一种马铃薯组培苗的接种方法
【专利摘要】本发明公开了一种马铃薯组培苗的接种方法，其特征在于：严格控制马铃薯脱毒组培苗生长的影响因子，并对接种器械、培养室、接种室严格消毒灭菌后采用整组切段、分散组培再切段的接种方法，实现马铃薯脱毒组培繁育高速度、短周期、低污染、简操作、低成本的目的。
【专利说明】一种马铃薯组培苗的接种方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物栽培【技术领域】，尤其涉及一种马铃薯组培苗的接种方法。
【背景技术】
[0002]随着农业技术的不断发展，马铃薯脱毒技术已广泛应用。所谓脱毒即是:切取马铃薯幼芽茎尖生长锥0.2-0.3毫米，进行组织培养，育成脱毒试管苗，进而结出无病毒的块茎，它已成为防治马铃薯病毒，提高马铃薯产量最好的方法。把茎尖脱毒、组织培养、无病毒种薯繁育结合起来，形成一个完整的脱毒快繁体系，才能真正实现马铃薯繁育速度快、质量好的目的。
[0003]然而，现有脱毒组培技术中，组织培养投资大、经济效益低，严重影响了脱毒组培技术的推广，主要表现为组培用培养基价格昂贵，组培速度缓慢，组培苗接种时病毒污染大，操作步骤复杂，费时费力。
[0004]CN10182221A专利号文件公开了马铃薯茎节段直接培育微型种薯的育种方法，提供了一种马铃薯脱毒组培苗接种技术，该方法是将组培脱毒苗切成3~5个带有叶柄腋芽的小段，然后在无菌超净的工作台中，将马铃薯无毒苗切断均匀接种到诱导营养基中。该方法提高了组培速度，但 操作时采用单个切段技术，存在费时费力、操作复杂、易染病毒、周期长的缺陷。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于:采用整组切段、分散组培再切段的接种方法，实现马铃薯脱毒组培繁育过程中切段时，病毒感染率更低、繁育速度更快、操作简单、省时省力的目的。
[0006]为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是:
[0007]本发明结合马铃薯种薯生长过程中根茎发育的特性，根据现代生物学技术，在控制温度、湿度、光照、PH值等各项影响因子条件下，以脱毒组培苗为母体，采用克隆技术进行无性繁殖，达到马铃薯脱毒繁育速度快、品质高的要求，具体方法如下:
[0008]1、消毒灭菌
[0009](I)培养基的消毒灭菌:本发明脱毒苗组培用的培养基为液体培养基，将配制好的营养基在高温高压下消毒灭菌20分钟，其中，温度为121 °C，气压为1.11 一 1.14kpa ；
[0010](2)接种器械消毒灭菌:对接种室、培养室、配制室等采用紫外灯照射和用0.1%苯扎溴铵拖洗地板，不定时地用甲醅和高锰酸钾进行薰蒸；接种前用75%的酒精浸泡剪刀、镊子以及培养皿；浸泡后的剪刀、镊子再进行高温处理或在酒精灯上灼烧方可进行接种，培养皿则进行高温处理或用沾有75%酒精的脱脂棉反复擦拭；牛皮纸用75%的酒精浸泡；用脱脂棉沾75%酒精反复擦手、工作台。
[0011]2、马铃薯脱毒苗组培及接种影响因素的控制
[0012](I)温度控制:培养室和接种室内，昼温控制20~27 °C，夜温宜偏低，以减少呼吸作用的物质消耗，温度控制为5~8°C。[0013](2)湿度控制:针对不同地区的气候特点，合理控制空气相对湿度，一般控制湿度为50~70%，湿度过高，引起污染增加的概率增大，不利于脱毒组培苗的繁育。
[0014](3)、光照控制:每天尽可能利用最长时间的自然光照，光照强度为2000~30001x ;若遇阴天，则利用灯光照射，灯光照射可适当延长时间，最宜为12~15小时。
[0015](4)培养基pH值控制:严格控制培养基的pH值为5.8。
[0016]3、接种:在马铃薯脱毒苗接种的时候，把组培苗从培养瓶中取出，放在经所述的高温灭菌的培养皿里面的牛皮纸上，然后用手术刀片分段切割接种。其特征在于:首次接种时，培养瓶中为一株脱毒组培苗，从培养瓶中取出后切割成3~4个带有叶柄腋芽的节段，然后接种到原培养瓶中，培养15~20天；组培苗可接种的时候，将培养瓶中的组培苗全部取出，每个培养瓶中的组培苗分为一组，采用整体切割的方法，将组培苗切割成2~3个带有叶柄腋芽的节段，然后分组接种到备用的培养瓶中组培，按照所述的方法循环接种、组培，经本发明接种、组培的马铃薯脱毒苗生根速度快，根系发达、根茎健壮，生命力强。
[0017]与现有马铃薯接种技术相比，本发明具有以下有益效果:
[0018]1、采用整组切割方法，接种速度快、病毒污染几率低；
[0019]2、采用整组切段、分散组培再切段的接种方法，操作简单、生长周期短、繁育速度快。 【具体实施方式】
[0020]为了说明本发明的技术方案，下面结合实例进一步说明。
[0021]实施例1
[0022]选择培养15天苗龄的强壮组培脱毒苗10株，然后采用本发明技术方案进行接种。
[0023]1、消毒灭菌
[0024](I)培养基的消毒灭菌:本发明脱毒苗组培用的培养基为液体培养基，将配制好的营养基在高温高压下消毒灭菌20分钟，其中，温度为121 °C，气压为1.11 一 1.14kpa ；
[0025](2)接种器械消毒灭菌:对接种室、培养室、配制室等采用紫外灯照射和用0.1%苯扎溴铵拖洗地板，不定时地用甲醅和高锰酸钾进行薰蒸；接种前用75%的酒精浸泡剪刀、镊子以及培养皿；浸泡后的剪刀、镊子再进行高温处理或在酒精灯上灼烧方可进行接种，培养皿则进行高温处理或用沾有75%酒精的脱脂棉反复擦拭；牛皮纸用75%的酒精浸泡；用脱脂棉沾75%酒精反复擦手、工作台。
[0026]2、温度控制:培养室和接种室内，昼温控制20~27°C，夜温宜偏低，以减少呼吸作用的物质消耗，温度控制为5~8°C。
[0027]3、湿度控制:针对不同地区的气候特点，合理控制空气相对湿度，一般控制湿度为50~70%，湿度过高，引起污染增加的概率增大，不利于脱毒组培苗的繁育。
[0028]4、光照控制:每天尽可能利用最长时间的自然光照，光照强度为2000~30001x ；若遇阴天，则利用灯光照射，灯光照射可适当延长时间，最宜为12~15小时。
[0029]5、培养基pH值控制:严格控制培养基的pH值为5.8。
[0030]6、接种:将选择的10株马铃薯组培脱毒苗用镊子从培养瓶中取出，注意防止伤苗，逐个放在经所述的高温灭菌的培养皿里面的牛皮纸上，然后用手术刀片分段切割成3个带有叶柄腋芽的节段，所述的每株母本组培脱毒苗切割得到的3个节段接种到原培养瓶中，培养15天，即可收获30株子一代组培脱毒苗；再将培养瓶中的组培苗全部取出，每个培养瓶中的3株子一代组培苗分为一组，整理后采用整体切割的方法，将组培苗切割成3个带有叶柄腋芽的节段，即可得到90株子二代组培脱毒苗节段，然后分组接种到备用的培养瓶中培养，每个培养瓶中均匀接种3株子二代马铃薯组培脱毒苗节段，培养15天，即可收获90株子二代组培脱毒苗；再将培养瓶中的组培苗全部取出，每个培养瓶中的3株子二代组培苗分为一组，整理后采用整体切割的方法，将组培苗切割成3个带有叶柄腋芽的节段，即可得到270株子三代组培脱毒苗节段，然后分组接种到备用的培养瓶中培养，培养15天后，可收获270株组培脱毒苗。
[0031]实施例2
[0032]选择培养15天苗龄的强壮组培脱毒苗10株，然后采用本发明技术方案进行接种。
[0033]1、消毒灭菌
[0034](I)培养基的消毒灭菌:本发明脱毒苗组培用的培养基为液体培养基，将配制好的营养基在高温高压下消毒灭菌20分钟，其中，温度为121 °C，气压为1.11 一 1.14kpa ；
[0035](2)接种器械消毒灭菌:对接种室、培养室、配制室等采用紫外灯照射和用0.1%苯扎溴铵拖洗地板，不定时地用甲醅和高锰酸钾进行薰蒸；接种前用75%的酒精浸泡剪刀、镊子以及培养皿；浸泡后的剪刀、镊子再进行高温处理或在酒精灯上灼烧方可进行接种，培养皿则进行高温处理或用沾有75%酒精的脱脂棉反复擦拭；牛皮纸用75%的酒精浸泡；用脱脂棉沾75%酒精反复擦手、工作台。
[0036]2、温度控制:培养室和接种室内，昼温控制20~27°C，夜温宜偏低，以减少呼吸作用的物质消耗，温度控制为5~8°C。
`[0037]3、湿度控制:针对不同地区的气候特点，合理控制空气相对湿度，一般控制湿度为50~70%，湿度过高，引起污染增加的概率增大，不利于脱毒组培苗的繁育。
[0038]4、光照控制:每天尽可能利用最长时间的自然光照，光照强度为2000~30001x ；若遇阴天，则利用灯光照射，灯光照射可适当延长时间，最宜为12~15小时。
[0039]5、培养基pH值控制:严格控制培养基的pH值为5.8。
[0040]6、接种:将选择的10株马铃薯组培脱毒苗用镊子从培养瓶中取出，注意防止伤苗，逐个放在经所述的高温灭菌的培养皿里面的牛皮纸上，然后用手术刀片分段切割成4个带有叶柄腋芽的节段，所述的每株母本组培脱毒苗切割得到的4个节段接种到原培养瓶中，培养15天，即可收获40株子一代组培脱毒苗；再将培养瓶中的组培苗全部取出，每个培养瓶中的4株子一代组培苗分为一组，整理后采用整体切割的方法，将组培苗切割成4个带有叶柄腋芽的节段，即可得到160株子二代组培脱毒苗节段，然后分组接种到备用的培养瓶中培养，每个培养瓶中均匀接种4株子二代马铃薯组培脱毒苗节段，培养15天，即可收获160株子二代组培脱毒苗；再将培养瓶中的组培苗全部取出，每个培养瓶中的4株子二代组培苗分为一组，整理后采用整体切割的方法，将组培苗切割成3个带有叶柄腋芽的节段，即可得到640株子三代组培脱毒苗节段，然后分组接种到备用的培养瓶中培养，培养15天后，可收获640株组培脱毒苗。
【权利要求】
1.一种马铃薯组培苗的接种方法，其特征是采用整组切段、分散组培再切段的接种方法，具体步骤为:(I)根据马铃薯脱毒苗的组培条件，严格控制培养室和接种室的温度、湿度、光照、PH值；(2)接种器械和培养基消毒灭菌处理；(3)分段切割接种。
2.如权利要求1所述的一种马铃薯组培苗的接种方法，其特征在于:所述的培养室和接种室的温度控制为:昼温20~27V’夜温5~8°C。
3.如权利要求1所述的一种马铃薯组培苗的接种方法，其特征在于:所述的培养室和接种室的湿度控制为:针对不同地区的气候特点，控制相对湿度为50~70%。
4.如权利要求1所述的一种马铃薯组培苗的接种方法，其特征在于:所述的培养室和接种室的光照控制为:利用最长时间的自然光照，光照强度为2000~30001x ;若遇阴天，则利用灯光照射，灯光照射时间控制为12~15小时。
5.一种马铃薯组培苗的接种方法，其特征在于:在马铃薯脱毒苗接种的时候，把组培苗从培养瓶中取出，放在经所述的高温灭菌的培养皿里面的牛皮纸上，然后用手术刀片分段切割接种，具体方法是:首次接种时，培养瓶中为一株脱毒组培苗，从培养瓶中取出后切割成3~4个带有叶柄腋芽的节段，然后接种到原培养瓶中，培养15~20天；组培苗可接种的时候，将培养瓶中的组培苗全部取出，每个培养瓶中的组培苗分为一组，采用整体切割的方法，将组培苗切割成2~3个带有叶柄腋芽的节段，然后分组接种到备用的培养瓶中组培，按照所述的方法循环接种、组培。
【文档编号】A01H4/00GK103548684SQ201310530396
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】李恺, 屠建章, 张才强, 火有仁, 吴成秀 申请人:定西市凯凯生态园植物快繁有限公司