(g)l，2，3，4，4a，5，6，8a—八氢化-':la，8—二甲基—2—(卜甲基乙基)萘(Naphthalene,1，2，3，4,4a，5,6，8a-oetahydro-4a，8—dimethyl—2—(1—methylethenyl)—，[2R—(2.alpha.，4a.alpha.,8a.beta.)]—);(h)3，3，7，11-四甲基三环[6.3.0.0(2，4)〗十一碳—8—烯(Tricycl。[6.3.0.0(2'4)]undec-8-ene，3，3，7，1I-tetramethy卜:)，歪要的是含有(i)a-水/f烯(alpha,-Phellandrene);(i)水:序烯(beta.-Phellandrene);(k)反式丄-甲基-4-(丄-甲基乙基)-2-环己烯-丄-醇，(2-Cyclohexen-丄-ol，1-methyl-4-(1-methylethyl)-，trans-)18(1)顺式1-甲基-4-(1-甲基乙某)-2-环己烯-1-醇(2-Cyclohexen-1-ol，1—methyl—4—(1—methylethyl)—，cis—)(m)反式3-甲基-6-(1-甲基乙基)-2-环—d烯-1-醇(2-Cyclohexen-l-ol，3-methyl-6-(丄-methylethyl)-，trans-)(n)顺式3-甲基-6-0-甲基乙基)-2-环己烯-1—醇(2-Cyclohexen-1-ol，3-methy卜6-(1-methylethyl)-，cis-)类等活性物质。实施例7、Muscodorsp.菌株ZJLQ024活性载体制剂的制备本发明制备Muscodorsp.菌株ZJLQ024活性载体制剂的方法，该方法包括(1)Muscodorsp.菌株ZJLQ024.种子培养液的制备，(2)将Muscodorsp.菌株ZJLQ024种子液接种于载体培养基中，(3)Muscodorsp.菌株Z儿Q024在载体培养基中培养生长，(4)Muscodorsp.菌株ZJLQ024载体培养物的T-燥密封包装。适当的固体载体为垤石、珍珠岩或硅藻土，最优选为硅藻土；合适的培养基为包括钙离子、镁离子、铁离子、磷酸盐离子和其它微量元素、蛋白胨、酵母提取物、大豆饼粉、葡萄糖、小米粒、大麦粉、麸皮、土豆汁和玉米浆的组合物；稳定剂包括蔗糖、葡萄糖、甘油或乳糖，最优选为甘油；以及合适的培养条件，包括pH、温度、湿度及培养时间。具体如下1)在优选的实施方案屮Muscodorsp.菌株ZJLQ024种子液制备是通过将菌株Z儿Q024在PDA培养基上活化后，将菌饼接入优化后的液体培养基中来制备种子液。优选的种了液体培养基为马铃薯葡萄糖培养液(potatodex加sebroth，PDB)、MI:D改订培养液(每升含蔗糖30.00g，蛋白胨i.00g，酵母粉0.25g，酒石酸铵S.()()g，Ca(N03)2().28g，KN03().()8g，KC1().()6g，MgS04(),36g，NaH2P04H200.02g，FeCl36H2O2.0mg，MnSO45.0mg，ZnS047H202.5mg,H3B031.4mg，K10.7mg，pH5.5)、大麦粉酵母粉培养基(每升含大麦粉3()g、酵母粉5.()g、蛋白胨3.0g、Ca(NO3)20,4g,KNO30.12g，KC10,2g,M:gSO40,25g,FeCl36H205,0mg,MnSO,;5.0mg,ZnS047H205.()mg，H3B032.()mg，KIl.Omg，pH5.5)、小米粉酵母粉培养基(每升含小米粉30g、酵母粉5,0g、蛋O胨3,0g、Ca(NO3)20.4g，KNO30,12g，KC10.2g，MgS04().25g,FeCl3*6H20S.()mg，MnSO45.0mg，Z.nS04*7H205.0mg，H3BO32.0mg，KIi.Omg，pH5.5)和细米糠酵母粉培养基(每升含细米糠30g、酵母粉5.()g、蛋白胨3.()g、C:a(N03)2().4g,KN03(),12g，KC1(),2g，MgS04().25g，FeCl36H205.0mg，MnSO45.0mg，ZnS047H205.0mg,H3BO32.0mg,KIl.Omg,pH5.5),更优选为大麦粉酵母粉i、米粉酵母粉培养基和细米糠酵母粉培养基，最优选为小米粉酵母粉培养基。种亇^^'夜的制备在控制的温度以及pH和转速下生长，以获得高细胞密度的培养物。优ii的;品戊介于10-3(rC之间，更优选介于20-2『C之间，最优选为25°C。优选的pH是3-8，优逸4-7，更优选为5.5。优选的转速为50-300rpm之间，更优介于100-20()rpm，最优选为150rpm。培养时间优选为2-l()d，更优选为3-8d，最优选为5d，培养之后采收全部种子培养液。2)将制备好的Muscodorsp菌株ZJLQ()24种子培养液接入载体培养基，在优化后的培养条件下生长。优选的固体载体为垤石、珍珠岩或硅藻土，最优选为硅藻土；优选培养基包括钙离子、镁离子、铁离子、磷酸盐离子和其它微量元素、蛋白胨、酵母提取物、大豆饼粉、蔗糖、可溶性淀粉、葡萄糖、小米粒、大麦粉、麸皮、细米糠、.....L:豆汁和玉米浆的组合物；更优选为硝酸钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、氯化钾、硫酸锌、硫酸锰、氯化铁、硼酸、碘化钾、蛋白胨、酵母提取物、大豆饼粉、葡萄糖、小米粒、大麦粉、麸皮、细米糠、土豆汁和玉米浆的组合物，最优选为硝酸钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、氯化钾、硫酸锌、硫酸锰、氯化铁、硼酸、碘化钾、蛋白胨、酵母提取物、大豆饼粉、葡萄糖、小米粒、麸皮、细米糠、土豆汁的组合物。优选固体载体硅藻土在载体培养基巾(千基计)的比例50-90%，更优为70-90%，最优为85%。作为木发明的培养基的改进，该载体培养基的组成为硅藻土380g/kg、硝酸钙0.4g/kg、硫酸镁0.25g/kg、磷酸二氢钾U)g/kg、氯化钾().2g/kg、硫酸锌5mg/kg、硫酸锰5mg/kg、氯化铁5mgZkg、硼酸2mg/kg、碘化钾1mgZkg、蛋O胨5.0g/kg、酵母提取物3.0gZkg、大豆饼粉5.0g/kg、葡萄糖1().()g/kg、小米粒20.()g/kg、麸皮30.()g/kg、细米糠2().0g/kg,其余为土豆汁，将湿度控制在45%。也就是说将酸钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、氯化钾、硫酸锌、硫酸锰、氯化铁、硼酸、碘化钾、蛋白胨、酵母提取物、大豆饼粉、葡萄糖、小米粒、麸皮、细米糠的组合物溶T土豆汁中形成混合液，W与硅藻土混合均匀。优选温度为20-30°C，更优选为22-28t:，最优选为25"C。优选的生长时间为1-1.5d，更优选3-12d，最优选为7d。优选的湿度控制在20-80%，更优为30-70%,最优为55%。优选接种时种子培养液与载体培养棊的比例为1-20%(革:量比)，更优选的比例为5-15%,最优选10%。3)在活性载体制剂中添加稳定齐U，例如蔗糖、葡萄糖、tf油或乳糖等，以保持菌休细胞的活性，在优选的方案中，稳定剂为蔗糖、葡萄糖、廿油或乳糖，更优选为蔗糖、葡萄糖、甘油，最优选为甘油。添加稳定剂的时间为上述固体发酵培养结束时加入，在稳定剂加入量优选方案中，优选的比例为5-20%(稳定剂活性载体制剂的重量比),更优选为10-15%，最优选为1.()%。之后再进行千燥包装，千燥时采用低温低冻技术，以抑制Muscodorsp.菌株ZJLQ024菌体细胞的生长代谢活动。优选商品活性载体制剂的水分控制指标为10-50%,更优化为1.5-35%，最优为2()%。包装是为了给活性载体制剂提供-一个稳定安全的贮存与使用微环境，本发明是将干燥后的活性载体制剂装入透气透湿的环境中，外层采用无纺布保护，在内层玻璃膜袋中事先配备定量的活化营养液，只要使用时用手挤压就可以使营养液加入活性载休制剂中，以使菌株ZJLQ024菌休细胞得到水分和营养以恢复生长，释放出抗齒活性的挥发性混合物VOCs。活化营养液包括水、蛋白胨、酵母提取物、生物生长素、葡萄糖及微量元素(为公知技术)。采用二分隔平皿对峙培养法测试Muscodorsp.茼株ZJLQ024活性载体制剂抑制植物病原菌的活性，以不加M:uscodorsp.菌株ZJLQ024培养物为空白对照。病原指示菌灰葡萄孢、尖孢镰刀菌、终极腐霉、曲霉。将病原指示菌接在PDA培养棊上活化，切取菌丝块(直径5mm)(曲霉用孢子悬浮液接种)接种于PDA培养基(90mnv丫]隔培养皿)-一贝'J,将Muscodorsp.菌株Z.JLQ024培养物置f培养皿另一侧(无培养基)，用parafilm膜封口，25T牛化培养箱培养。待空白对照皿中病原菌菌落长至快满皿时，测量Muscodorsp.菌株ZJLQ()24培养物产生的挥发性混合物质VOCs对病原指示菌的生长抑制，计算抑制率。将测试后的未生长的病原菌菌饼块取出转接到新鲜的PDA培养基上，25。C生化培养筘培养，检査其是否能生长，确定Muscodorsp.茼株ZJLQ024培养物产生的挥发性混合物质VOCs是否可以完全杀死病原菌(图8)。测试结果表明Muscodorsp.菌株ZJLQ024活性载体制剂对病原指示菌尖孢镰刀菌的抑制活性比Muscodorsp.菌株Z.JLQ()2'1大麦粒培养物强，由fMuscodorsp.菌株ZJ:LQ024产牛的VDCs对曲霉、灰葡萄孢和终极腐霉比较敏感，两种培养物都能完全杀死它们。实施例8、Muscodorsp.菌株Z几Q024产生的VOCs防治采收后水果腐烂试验为了测试Muscodorsp.茼株ZJLQ024产生的VOCs对采后水果腐烂的防治作用，实施例如下将用生长在PDA培养基上或制备好的活性载体制剂Muscodorsp.菌株ZJLQ()24来控制采收后水果的腐烂问题。具体而言，挑取采收后无伤n和虫害的水果(新疆香梨或水蜜桃)，置于水果保存盒中(可密封)，手术刀轻轻划-一伤U,在伤U上接入褐腐病菌(Moniliniafracticola)，并在伤口敷上湿润的滤纸片用f保湿，将生K在PDA培养基上或制各好的活性载休制剂Muscodorsp.菌株ZJLQ024放置于水果保存盒内，用于抑制病原菌的生长，加盖密封，放入25'C的人工气候箱，保持湿度在85%。每处理3重复，以不加Muscodorsp.菌株ZJ:LQ024培养物为对空白对照，3-5d后取出水果，调查发病情况并拍照记录。结果表明Muscodorsp.菌株ZJLQ024培养物产生的VOCs可以较好的控制釆收后水果腐烂问题(图9)。实施例、9Muscodorsp.菌株ZJLQ024产生的VOCs对种苗病害的防治作用以萝卜幼尚'生长法测定Muscodorsp.菌株ZJLQ024产生的VOCs对种尚'病害的防治作用。将磨碎后的暧石装入直径50mm、高度40()mm的试管中，装入暧石的高度约为丄0cm，i2i。C湿热灭菌20min。在每个试管中接入病原菌终极腐霉菌饼(直径8mm)5-6块，用瞎石覆盖，其上撒入l()粒种子(短叶----f---二号萝卜，广东省良种引进服务公司提供)，W用噔石覆盖。测试组试管里挂上Muscodorsp.菌株ZJLQ024活性载体制剂(外面用纱布包装)，以只接病原茼为空白对照，试管用透气软塞封口。移入人工气候贫I(25"C，光照黑暗二12h:12h)中培养，定期统计发芽率及观察种苗的发病情况。表6Muscodorsp.菌株ZJLQ024产生的VOCs对种苗病害的防治作用处理发芽率(％)平均株髙(mm)7d7d14dMuscodorsp.菌株ZJLQ024活性载体制剂93±3.147±6193±19接病原齒对照2522±120MuscodorSp菌株ZJLQ024活性载体制剂产生的VOCs能有效地抑制终极腐霉对萝卜种子萌发、幼苗生长的影响。实施例10Muscodorsp.菌株ZJLQ024活性载体制剂产生的VOCs抑制人类生存环境屮空气微生物数量的测试为了测试Muscodorsp.菌株Z儿Q024活性载体制剂产生的VOCs对空气中微生物数量的影响及环境中微生物状况，采用平皿培养法测试。将15-20毫升的PDA培养基倒入直径为90mm无菌培养皿，待培养基凝固后再使用。测试在浙江大学牛物技术研究所生物技术楼实验室(室温25。C)进行，用玻璃板隔开二小间(每间卜2m2),其中处理21间放置Muscodorsp.菌株ZJLQ024-活性载体制剂l()Og，对照间不放置Muscodorsp.菌株Z儿Q024活性载体制剂，48'h、72h和120'h后将准备好的培养皿置于处理间和对照间，并打开盖了，使其在空气中暴露6()min，将培养皿盖了合....匕后移入25t:的生化培养箱中培养，测试空气中的微牛物数量。表7Muscodorsp.菌株ZJLQ()24活性载体制剂抑制人类生存环境中空气微生物数量的测试结果<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>Muscodorsp.菌株ZJLQ()24活性载体制剂能有效地减少环境空气中微生物的数量，Muscodorsp.菌株ZJ:LQ024活性载体制剂在暴露72'h后对空1中微生物的抑制率达到70.6%，与暴露12()h没有明显差异。实施例11可分离自Muscodorsp.菌株ZJLQ024培养物产生的VOCs的人工合成混合物杀菌剂本申请人发现，(1)Muscodorsp.菌株Z儿Q024培养物产生VOCs的基本所:"成分；(2)Muscodorsp.菌株ZJLQ()2'1培养物产生VOCs中部分成分的组合，或(3)Muscodorsp菌株ZJ:LQ024培养物的产牛VOCs中一种成分的合成VOCs具有Muscodorsp.菌株ZJLQ()24的杀菌特性。为丫测试各类化合物相对的生物活性和各类化合物在全部混合物中最适浓度及比例，全部混合物为标准培养平板中的培养物k每50mL空域的100uL的检测混合物。例如，U-水芹烯占鉴定挥发物混合物的44.25%，以44,25u:L/50m:L(0,885iiL/m:L)空域测试对水芹烯进行测试，其它化合物也是以相同的标准过程。以().7()%2-甲基-丙酸甲酯、28.26%2-甲基丙酸、2.23%1-乙烯基-1-甲基-2.4-二(1-甲基乙烯基)-环己烷、0.12%石竹烯，0.15%2，6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯)二环[3丄1]庚-2-烯，2.27%1，2，3，4，5，6，7，8-八氢化-1，4-二甲基-7-(卜甲基业乙基)奧、10,46%1，2，3，4，4a，5，6，8a-八氢化-4a，8-二甲基-2-(1-甲基乙基)萘、().16%3,3，7，11-四甲基三环[6.3.0.0(2，4.)]卜一碳-8-烯、55.65%丙酮配制成:"机混合物(称为组合物1)。设低、中、高一:个水平的组合物1与2.58%a-水芹烯、'M.25%水芹烯、0.52%反式1-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-环己烯-丄-醇、0.36%顺式丄-甲基-4-(丄-甲基乙基)-2-环己烯-丄-醇、3.9丄％反式3-甲基-6-(卜甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、().24%顺式3-甲基-6-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇进行混合，测试混合性挥性化合物对指示病原菌的抑制性，以终极腐霉为病原指示菌，测试结果见表8。表8—个不同水平的组合物1与其它化合物配成的人工合成挥发性混合物对终极腐霉的抑制率序号名称浓度(Ul/ml)厂白分含tt(W)1組合物11.407/31.72.814/48.145.628/64.992a-水芹烯0.0516/3.40.0516/2.580.0516/1.743P-水芹烯0.885/58.280.885/44.250加5/29.874反式1-甲基4-(1-甲基乙基)-2-环已烯-1-醉0.01104/0朋0.0104/0.520.0104/0.355顺式1-甲基4-(1-甲基乙基)-2-环已烯-1-醇0.0072/0.470.0072/0.360.0072/0.246反式3-甲基各(1-甲基乙基)-2-环已烯-1-醇0.0782/5.140.0782/3.910.0782/2.647顺式3-甲基"6-(1-甲基乙基)-2-环已烯-1-醉0.0048/0.320.0048/0.240.0048/0.16生长2d后的菌落直径(mm)1200抑制率，％96.7100100从测试结果可以看出，高、中、低—个水平的组合物l与相同体积的a-水芹烯、水芹烯、反式卜甲基—4—(]—甲基乙基)—2—环己烯—]—醇、顺式]—甲基—4—(1—甲基乙基)-2-环己烯-i-醇、反式3-甲基-6-(卜甲基乙基)-2-环己烯-i-醇、顺式3-甲基-6-(卜甲基乙基)-2-环己烯-1-醇进行混合的挥发性气体对终极腐霉的抑制率不同，低水平时时的抑制率最低，中水平和高水平抑制率都达到100%。实施例1.2、人工合成的杀茼剂，其包括如表9所述体积百分比的成分，余量为丙酮。表9、杀菌剂的3个实施例23<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>COCOo'oo'cc:o'寸o'CDCOo'。，寸o'CSSo'oo'OSo'CDo'a]a]a]a]3333卿卿卿卿寸础寸础础础糊糊糊糊5+w装5+賢装COiW装COi賢装采用二分隔平皿培养法测试以NlN3和等M表5的Muscodoralbus培养5d产生的VOCs(作为对比例)抑制植物病原茼的活性实验。病原指示菌灰葡萄孢、立枯丝核菌、细链格孢、齐整小菌核、终极腐霉、尖孢镰刀菌黄瓜专化型、圆形刺盘孢、人25丽轮枝菌、核盘菌、杣盘多毛孢、稻梨孢菌、指状青霉、if豆葡萄孢、褐孢霉、泻根亚隔孢壳、曲霉、淡紫拟青霉。将病原指示菌接在PDAi力《基上活化，切取菌丝块(直径5mm)(曲霉用孢了悬浮液接种)接种fPDA培养基(90mm有隔培养皿)一侧，将以按照N丄N3和等同表5的Muscodoralbus培养5d产牛的VOCs(作为对比例)中各种化合物比例的4种混合物分别加入培养皿另一侧(每种混合物llj^均分别为l()()PL)，用parafilm膜封口，25"C生化培养箱培养。待空白对照皿中病原菌菌落长至快满皿吋，测量人工合成的挥发性混合物质yOCs对病原指示茼的生长抑制，计算抑制率，结果如表10所示。表10<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>SEQIDNO:1核糖体rDNA内转录间隔区(InternalTranscribedSpacer,ITSrDNA)基丙序列cctttgtgaacctaccatcgttgcttcggcggcggaggtgctacgctgcaaggcgctacc60ctgtagttaccctgtagtcccagggagctgtcatcagctctttaggggagctcacagcct120昭cgatgttttegttax;agggetgtogctccggaetgecctcecegecggcggceMcto180aactctgttttctctaaaactctgaatcataaacttaataagttaaaactttcaacaacg240galctcttggttetggcateg吨Mgaacgeagcga論tgcgatogtoatgtgaattg300cagaattcagtgaatcatcgaatctttgaacgcacattgcgcccattagcattctagtgg360gcatgcetgttcgagegtcatttcaccacttaagccctgttgettagcgttgggggccta420cggcacagcctgtagccctttaaagtgattggcggagttagttctatctctaagcgtagt480論tttettctcgcttetgcagt敏gctggcecccgcegt論論524SEQIDNO:2核糖体大亚基(28SrDNA)棊因序列ttgccctagtaacggcgagtgaagcggcaacagctcaaatttgaaatctggctctcgggc60ecgagttgtaatttgtagaggatgattttggcgcggtgecttccgagttcectggaaegg120gacgccttagagggtgagagccccgtacggttggacaccaagcctctgtaaatctccttci80gscg敏cgagtagtttggg牆tgetgctctantgggaggta牆tttcttctengcte240Mtaccggccsg昭accgstagcgc^c論gtag敏g加g論绍吨論Mgcactttg300論牆gagggttaaaiageacgtgsaattgttgsaagggaagcattlacteecagscetet360gcec.tgc.ggateatgtggtgttctcacegc.tgcacttc.gcttggtttaggecageatcgg420ttttegtagggggataaaagctttaggaacgtagetecetegggagtgttatagectttt480gcataatacccttacggggaccgaggaccgcgcttcggcaaggatgctggcataatggta540gtcaatgacecgtettgaaacacggaecaaggagtegaacatttgtgcgagtgtttgggt600gttaaaccctcacgcgtaatgaaagtgaacgtaggtgagagcccttacgggtgcatcatc660gaccgatcttgatgtcttcggatggatttgagtaagageataactgtteggacccgaaag720atggtgaaetatgcgtggatagggtgaagccagaggaaactctggtggaggctcgcagcg780gttctgacgtgcaaategatcgteaaatctgcgeatgggggegaaagaettatcgaacea840ttMsecsgc.ggta牆站gsettaelaggtggttMg昭gc.cc.cecg绍sgggg昭绍gc900etogggggttscecggtagetgctaecetgcscttecgggtggecgcecgae自getc960attgcgaggacalcccaccaaggccaggggttaccgccgcccgctgaaaa_gcgccgcggc1020accgagagtagcgctcttgggtaeggtaaaaacgcccctggtagcggacgacttgcagcc1080aaccccgcactacaggggaaggttcacagactaaacagcgatgggttggcgcgctgccggi丄40cetaagaeatagtegacctggggectgagaaggtgecetgcagcgtggcgtacaggcg1198SEQIDNO:3RNA聚合酶I工(RNApolymeraseI工subunit，RPB2)基冈序列cttttecgtaaeatcgtocgccgcatgaegeaggaggtettgtcceacttgaagcgaage60^teg绍cagggc驢gc绍tteccategecetegecgtea绍gecaalalMtoctagc120ggtctcaagtactccctcgccaccggtaactggggcgatcagaagaaagccatgagctcc180accgetggcgtgtcecaggtgete論"，Macttttgcctccmcgctctcgeatttg2.40cgaag^ccaa_cac.cccc.gt3ggccg昭3tggc似gctcgcc論gccccgcc昭cttcac300Mcacccactggggcctegtttgtcctgecgagacececgagggteaggcctgtggtctg360gtgaagaacttgtctcttatgtgctccgtcagtgtcggcacctcgacggagcccatcatc420gagtacatggcgteccggaacatggagattctcgaagaataegaaececagegetatece48027:0188]aatgccaccaagatctttctcaacggctcatggatcggcgtccaccacgatcccaagtct540:0189]ctcgtgagagatgtccagcagctacgccgaaccaatcagatccctgcagaagtatcattg600:0190]gttcgegacateegtgategcgagttcaagatettcteggacgctggccgagtcatgega660:0191]cccttgtttgtcgtcgaacaagaggacacgcccgaccgcctgaagggacagctcgctctc720:0192]accaaagaaatggccaagaaaatcgaageegatcaagatceggcaacgatagaaaggaac780:0193]gaatattatggttgggaggggttggtcgatgacggcgccattgagtatctggatgccgag840:0194]gaggaagagaeggecatgatttgcatgacgcccgaaga878:0195]SEQIDNO:4:0196]f3-微管蛋白(beta-tubulin)某因序列:0197]aacatgegtgagattgtaagtcccaaccgttgcgcgcgccacgcccgactgcccccgacc60:0198]cctctgtttacttgcccgaggagcccaaccaaactacttccaaaccacctcttccgcttg120:0199]cctacccatcettgaacgegtccagatccagtcactctgggtcgaatgeetctccacgcc丄80:0200]tatacctccttca.tcatatcagcaggtctggcagtcgctgccaacccgtgtccccgtctg240:0201]cccagagccaaacatggatggagaactctgctaacccgtgtattttcgeatctaggttca300:0202]cctccagaccggtcagtgcgtaagtcaatcctccatctcaacatgatcctgtcgaaaatg360:0203]ccgttgtactaaegtategetacagggtaaccaaattggtgetgetttetggtgtgtacc420:0204]acaaacgegaaacaeggttacaggccatcaatactgactgttgtgctacaggcaacagat480:0205]ctccggcgagcacggtctcgacggcaatggagtgtatgttgctgtcgcttgactgccact540:0206]gcttgaactccatgactgacatacgaaacagctacaatggcacctccgagctccagctcg6()():0207]agegcatgagcgtctacttcaacgaggtatgcttccacctagcttacctaatgecacagg660:0208]caattccaagaaaagatgeacctgactgatacgcgatgtgcagggtgccggcaacaagta720:0209]cgtcccccgtgccgtcctcgtcgatctcgagcccggtaccatggacgccgtccgcgccgg780:0210]tcccttcggccagctcttccgccccgacaactttgtcttcggccagtccggtgctggcaa840:0211]caactgggccaagggtcactacaccgagggtgcegagctcgtegaceaggtectcgatgt900:0212]cgtccgtcgcgaggecgagggetgegactgcctccagggcttccagatcacccactcgct960:0213]cggtggtggtaccggtgccggcatgggcacgctcctcatctccaagatccgcgaggagtt1020:0214]ccccgaccgcatgatggccaccttctccgtcgtcccctcgcccaagtctccgacaccgtc1080:0215]gtcgagccctacaacgccaccctctccgtccaccagctcgtcgagaactcggacgagacc丄丄40:0216]ttctgeategacaacgaggccctctacgacatctgcatgcgtaccctcaagttgtccaac1:0217]ccctcgtacggcgacctgaaccacctcgtctccgccgtcatgtcgggcgtcaccacctgt1260:0218]ctgcgtttccccggccgctcaactctgacctgcgcaagttggctgtcaacatggtgccct1320:0219]tcccccgtctccacttcttcatggtcggctttgctcctctgaccagccgcggcgecggtg1380:0220]ccttccgcgctgtcaccgttcccgagttgacccagcagatgttcgaccccaagaacatga144-0:0221]tggctgcctctgacttccgcaacggtcgctacctcacttgctctgccatcttgtaagcga1500:0222]ccaacccgtattctcttaaaaggacatttccatgctaacacaactgtgccagccgtggta1560:0223]aggtctccatgaaggaggtcgaggaccagatgcgcaacgtccagaacaagaactegtcta丄620:0224]cttcgtcga.gtgg站tcccaacMcatcca165228权利要求一种植物内生真菌，其特征是该植物内生真菌Muscodorsp.菌株保藏名称为ZJLQ024，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2009年1月8日，保藏号CGMCC2863。2.利用如权利要求1所述的植物内生真菌制成的活体制剂。3.如权利要求1所述的植物内生真菌或权利要求2所述的活体制剂的用途，其特征是用于抑制或杀灭病原微生物或霉变微生物。4.根据权利要求3所述的植物内生真菌或活体制剂的用途，其特征是所述病原微生物为农作物生产过程中的病原微生物、或人类或动物生存环境中的病原微生物；所述霉变微牛物为建筑材料霉变微牛物。5.—种杀菌剂，其特征是所述杀菌剂包含().65%10.2%2-甲基-丙酸甲酯、28%78%2-甲基丙酸、0.6%2.5%1-乙烯基-1-甲基-2.4-二a-甲基乙烯基)-环己烷、().].()%().4%石竹烯、0.06%1.%2，6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯)二环[3丄1]庚-2-烯、0.8%3,5%1，2，3，4，5，6，7，8-八ti化-1，4-二甲基-7-(1-甲基业乙棊)奧、5.8%11%1，2，3,4，4a,5，6，8a-八氢化-4a，8-二甲某-2-(1-甲基乙基)萘、0,05%0.2%的3,3，7，11-四甲基一:环[6.3.0,0(2,4)]十一碳-8-烯、().3%2.8%a-水开烯、4%45%水开烯、().l%0.6%反式1-甲基-'1-(1-甲基乙基)-2-环己烯-丄-醇、0.08%0.4%顺式丄-甲基-4-(丄-甲基乙基)-2-环己烯-丄-醇、().25%4%反式3-甲基-6-0-甲基乙基)-2-环己烯-卜醇、(),()3%().28%顺式3-甲基-6-(卜甲基乙基)-2-环己烯-卜醇；其余为溶剂；以上百分比均为体积百分比。6.根据权利要求5所述的一种杀茼剂，其特征是所述杀菌剂包含().68%0.72%2-甲基-丙酸甲酯、28%28.5%2-甲基丙酸、2%2.5%1-乙烯基-1-甲基-2.4-二(1-甲基乙烯基)-环己烷、0.1()%0.14%石竹烯、().12%0.18%2，6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯)二环[3丄1]庚-2-烯、2%2.5%1,2，3，4，5,6，7，8-八氢化-1，4-二甲基-7-(1-甲基亚乙基)奠、10.26%10.76%1，2,3，4，'la，5，6，8a-八氢化-4a，8-二甲基-2-(丄-甲基乙基)萘、0.丄4%0.丄8%的3，3，7，i丄-四甲基二环[6.3.0.0(2,4)]--f--—碳-8-烯、2.38%2.8%a-水丼烯、43.5%45%P-水开烯、0.5%0.54%反式1-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、0.34%0.38%顺式1-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、3.85%4%反式3-甲基-6-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、0.22%0.26%顺式3-甲基-6-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇;其余为溶剂。全文摘要本发明公开了一种植物内生真菌，该植物内生真菌Muscodorsp.菌株保藏名称为ZJLQ024，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2009年1月8日，保藏号CGMCC2863。该植物内生真菌能制成活体制剂，可用于抑制或杀灭病原微生物或霉变微生物。本发明还同时公开了一种杀菌剂，包括2-甲基-丙酸甲酯、2-甲基丙酸等，特别是还包括a-水芹烯、β-水芹烯、反式1-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、顺式1-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇、反式3-甲基-6-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇和顺式3-甲基-6-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇。文档编号A01N63/04GK101691541SQ20091015351公开日2010年4月7日申请日期2009年9月30日优先权日2009年9月30日发明者周转忠,林福呈,毛黎娟,王国平,章初龙申请人:建德市大洋化工有限公司