专利名称：一种蔬菜用复合微生物消毒剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及的是微生物领域，具体的说是一种蔬菜用复合微生物消毒剂。
背景技术：
随着温室蔬菜产业的不断发展以及保护地种植蔬菜难以更换茬口，目前蔬菜重茬导致的各种病害频发，导致种植者大量采用化学农药防治。但是，由于化学防治中病菌对常用药剂的抗药性逐渐增强，防效不断下降，并在环境中不断积累，造成生态环境的恶化。而且，大量使用化学农药还造成了农药的大量残留，严重危害人类健康。因此，在上述背景下， 开发安全有效的防止方法成为解决问题的关键。生物防治是利用微生物等生物源手段，通过对病原微生物的拮抗和抑制作用来控制病害的方式，日益受到人们的关注。目前的研究表明，多种微生物具有抑制土壤病原微生物的作用，可清除土壤及作物表面的病原微生物，能够作为蔬菜的消毒剂使用。由于不同微生物的作用机理有所差异，效果各有不同，开发复合性产品将有利于发挥全面的效果，提高防治的可靠性。本发明筛选出多种具有清除土壤病原微生物作用的菌株，制成复合微生物群，在蔬菜的消毒效果方面具有安全无残留、效果稳定的优点。
发明内容
本发明的目的是提供一种蔬菜用复合微生物消毒剂。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为
一种蔬菜用复合微生物消毒剂消毒剂由复合微生物的发酵物组成，所述复合微生物发酵物为产朊假丝酵母、乳酸链球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌，按体积比1 :1:1:1 比例混合，混合后菌种按照重量百分比3%-4%接种于液体发酵培养基中，25-37°C发酵制成的，发酵物中PH值为4. 5-7. 5，菌总量达到10亿以上。所述复合微生物的发酵物加水按 1 1000-1 500的比例稀释即得到喷施剂。所述复合微生物发酵物为
1)复合菌种的增值培养将产朊假丝酵母、乳酸链球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌分别按重量百分比1%-4%的接种量分别在各自的培养基中进行增殖培养，直至对数生长期。2)复合微生物的发酵物将上述分别增值培养的菌种按体积比1 1 1 1比例混合，而后将混合后菌种按照重量百分比3%-4%接种于液体发酵培养基中，在25-37°C 下，发酵培养48-7池，得到复合微生物的发酵物，发酵物中pH值为4. 5-7. 5，菌总量达到10 亿以上。所述步骤2)中液体发酵培养基为葡萄糖2%，蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母膏0. 5%。蔬菜用复合微生物消毒剂的制备方法
1)复合菌种的增值培养将产朊假丝酵母、乳酸链球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌分别按重量百分比1%-4%的接种量分别在各自的培养基中进行增殖培养，直至对数生长期。
2)复合微生物的发酵物将上述分别增值培养的菌种按体积比1 1 1 1比例混合，而后将混合后菌种按照重量百分比3%-4%接种于液体发酵培养基中，在25-37°C 下，发酵培养48-7池，得到复合微生物的发酵物，发酵物中pH值为4. 5-7. 5，菌总量达到10 亿以上；
3)消毒剂将上述所得复合微生物的发酵物加水稀释到1:1000至1:500即为消毒剂。所述步骤2)中液体发酵培养基为葡萄糖2%，蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母膏0. 5%， 余量为蒸馏水。上述菌株均购自中国农业微生物菌种保藏中心，其中产朊假丝酵母于中国农业微生物菌种保藏中心编号为ACCC20060 ；乳酸链球菌于中国农业微生物菌种保藏中心编号为 ACCC10653 ；嗜酸乳杆菌于中国工业微生物菌种保藏中心编号为CICC6005 ；枯草芽孢杆菌于中国工业微生物菌种保藏中心编号为CICC20037。本发明所具有的优点
1.本发明所筛选和配伍的菌群具有抑制蔬菜病原微生物生长的功能，同时清除病原微生物。2.本发明消毒剂为液体产品，pH值为4. 5-7. 5，活微生物数量10亿/mL以上，微生物活力稳定；可按发病程度以1:1000至1:500稀释喷施，随浓度升高，消毒效果愈加理想， 可提高蔬菜的产量5. 0%—10. 0%。。
具体实施例方式实施例1
1)复合菌种的增值培养将产朊假丝酵母、乳酸链球菌、嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌分别按重量百分比3%的接种量分别在各自的培养基中进行增殖培养，直至对数生长期；
产朊假丝酵母的培养基马铃薯浸粉3g，葡萄糖20g，琼脂粉15g，蒸馏水加至IOOOmL, 121°C高压灭菌20分钟。产朊假丝酵母增殖培养条件培养对-4他。乳酸链球菌的培养基葡萄糖2%，蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母膏0. 5%，磷酸氢二钾0. 2%，乙酸钠0. 5%，柠檬酸铵0. 2%，硫酸镁0. 058%，硫酸锰0. 025%，琼脂1. 5-2%, ρΗ6· 5。 121°C高压灭菌20分钟。乳酸链球菌增殖培养条件30°C培养48-7池。嗜酸乳杆菌的培养基葡萄糖2%，蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母膏0. 5%，磷酸氢二钾0. 2%，乙酸钠0. 5%，柠檬酸铵0. 2%，硫酸镁0. 058%，硫酸锰0. 025%，琼脂1. 5-2%, ρΗ6· 5。 121°C高压灭菌20分钟。嗜酸乳杆菌增殖培养条件37°C培养48-7池。枯草芽孢杆菌的培养基蛋白胨10g，琼脂20g，氯化钠5g，肉浸粉10g，水加至 IOOOmL, ρΗ7· 2。121°C高压灭菌20分钟。枯草芽孢杆菌增殖培养条件30°C培养48-72h02)复合微生物的发酵物将上述分别增殖培养的产朊假丝酵母、乳酸链球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌按体积比1 :1:1: 1混合，而后将混合后菌种按照重量百分比 4%接种于液体发酵培养基中，在30°C下，发酵培养70h，发酵物pH值为4. 5-7. 5，每毫升培养基中的有益菌总量达到30亿以上，其中液体发酵培养基为葡萄糖2%，蛋白胨1%，牛肉膏 1%，酵母膏0. 5%，余量为蒸馏水，然后将发酵产物分别与慢生大豆根瘤菌、生脂固氮螺菌、沼泽红假单孢菌和巨大芽孢杆菌混合，发酵产物占60%、慢生大豆根瘤菌占10%、生脂固氮螺菌占10%、沼泽红假单孢菌占10%和巨大芽孢杆菌占10%，混合后得到复合微生物的发酵物。
3)喷施剂将上述所得复合微生物的发酵物加水按比例稀释即得到喷施剂。上述菌株均购自中国农业微生物菌种保藏中心，其中产朊假丝酵母于中国农业微生物菌种保藏中心编号为ACCC20060 ；乳酸链球菌于中国农业微生物菌种保藏中心编号为 ACCC10653 ；嗜酸乳杆菌于中国工业微生物菌种保藏中心编号为CICC6005 ；枯草芽孢杆菌于中国工业微生物菌种保藏中心编号为CICC20037。将上述实施例所得复合微生物消毒剂对番茄灰霉病病菌的抑菌效果见表1 (抑菌试验采用平板对峙法)。 表1复合微生物消毒剂对灰霉菌的抑制作用
权利要求
1.一种蔬菜用复合微生物消毒剂，其特征在于消毒剂为复合微生物的发酵物，所述复合微生物发酵物为产朊假丝酵母、乳酸链球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌，按体积比 1:1:1: 1比例混合，混合后菌种按照重量百分比3%-4%接种于液体发酵培养基中， 25-37°C发酵制成的，发酵物中pH值为4. 5-7. 5，菌总量达到10亿以上。
2.按权利要求1所述的蔬菜用复合微生物消毒剂，其特征在于所述复合微生物的发酵物加水稀释即得到喷施剂。
3.按权利要求1所述的蔬菜用复合微生物消毒剂，其特征在于所述复合微生物发酵物为1)复合菌种的增值培养将产朊假丝酵母、乳酸链球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌分别按重量百分比1%_4%的接种量分别在各自的培养基中进行增殖培养，直至对数生长期；2)复合微生物的发酵物将上述分别增值培养的菌种按体积比1 :1:1: 1比例混合，而后将混合后菌种按照重量百分比3%-4%接种于液体发酵培养基中，在25-37°C下，发酵培养48-7池，得到复合微生物的发酵物，发酵物中pH值为4. 5-7. 5，菌总量达到10亿以上。
4.按权利要求1所述的蔬菜用复合微生物消毒剂，其特征在于所述步骤2)中液体发酵培养基为葡萄糖2%，蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母膏0. 5%。
5.一种权利要求1所述的蔬菜用复合微生物消毒剂的制备方法，其特征在于1)复合菌种的增值培养将产朊假丝酵母、乳酸链球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌分别按重量百分比1%_4%的接种量分别在各自的培养基中进行增殖培养，直至对数生长期；2)复合微生物的发酵物将上述分别增值培养的菌种按体积比1:1:1: 1比例混合，而后将混合后菌种按照重量百分比3%-4%接种于液体发酵培养基中，在25-37°C下，发酵培养48-7池，得到复合微生物的发酵物，发酵物中pH值为4. 5-7. 5，菌总量达到10亿以上；3)消毒剂将上述所得复合微生物的发酵物加水稀释到1:1000至1:500即为消毒剂。
6.权利要求5所述的蔬菜用复合微生物消毒剂的制备方法，其特征在于所述步骤2) 中液体发酵培养基为葡萄糖2%，蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母膏0. 5%，余量为蒸馏水。
全文摘要
本发明涉及的是微生物领域，具体的说是一种蔬菜用复合微生物消毒剂。消毒剂为复合微生物的发酵物，复合微生物为产朊假丝酵母、乳酸链球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌，按体积比1∶1∶1∶1比例混合后接种于液体培养基中25-37℃发酵制成的。发酵物的pH值为4.5-7.5，菌总量达到10亿以上。本发明所筛选和配伍的菌群具有抑制蔬菜病原微生物生长的功能，同时清除病原微生物。
文档编号A01N63/04GK102150689SQ20101058853
公开日2011年8月17日 申请日期2010年12月15日 优先权日2010年12月15日
发明者单立秋, 吴鹏飞, 宋良敏, 张玥, 朱天勇, 洪秀贤, 燕萍, 王跃男, 白子金, 白志超, 白春生, 谢越, 郐永琳, 金石, 高林 申请人:沈阳科丰牧业科技有限公司