专利名称：一种马铃薯组培苗分化培养方法
技术领域：
本发明涉及到一种马铃薯组培苗分化培养方法，属于植物的栽培方法技术领域，尤其适用于马铃薯组培分化苗的工厂化快速繁殖。
背景技术：
马铃薯脱除病毒后可以有效的提高产量和改善品质，脱毒种薯越来越受广大马铃薯栽培者的欢迎。但是由于马铃薯脱毒原原种薯必须通过组织培养方法才能得到，而组织培养技术要求较高的投入，所以脱毒马铃薯原原种薯生产成本过高。这就造成栽培者无法承受过高的种薯价格或原原种薯生产者由于利润过低无法维持生产，造成原原种薯在我国大范围应用困难或应用的原原种薯质量低劣，这是我国脱毒马铃薯生产应用中的一大难题。
常规脱毒马铃薯原原种薯生产方法是通过茎尖培养获得脱毒组培苗，然后接种在装于玻璃容器中用于提供营养及起支撑作用的培养基上，容器密封后在人为的环境中通过多次多代分化培养繁殖培养多株无病毒具有相同遗传特性的完整植株，扦插后用于微型薯生产。培养过程分为脱毒初培养和分化培养和管外扦插及微型薯培养四个阶段。常规培养的分化培养是剪取已脱毒的马铃薯组培苗茎尖或茎段，茎段长0.5-1cm带1-2个芽，接种在装于培养容器中的培养基，每个容器内接种10-15个茎段，置于培养基中进行多次多代培养，即培养20天左右待长到5-10后继续重复进行上述培养。常规分化苗培养方法中培养基占培养成本的40％左右，而且培养物易污染，单位面积出苗率低，组培苗的成本高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种降低脱毒马铃薯组培苗生产成本的无基质与常规基质交替多次多代培养技术。
本发明的技术方案是这样实现的这种马铃薯组培苗分化培养方法包括将分化苗交替置于无基质培养条件和培养基质培养条件下多次多代分化培养。
所述的马铃薯组培苗分化培养方法中所述的无基质培养条件包括将分化苗置于含有水份的容器内，放入温度为25±2℃，光照2000-3000Lux，光照时间为14-16小时的环境中培养，经过18-20天的培养，完成一代分化，转入培养基质培养。
所述的马铃薯组培苗分化培养方法还包括将培养2代以上的脱毒马铃薯组培分化苗剪成长1-1.5cm，带1-3个芽的茎段，经过在含有1.5倍的培养基、5％蔗糖和5ppmIAA、PH5.8的处理液中浸泡2个小时后，放入容器中，每瓶内放20-30个茎段，容器内铺滤纸，经高压高温消毒，接种前向滤纸上滴几滴消毒的蒸馏水，使滤纸完全润湿；接种后用消毒的塑料膜封口，放入温度为25±2℃，光照2000-3000Lux，光照时间为14-16小时的环境中培养，培养20天左右后待苗高5-10cm时转入培养基质中继续进行分化培养，长到5-10cm左右时再进行无基质培养。
所述的马铃薯组培苗分化培养方法中所述的培养基质的组成包括大量元素NH4NO31650mg/l、KNO31900mg/l、CaCl2·4H2O 440mg/l、MgSO4·7H2O 370mg/l、KH2PO4170mg/l其中一种或几种；微量元素KI 0.83mg/l、H3BO36.2mg/l、MnSO4·4H2O 22.3mg/l、ZnSO4·4H2O 8.6mg/l、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/l、CuSO4·5H2O 0.025mg/l、CoCl2·6H2O 0.025mg/l、FeSO4·7H2O 37.3mg/l、其中一种或几种；络合剂Na2·EDTA·2H2O 27.8mg/l；有机成分肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸吡哆醇0.5mg/l、盐酸硫胺素0.1mg/l、甘氨酸2mg/l其中一种或几种；糖30g/l；琼脂4.8g/L，水余量。
具体实施例方式
下面结合脱毒马铃薯组培苗生产的实例对本发明作进一步的说明1.取250ml小型罐头瓶作为培养容器，使用前冼净，内铺一张滤纸封口后高温高压消毒后备用；2.茎段处理液的准备配制含有1.5倍常规培养常规培养基大量、微量营养、5％蔗糖、5ppmIAA，PH5.8的溶液，装入广口瓶中，封口后高温高压消毒，晾凉后备用；3.茎段的准备选取分化培养两代以上，生长20-30天左右的分化苗，在超净台上从试管中取出，将其剪成长1-1.5cm带1-2个芽的茎段，迅速放入已消毒的处理液中，浸泡2个小时；4.茎段的接种接种前先用滴管滴几滴消毒的蒸馏水于容器的滤纸上，使滤纸完全润湿，然后从处理液中取出20-30个茎段放入容器中，用镊子将茎段拨散，塑料膜封口后，放入培养室中进行培养。5.培养过程中的管理培养环境要求温度为25±2℃，光照2000-3000Lux，光照时间为14-16小时；6.无基质分化苗的转接培养20天左右后，苗高在5-10cm，剪切成长0.5-1带1-2个芽的茎段，转接到常规培养基(大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、3％蔗糖、4.8g/L琼脂)上，每瓶内接种10-15个茎段，用消毒的塑料膜封口后在温度为25±2℃，光照1500-2000Lux，光照时间为14-16小时的环境中继续进行分化苗的培养，培养20左右后待苗高5-10cm时，再进行无基质培养，形成无基质培养与常规培养相间进行的培养过程。
本发明与现有马铃薯组培方法相比具有的优点是省去近二分之一的培养基，在阶段分化过程仅用一张滤纸来提供水分，大幅度地降低了组培苗生产成本。
本发明所用容器为任何透明、可密封、耐高温消毒容器。使用前洗净内铺一张滤纸，封口后经高温高压消毒。茎段处理液中应包括矿质营养、碳水化合物、激素等物质，培养前茎段在其中长时间浸泡经便吸收充分的营养，用于提供茎段生长过程中所需的大部分营养。茎段应是经过两代以上分化培养生长20-30天左右的分化苗，在超净台从试管中取出，剪成长1-1.5cm带1-2个芽的茎段，在处理液浸泡两小时后放入试管中，接种前向试管内滤纸上滴几滴消毒的蒸馏水，接种后迅速用塑料膜封口；放入温度为25±2℃，光照2000-3000Lux，光照时间为14-16小时的环境中培养，培养20-30天左右，苗高长到5-10cm时，转接到常规培养基中进行培养，长到一定高度后再进行无基质培养；形成无基质培养与常规培养基培养交替进行的多次多代分化培养，工厂化生产过程。附培养基配方大量元素NH4NO31650mg/l，KNO31900mg/l，CaCl2·4H2O 440mg/l，MgSO4·7H2O 370mg/l，KH2PO4170mg/l；微量元素KI 0.83mg/l，H3BO36.2mg/l，MnSO4·4H2O 22.3mg/l，ZnSO4·4H2O 8.6mg/l，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/l，CuSO4·5H2O 0.025mg/l，CoCl2·6H2O 0.025mg/l；铁盐FeSO4·7H2O 37.3mg/l，Na2·EDTA·2H2O 27.8mg/l有机成分肌醇100mg/l，烟酸0.5mg/l，盐酸吡哆醇0.5mg/l盐酸硫胺素0.1mg/l，甘氨酸2mg/l；糖30g/l；琼脂4.8g/l，水余量。
权利要求
1.一种马铃薯组培苗分化培养方法，其特征包括将分化苗交替置于无基质培养条件和培养基质培养条件下多次多代分化培养。
2.根据权利要求1所述的马铃薯组培苗分化培养方法，其特征在于所述的无基质培养条件包括将分化苗置于含有水份的容器内，放入温度为25±2℃，光照2000-3000Lux，光照时间为14-16小时的环境中培养，经过18-20天的培养，完成一代分化，转入培养基质培养。
3.根据权利要求1或2所述的马铃薯组培苗分化培养方法，其特征包括将培养2代以上的脱毒马铃薯组培分化苗剪成长1-1.5cm，带1-3个芽的茎段，经过在含有1.5倍的培养基、5％蔗糖和5ppmIAA、PH5.8的处理液中浸泡2个小时后，放入容器中，每瓶内放20-30个茎段，容器内铺滤纸，经高压高温消毒，接种前向滤纸上滴几滴消毒的蒸馏水，使滤纸完全润湿；接种后用消毒的塑料膜封口，放入温度为25±2℃，光照2000-3000Lux，光照时间为14-16小时的环境中培养，培养20天左右后待苗高5-10cm时转入常规基质中继续进行分化培养，长到5-10cm左右时再进行无基质培养。
4.根据权利要求1或2或3所述的马铃薯组培苗分化培养方法，其特征是所述培养基的组成包括大量元素NH4NO31650mg/l、KNO31900mg/l、CaCl2·4H2O 440mg/l、MgSO4·7H2O 370mg/l、KH2PO4170mg/l其中一种或几种；微量元素KI 0.83mg/l、H3BO36.2mg/l、MnSO4·4H2O 22.3mg/l、ZnSO4·4H2O 8.6mg/l、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/l、CuSO4·5H2O 0.025mg/l、CoCl2·6H2O 0.025mg/l、FeSO4·7H2O 37.3mg/l、其中一种或几种；络合剂Na2·EDTA·2H2O 27.8mg/l；有机成分肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸吡哆醇0.5mg/l、盐酸硫胺素0.1mg/l、甘氨酸2mg/l其中一种或几种；糖30g/l；琼脂4.8g/L，水余量。
全文摘要
本发明提供一种降低脱毒马铃薯组培苗生产成本的无基质与培养基质交替多次多代培养技术。这种马铃薯组培苗分化培养方法包括将分化苗交替置于无基质培养条件和培养基质培养条件下多次多代分化培养。所述的无基质培养条件包括将分化苗置于含有水份的容器内,放入温度为25±2℃,光照2000－3000Lux,光照时间为14－16小时的环境中培养,经过18－20天的培养,完成一代分化,转入培养基质培养。本发明与现有马铃薯组培方法相比具有的优点是:省去近二分之一的培养基,在阶段分化过程中仅用一张滤纸来提供水分,大幅度地降低了组培苗生产成本。
文档编号A01H4/00GK1348685SQ0114027
公开日2002年5月15日 申请日期2001年12月11日 优先权日2001年12月11日
发明者冯学赞, 安忠民, 王静, 焦顺兴 申请人:中国科学院石家庄农业现代化研究所