无病毒吊瓜组培苗的培养方法
【专利摘要】本发明提供了一种无病毒吊瓜组培苗的培养方法，属于农业种植【技术领域】。解决了现有技术所存在的吊瓜组培苗未经过脱病毒处理，移植到田间后容易受病毒侵染的技术问题。它包括获得吊瓜组培苗、将吊瓜组培苗置于光照培养箱中变温培养8-12天、培养完成后取茎尖接种培养、转接种培养、得到脱病毒的植株增殖步骤。本发明获得了无病毒的吊瓜组培苗，该组培苗移植到田间后不易受病毒侵染，一致性好，组培苗生长旺盛、产量高，确保了吊瓜籽的产量和质量。
【专利说明】无病毒吊瓜组培苗的培养方法
【技术领域】
[0001]本发明属于农业种植【技术领域】，涉及一种无病毒吊瓜组培苗的培养方法。
【背景技术】
[0002]吊瓜(Fructus Trichosanthis Kirilowii)是被子植物门(Angiospermae)、双子叶纲(Dicotyledones)、葫芦科(Cucurbitaceae)、瓜萎属的多年生草本攀援植物，我国东部和长江及黄河流域等地均可栽种。吊瓜果实为白色与浅绿或深绿相间花纹，成熟后呈桔红色。吊瓜食用性开发主要集中在吊瓜籽上。吊瓜籽占吊瓜果实净重三分之一以上，一般情况下吊瓜果实中含种子75~210粒，亩产瓜子75~150公斤。现代医药学研究证明:吊瓜籽中脂肪酸占36.2%,其中65%为不饱和脂肪酸，蛋白质占5.46%，并含17种以上的氨基酸，经常食用具有保健作用。吊瓜籽炒熟后味道润绵、脆香特异、其外观褐色艳丽、籽仁饱满，被誉为“瓜子之王”。
[0003]食用吊瓜雌雄异株，目前主流的繁殖法有籽播苗繁殖法和生块根切断繁殖法两种，用籽播苗繁殖，繁殖率低后代分离严重，一致性差，不结果的雄株占总苗的70%以上，育苗成本高，且病毒病发病几率高(种传病毒)；用块根切断繁殖，由于受块根数量的限制，繁殖效率低，且费工费时，直接影响播种面积的扩大及优良品种的推广。人们经过多年的研究后，开发了吊瓜种苗的无性繁殖技术，该技术可以达到快速繁殖的目的，如中国发明专利公开了一种吊瓜组培苗育苗方法[申请号:200610161470.1]，但用该方法得到的吊瓜组培苗未进行脱病毒处理，组培苗中会存在病毒，目前关于吊瓜病毒病研究的结果显示:西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus, WMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)是引起吊瓜病毒病主要的主要病源。经采摘的疑似感病毒的吊瓜样品，经检测得出侵染吊瓜的病毒均为马铃薯Y病毒属病毒(Potyvirus)，有常见的小西葫芦黄化花叶病毒(Zucchiniyellow mosaic virus, ZYMV)、木瓜环斑病毒(Papaya ring spot virus, PRSV)和(Papayaleaf distortion mosaic virus, PLDMV)等。带有上述这些病毒的组培苗移植到田间后容易造成病毒病流行，被病毒侵染的吊瓜在第一年症状表现不明显，但果实的产出不高，主要产量集中在第二年，第三年基本没有产量。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是针对上述问题，提供一种无病毒吊瓜组培苗的培养方法；解决了现有技术所存在的吊瓜组培苗未经过脱病毒处理，移植到田间后容易受病毒侵染的技术问题。
[0005]为达到上述目的，本发明采用了下列技术方案:一种无病毒吊瓜组培苗的培养方法，包括以下步骤:
[0006]步骤1，在实验室培养基中获得吊瓜组培苗；
[0007]步骤2，将吊瓜组培苗置于光照培养箱中，所述光照培养箱的温度每隔12小时在31°C -33°C和37°C _39°C两个温度区间进行交替变换，培养时间为8_12天；[0008]步骤3，培养完成后，从光照培养箱中取出吊瓜组培苗，在解剖镜下剥取0.2-0.4mm的莖尖,接种于第一培养基上,将第一培养基放入培养室中培养；
[0009]步骤4，当茎尖转绿并膨大至1.8-2.2mm时，将茎尖转接至第二培养基上，并继续在培养室中培养；
[0010]步骤5，当茎尖培养成4_5cm的组培苗植株时，取组培苗植株叶子检测植株是否脱病毒，如已脱病毒，将此植株进行增殖，得到无病毒吊瓜组培苗。
[0011 ] 在上述的无病毒吊瓜组培苗的培养方法中，在步骤3中，所述第一培养基为pH为5.6-6.0 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 琼脂培养基。
[0012]在上述的无病毒吊瓜组培苗的培养方法中，在步骤4中，所述第二培养基为pH为 5.6-6.0 的 MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 琼脂培养基。
[0013]在上述的无病毒吊瓜组培苗的培养方法中，在步骤3中，所述培养室温度为230C _27°C，相对湿度为60% -80%，光照强度为1800_2200Lx，光照时间为10_14h/d。
[0014]在上述的无病毒吊瓜组培苗的培养方法中，在步骤4中，所述培养室温度为230C _27°C，相对湿度为60% -80%，光照强度为1800_2200Lx，光照时间为10_14h/d。
[0015]作为一种优选的方案，无病毒吊瓜组培苗的培养方法，包括以下步骤:
[0016]步骤1，在实验室培养基中获得吊瓜组培苗；
[0017]步骤2，将吊瓜组培苗置于光照培养箱中，所述光照培养箱的温度每隔12小时在32°C和38°C两个温度间进行交替变换，培养时间为10天；
[0018]步骤3，培养完成后，从光照培养箱中取出吊瓜组培苗，在解剖镜下剥取0.2-0.4mm 的茎尖，接种于 pH 为 5.8 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 琼脂的第一培养基上，将第一培养基放入培养室中培养，所述培养室温度为23°C _27°C,相对湿度为60% -80%，光照强度为1800-2200LX，光照时间为10_14h/d ；
[0019]步骤4，当茎尖转绿并膨大至2mm时，将茎尖转接至pH为5.8的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%琼脂的第二培养基上，并继续在培养室中培养，所述培养室温度为23°C -27°C，相对湿度为60% -80%，光照强度为1800-2200Lx，光照时间为 10-14h/d ；
[0020]步骤5，当茎尖培养成4_5cm的组培苗植株时，取组培苗植株叶子检测植株是否脱病毒，如已脱病毒，将此植株进行增殖，得到无病毒吊瓜组培苗。
[0021]与现有的技术相比，本发明的优点在于:
[0022]1、热处理结合茎尖培养结合的方法，脱除了单用茎尖培养或热处理难以脱除的病毒，提闻了脱毒成功的几率；
[0023]2、采用变温的热处理脱毒法，提高了组培苗的存活率；
[0024]3、选取0.2-0.4mm的茎尖进行培养，成活率可达60%，脱毒率为100%，具有存活率闻和脱毒率完全的效果；
[0025]4、获得了无病毒的吊瓜组培苗，利用无病毒组培苗进行组织培养，达到快速繁殖的目的，该组培苗移植到田间后不易受病毒侵染，一致性好，组培苗生长旺盛、产量高，确保了吊瓜籽的产量和质量。
【具体实施方式】[0026]一种无病毒吊瓜组培苗的培养方法，包括以下步骤:
[0027]步骤1，在实验室培养基中获得吊瓜组培苗；
[0028]步骤2，将吊瓜组培苗置于光照培养箱中，所述光照培养箱的温度每隔12小时在31°C -33°C和37°C _39°C两个温度区间进行交替变换，培养时间为8_12天；
[0029]步骤3，培养完成后，从光照培养箱中取出吊瓜组培苗，在解剖镜下剥取
0.2-0.4mm 的茎尖，接种于 pH 为 5.6-6.0 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6%琼脂培养基上，将培养基放入培养室中培养，所述培养室温度为23°C -27°C，相对湿度为60% -80%，光照强度为1800-2200LX，光照时间为10_14h/d ；
[0030]步骤4，当茎尖转绿并膨大至1.8-2.2mm时，将茎尖转接至pH为5.6-6.0的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%琼脂培养基上，并继续在培养室中培养，所述培养室温度为23°C -27°C，相对湿度为60% -80%，光照强度为1800-2200Lx，光照时间为10-14h/d ；
[0031]步骤5，当茎尖培养成4_5cm的组培苗植株时，取组培苗植株叶子检测植株是否脱病毒，如已脱病毒，将此植株进行增殖，得到无病毒吊瓜组培苗。
[0032]作为一种优选的方案，无病毒吊瓜组培苗的培养方法，包括以下步骤:
[0033]步骤1，在实验室培养基中获得吊瓜组培苗；
[0034]步骤2，将吊瓜组培苗置于光照培养箱中，所述光照培养箱的温度每隔12小时在32°C和38°C两个温度间进行交替变换，培养时间为10天；
[0035]步骤3，培养完成后，从光照培养箱中取出吊瓜组培苗，在解剖镜下剥取
0.2-0.4mm 的茎尖，接种于 pH 为 5.8 的 MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1 蔗糖 +0.6% 琼脂培养基上，将培养基放入培养室中培养，所述培养室温度为23°C _27°C，相对湿度为60% -80%,光照强度为1800-2200LX，光照时间为10_14h/d ；
[0036]步骤4，当茎尖转绿并膨大至2mm时，将茎尖转接至pH为5.8的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%琼脂培养基上，并继续在培养室中培养，所述培养室温度为23°C -27°C，相对湿度为60% -80%，光照强度为1800-2200Lx，光照时间为10-14h/d ；
[0037]步骤5，当茎尖培养成4_5cm的组培苗植株时，取组培苗植株叶子检测植株是否脱病毒，如已脱病毒，将此植株进行增殖，得到无病毒吊瓜组培苗。
[0038]下面结合试验数据进一步说明本发明的有益效果:
[0039]表1为热处理方法和时间对组培苗生长的影响。
[0040]表1
[0041]
【权利要求】
1.一种无病毒吊瓜组培苗的培养方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤1，在实验室培养基中获得吊瓜组培苗； 步骤2，将吊瓜组培苗置于光照培养箱中，所述光照培养箱的温度每隔12小时在31°C -33°C和37°C _39°C两个温度区间进行交替变换，培养时间为8_12天； 步骤3，培养完成后，从光照培养箱中取出吊瓜组培苗，在解剖镜下剥取0.2-0.4mm的莖尖，接种于第一培养基上，将第一培养基放入培养室中培养； 步骤4，当茎尖转绿并膨大至1.8-2.2mm时，将茎尖转接至第二培养基上，并继续在培养室中培养； 步骤5，当茎尖培养成4-5cm的组培苗植株时，取组培苗植株叶子检测植株是否脱病毒，如已脱病毒，将此植株进行增殖，得到无病毒吊瓜组培苗。
2.根据权利要求1所述的无病毒吊瓜组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤3中，所述第一培养基为PH为5.6-6.0的MS+2.0mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%琼脂培养基。
3.根据权利要求1所述的无病毒吊瓜组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤4中，所述第二培养基为PH为5.6-6.0的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%琼脂培养基。
4.根据权利要求1所述的无病毒吊瓜组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤3中，所述培养室温度为23°C -27°C，相对湿度为60% -80%，光照强度为1800-2200Lx，光照时间为10-14h/d。
5.根据权利要求1`所述的无病毒吊瓜组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤4中，所述培养室温度为23°C -27°C，相对湿度为60% -80%，光照强度为1800-2200Lx，光照时间为10-14h/d。
6.根据权利要求1所述的无病毒吊瓜组培苗的培养方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤1，在实验室培养基中获得吊瓜组培苗； 步骤2，将吊瓜组培苗置于光照培养箱中，所述光照培养箱的温度每隔12小时在32°C和38°C两个温度间进行交替变换，培养时间为10天； 步骤3，培养完成后，从光照培养箱中取出吊瓜组培苗，在解剖镜下剥取0.2-0.4mm的茎尖，接种于pH为5.8的MS+2.0mg -L-1BA+30.0mg-L-1蔗糖+0.6%琼脂的第一培养基上，将第一培养基放入培养室中培养，所述培养室温度为23°C _27°C，相对湿度为60% -80%,光照强度为1800-2200LX，光照时间为10_14h/d ； 步骤4，当茎尖转绿并膨大至2mm时，将茎尖转接至pH为5.8的MS+1.5mg.L-1BA+30.0mg.L-1蔗糖+0.6%琼脂的第二培养基上，并继续在培养室中培养，所述培养室温度为23°C -27°C，相对湿度为60% -80%，光照强度为1800-2200Lx，光照时间为 10-14h/d ； 步骤5，当茎尖培养成4-5cm的组培苗植株时，取组培苗植株叶子检测植株是否脱病毒，如已脱病毒，将此植株进行增殖，得到无病毒吊瓜组培苗。
【文档编号】A01H4/00GK103598097SQ201310579558
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年11月18日 优先权日:2013年11月18日
【发明者】孙叶芳, 郑琪, 羊安兴, 邢海, 赵虎, 黄岳夫 申请人:绍兴市农业科学研究院