专利名称：一种花生专用复合微生物肥料及其制备方法
技术领域：
本发明涉及ー种花生专用肥料及其制备方法，特别涉及一种花生专用复合微生物肥料及其制备方法。
背景技术：
花生是我国重要的经济作物，其富含脂肪和蛋白质，即可食用，又可饲用；即是重要的エ业原料，又是大宗出口商品，用途广泛，在国民经济中有较高的地位。当前，我国花生平均产量在3000kg/平方千米左右俳徊，其增产潜カ较大，对其进行科学合理施肥，将是提高产量的重要途径。因此，根据花生需肥的特点，开发ー种养分全面，缓释性较好，能充分满足花生对养分的需求，最大限度发挥肥料效应，提高花生产量和品质的专用肥料尤为迫切。微生物肥料作为ー种重要的农业技术措施在发展高产、优质、高效农业中的作用越来越被人们所认识，这给它的开发、推广、应用提供了相当大的发展空间，特别是在发展有机农业、生产A级、AA级绿色食品中的不可替代性，充分体现了它潜在的魅力。但是，目前微生物肥料存在的问题是有效菌数不达标、保质期过短，从而应用效果不稳定。
发明内容
本发明的目的在于，克服生产中由于不合理施肥、偏施化学氮肥等原因造成产量降低、品质下降等不足，提供一种与花生养分需求特性相吻合、添加有微生物菌剂的专用月巴，既提高了花生产量、改善了花生品质，又減少了化学肥料的添加。在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量単位，所有的设备和原材料等均可从市场购得或是本行业常用的。本发明是采用如下技术方案实现的
本发明的花生专用复合微生物肥料，包括复合微生物菌液和有机无机复合肥，以重量百分比计硫酸铵10 — 15%，尿素15-25%，普钙10 — 20%，氯化钾5 — 15%，草炭30 — 40%，复合微生物菌液6 — 10%，硼砂O. 5-3%，钥酸铵O. 5-3%，合计为100%。所述的复合微生物菌液由侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)分别经发酵制得微生物菌液，再按照任意比例混合而成。优选的，侧孢芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌两者的混合重量比例为I 一 6 :1 — 6，更优选的为I :1。本发明采用新的侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus),具体被命名为“新侧芽孢杆菌I号菌株”，保藏号为CGMCC No. 5090。该菌种分离自高产农田，并经驯化，长期以来性状稳定。新侧芽孢杆菌I号菌株在2010年7月22日提交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏生物材料名称为新侧芽孢杆菌I号，保藏编号为CGMCCNo. 5090,生物学命名侧孢芽孢杆菌Bacillus laterosporus,保藏单位地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所。
该菌种的生物学特性为菌体杆状，属于芽孢杆菌属，其细胞大小为O. 15 O. 18X 215 510um，革兰氏染色阳性，可变为阴性，芽孢为椭圆形，侧生、中生或近中生，孢囊膨大，游离芽孢ー边比另ー边厚(独木舟形)。能利用多种氮源、碳源，生长温度20-55°C，最佳生长温度37°C，最适PH7. 2。在不良条件下，菌体转化产生芽孢，芽孢对不良环境抗逆性強，可耐受100°C高温20分钟和干燥等恶劣条件。本发明采用新的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，具体被命名为“新枯草芽孢杆菌I号菌株”，保藏号为CGMCC No. 5091。该菌种分离自高产农田，并经驯化，长期以来性状稳定。新枯草芽孢杆菌I号菌株在2010年7月22日提交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏生物材料名称为新枯草芽孢杆菌I号，保藏编号为CGMCCNo. 5091,生物学命名枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,保藏单位地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所。该菌种的生物学特性为菌体杆状，为生芽孢需氧菌，其芽孢能抗高热(在100°C下 30分钟仍能存活)，井能在枯草浸出液中生长，其芽孢为椭圆或长桶形，O. 6 O. 9X1. O 1.5μπι。于芽孢囊中央或近中央部形成，一般于腰间发芽。营养细胞杆状0.3 0.7X2 3 μ m,孤立或成短链,杆端半圆形。菌落为蔓延性,细皱或折迭,灰白，淡黄甚至黄色。在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。生长温度20-55°C，最佳生长温度37°C，最适PH7. I。在不良条件下，菌体转化产生芽孢，芽孢对不良环境抗逆性强，可耐受100°C高温15分钟和干燥等恶劣条件。更进一歩的，本发明花生专用复合微生物肥的配方为，以重量百分比计以重量百分比计硫酸铵11%，尿素20%，普钙13%，氯化钾10%，草炭36%，复合微生物菌液8%，硼砂1%，钥酸铵1%。在本发明中，所述复合微生物菌液由如下新的培养方法制备而成
1)将侧孢芽孢杆菌CGMCCNo. 5090或枯草芽孢杆菌CGMCC No. 5091菌株分别划线接入斜面培养基(新I培养基)，30— 38°C培养箱静置黑暗条件下培养36小时；
2)用无菌水冲洗斜面，形成菌悬液；
3)将I体积菌悬液接入20体积的新I液体培养基中，30—38°C有氧培养至菌体浓度为IO8个/ml数量级；
4)将步骤3)得到的菌悬液加入到5-10倍体积的新2培养基中，30—38°C有氧培养至菌体浓度为IO8个/ml数量级；
5)将步骤4)得到的菌悬液加入到50-100倍体积的新3培养基中，35-38°C有氧培养至菌体浓度为IO8个/ml数量级；
6)将步骤5)得到的菌悬液加入到5-10倍体积的新4培养基中，35-38°C培养有氧培养至菌体浓度为IO9个/ml数量级，停止发酵；然后按I :2 — 10的比例与草炭土混合，造粒，低温烘干，分别获得侧孢芽孢杆菌菌剂和枯草芽孢杆菌菌剂；
其中上述培养基为新I号培养基(斜面培养基):蛋白胨5g/L，氯化钠5g/L，牛肉膏5g/L,琼脂 I. 5%-2. 0%, PH 调至 6. 5-7. 8，
新I号液体培养基该培养基不含琼脂，其他成分和含量与新I培养基相同，PH调至6. 5-7. 8，新2号培养基淀粉5g/L，蔗糖lg/L，酵母浸出汁O. 2g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/L，硫酸氨lg/L，磷酸ニ氢钾O. 5g/L，硫酸镁O. 2g/L,氯化钠5g/L，PH调至6. 5-7. 8，
新3号培养基淀粉10g/L，蔗糖5g/L，酵母浸出汁O. lg/L,蛋白胨O. 5g/L，豆饼粉IOg/L，硫酸氨lg/L，磷酸ニ氢钾O. 5g/L，氯化钠5g/L，PH调至6. 5-7. 8，
新4号培养基淀粉10g/L，蔗糖2. 5g/L，酵母浸出汁O. lg/L，蛋白胨O. 5g/L，豆饼粉5g/L，硫酸氨lg/L，磷酸ニ氢钾O. 5g/L，氯化钠5g/L，PH调至6. 5-7. 8。将发酵获得的侧孢短芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌液以任意重量比进行混合得到复合微生物菌液，将该菌液吸附经干热灭菌后冷却的优质草炭粉(市售)得到复合微生物菌剂备用。优选的，侧孢芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌两者的混合重量比例为I 一 6 :1 — 6，更优选的为I :1。 再将其余干料分别进行粉碎、按比例混合，加入上述经发酵吸附制成的复合微生物菌剂，混匀并经低温烘干、造粒、装袋，制得本发明的花生专用复合微生物肥料。本发明花生专用肥料与现有的肥料相比所具有的积极效果在于
本发明花生专用复合微生物肥添加了新的微生物菌种，且采用新的培养发酵方法制备得到新的微生物菌剂，然后针对花生的生长特性及营养需求特性，再将其与复合肥按照ー定比例混合制备而成，试验表明，本发明的花生专用肥料可以降低成本、增加产量、提高品质，从而提高同类花生产品的市场竞争能力。本发明根据花生的养分吸收特性以及土壌有效养分状况，通过田间试验结果的统计分析，确定出最佳配方及配方比例。下面结合实施例对本发明进行具体描述，本发明也可通过其他不脱离其精神实质或必要特征的实施方案来实现。因此，下面实施方案，只是举例说明，并不是仅有的，所有在本发明范围内或等同本发明的范围内改变均被本发明包含。
具体实施例方式 实施例I:
一种花生专用复合微生物肥，其配方为，以重量百分比计硫酸铵11%，尿素20%，普钙13%，氯化钾10%，草炭36%，复合微生物菌液8%，硼砂I %，钥酸铵I %。所述的复合微生物菌液由侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus),保藏号为CGMCC No. 5090，和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，保藏号为 CGMCC No. 5091，分别经发酵制得微生物菌液，再按照I :1的重量比例混合后而成。侧孢芽孢杆菌菌液的制备エ艺如下
先对侧孢芽孢杆菌菌种进行活化，再用5ml无菌水冲洗斜面，形成菌悬液，菌悬液接入500ml三角瓶，该三角瓶含IOOml新I液体培养基，使用摇床培养18小吋，培养条件为37°C，180-200rpm,检测菌体浓度,在浓度达到108数量级,进行下ー步；
将500ml三角瓶中的IOOml菌液转接入2000ml三角瓶中，该三角瓶含700ml新2培养基，使用摇床培养20小吋，培养条件为37°C，180-200rpm ;检测菌体浓度，在浓度达到108数量级，进行下ー步；
将2000ml三角瓶中的菌液接入lm3发酵罐中，接入量为6升，该发酵罐中含有500L新3培养基，发酵条件为温度36-38°C，罐压O. 5kg/cm，通气量20m3/h，培养8小时；检测菌体浓度，在浓度达到108数量级，进行下一歩；
将lm3发酵罐中的菌液接入5m3发酵罐，接入量为500升，该发酵罐含有3m3新4培养基，发酵条件为温度36-38°C，罐压O. 5kg/cm，通气量120m3/h，培养15小时。检测菌体浓度，在浓度达到109数量级，停止发酵。枯草芽孢杆菌菌液的制备エ艺如下
先对枯草芽孢杆菌菌种进行活化，再用5ml无菌水冲洗斜面，形成菌悬液，菌悬液接入500ml三角瓶，该三角瓶含IOOml新I液体培养基，使用摇床培养18小吋，培养条件为37°C，180-200rpm,检测菌体浓度,在浓度达到108数量级,进行下ー步；· 将500ml三角瓶中的IOOml菌液转接入2000ml三角瓶中，该三角瓶含700ml新2培养基，使用摇床培养20小时，培养条件为37°C，180-200rpm ;检测菌体浓度，在浓度达到108数量级，进行下ー步；
将2000ml三角瓶中的菌液接入lm3发酵罐中，接入量为6升，该发酵罐中含有500L新3培养基，发酵条件为温度36-38°C，罐压O. 5kg/cm,通气量20m3/h，培养8小时；检测菌体浓度，在浓度达到108数量级，进行下一歩；
将lm3发酵罐中的菌液接入5m3发酵罐，接入量为500升，该发酵罐含有3m3新4培养基，发酵条件为 温度36-38°C，罐压O. 5kg/cm，通气量120m3/h，培养15小时。检测菌体浓度，在浓度达到109数量级，停止发酵。将上述发酵获得的侧孢短芽孢杆菌液和枯草芽孢杆菌液以1:1重量比进行混合得到复合微生物菌液，将该菌液吸附经干热灭菌后冷却的优质草炭粉(市售)得到复合微生物菌剂备用。再将其余干料粉碎、混合，加入上述经发酵吸附制成的复合微生物菌剂，混匀并经低温烘干、造粒、装袋，制得本发明的花生专用复合微生物肥料。实施例2
一种花生专用复合微生物肥，其配方为，以重量百分比计硫酸铵10%，尿素25%，普钙10%，氯化钾15%，草炭30%，复合微生物菌液6%，硼砂2 %，钥酸铵2 %。所述的复合微生物菌液由侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus),保藏号为CGMCC No. 5090，和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，保藏号为 CGMCC No. 5091，分别经发酵制得微生物菌液，再按照I '2的重量比例混合后而成。侧孢芽孢杆菌菌液和枯草芽孢杆菌液的制备エ艺同实施例I。将上述发酵获得的侧孢短芽孢杆菌液和枯草芽孢杆菌液以I :2的重量比进行混合得到复合微生物菌液，将该菌液吸附经干热灭菌后冷却的优质草炭粉(市售)得到复合微生物囷剂备用。再将其余干料粉碎、混合，加入上述经发酵吸附制成的复合微生物菌剂，混匀并经低温烘干、造粒、装袋，制得本发明的花生专用复合微生物肥料。实施例3
一种花生专用复合微生物肥，其配方为，以重量百分比计硫酸铵15%，尿素15%，普钙20%，氯化钾5%，草炭31%，复合微生物菌液10%，硼砂3 %，钥酸铵I %。所述的复合微生物菌液由侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus),保藏号为CGMCC No. 5090，和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，保藏号为 CGMCC No. 5091，分别经发酵制得微生物菌液，再按照2 1的重量比例混合后而成。侧孢芽孢杆菌菌液和枯草芽孢杆菌液的制备エ艺同实施例I。
将上述发酵获得的侧孢短芽孢杆菌液和枯草芽孢杆菌液以2 1的重量比进行混合得到复合微生物菌液，将该菌液吸附经干热灭菌后冷却的优质草炭粉(市售)得到复合微生物囷剂备用。再将其余干料粉碎、混合，加入上述经发酵吸附制成的复合微生物菌剂，混匀并经低温烘干、造粒、装袋，制得本发明的花生专用复合微生物肥料。本发明“花生专用复合微生物肥料”在花生上的肥效试验
1.试验材料与方法 1.1材料
本试验于2008年6月2日整地，肥料底施，6月3日播种。生长期间浇水2次，防治病虫害I次。收获时小区单收计产，随机选取Im2植株作室内考种，管理措施同当地丰产大田标准。
2试验结果与分析
2.I施“花生专用复合微生物肥料”对花生成产因素的影响.
施“花生专用复合微生物肥料”改善了花生成产因素。由表I可以看出施用“花生专用复合微生物肥料”的花生株粒数和千粒重均比其它处理高。表I花生产量因素调查表
处理亩株数(株/亩) 株粒数千粒重
19600 : 103.2201.3
229600 : 109.8218.0
3[9600106.8 Γ 206.0 :
2.2施用“花生专用复合微生物肥料”对花生产量的影响 小区全区产量结果表
项目小B产量(tg)增产方差
处理Γ7ΤΓ Π—:^ 分析3 小结
3.I花生施用专用复合微生物肥能増加株粒数和千粒重，从而显著增加产量。
权利要求
1.一种花生专用复合微生物肥料，包括复合微生物菌液和有机无机复合肥，其特征在于以重量百分比计组成为硫酸铵10 - 15%，尿素15-25%，普钙10 — 20%，氯化钾5 — 15%，草炭30 - 40%,复合微生物菌液6 - 10%,硼砂O. 5-3%,钥酸铵O. 5-3%，合计为100%;所述的复合微生物菌液由侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)、保藏号为CGMCC No. 5090和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、保藏号为CGMCC No. 5091分别经发酵制得微生物菌液，再按照任意比例混合而成。
2.如权利要求I所述的花生专用复合微生物肥料，以重量百分比计硫酸铵11%，尿素20%，普钙13%，氯化钾10%，草炭36%，复合微生物菌液8%，硼砂I %，钥酸铵I %。
3.如权利要求I或2所述的花生专用复合微生物肥料，其中复合微生物菌液侧孢芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌两者的混合重量比例为I 一 6 :1 — 6。
4.如权利要求3所述的花生专用复合微生物肥料，其中复合微生物菌液侧孢芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌两者的混合重量比例为I :1。
5.如权利要求I一 4所述的花生专用复合微生物肥料的制备方法，其特征在于包括如下步骤 第一步制备微生物菌液 1)将侧孢芽孢杆菌CGMCCNo. 5090或枯草芽孢杆菌CGMCC No. 5091菌株分别划线接入斜面培养基(新I培养基)，30— 38°C培养箱静置黑暗条件下培养36小时； 2)用无菌水冲洗斜面，形成菌悬液； 3)将I体积菌悬液接入20体积的新I液体培养基中，30—38°C有氧培养至菌体浓度为IO8个/ml数量级； 4)将步骤3)得到的菌悬液加入到5-10倍体积的新2培养基中，30—38°C有氧培养至菌体浓度为IO8个/ml数量级； 5)将步骤4)得到的菌悬液加入到50-100倍体积的新3培养基中，35-38°C有氧培养至菌体浓度为IO8个/ml数量级； 6)将步骤5)得到的菌悬液加入到5-10倍体积的新4培养基中，35-38°C培养有氧培养至菌体浓度为IO9个/ml数量级，停止发酵； 其中上述培养基为新I号培养基(斜面培养基):蛋白胨5g/L，氯化钠5g/L，牛肉膏5g/L,琼脂 I. 5%-2. 0%, PH 调至 6. 5-7. 8， 新I号液体培养基该培养基不含琼脂，其他成分和含量与新I培养基相同，PH调至.6.5-7. 8， 新2号培养基淀粉5g/L，蔗糖lg/L，酵母浸出汁O. 2g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/L，硫酸氨lg/L，磷酸二氢钾O. 5g/L，硫酸镁O. 2g/L,氯化钠5g/L，PH调至6. 5-7. 8， 新3号培养基淀粉10g/L，蔗糖5g/L，酵母浸出汁O. lg/L,蛋白胨O. 5g/L，豆饼粉IOg/L，硫酸氨lg/L，磷酸二氢钾O. 5g/L，氯化钠5g/L，PH调至6. 5-7. 8， 新4号培养基淀粉10g/L，蔗糖2. 5g/L，酵母浸出汁O. lg/L，蛋白胨O. 5g/L，豆饼粉.5g/L,硫酸氨lg/L,磷酸二氢钾O. 5g/L，氯化钠5g/L，PH调至6. 5-7. 8 ； 第二步将发酵获得的侧孢短芽孢杆菌液和枯草芽孢杆菌液以所述重量比进行混合得到复合微生物菌液，将该菌液吸附经干热灭菌后冷却的优质草炭粉(市售)得到复合微生物菌剂备用；第三 步再将其余干料分别进行粉碎、按比例混合，加入第二步经发酵吸附制成的复合微生物菌剂，混匀并经低温烘干、造粒、装袋即得。
全文摘要
本发明是一种花生专用复合微生物肥料及其制备方法。包括复合微生物菌液和有机无机复合肥，以重量百分比计硫酸铵10－15%，尿素15-25%，普钙10－20%，氯化钾5－15%，草炭30－40%，复合微生物菌液6－10%，硼砂0.5-3％，钼酸铵0.5-3％，合计为100％。所述的复合微生物菌液由新的侧孢芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌菌液混合而成。该专用肥可解决现有用于花生的肥料存在的化学肥料施用过量、针对性差、养分不均衡、现有微生物肥料施用效果不稳定等问题，施用后可明显增产增收。
文档编号C12R1/07GK102838398SQ20111026043
公开日2012年12月26日 申请日期2011年9月5日 优先权日2011年9月5日
发明者麻林涛, 王莉 申请人:麻林涛, 王莉