一种促进通关藤种子盐胁迫下萌发的引发方法
【专利摘要】通过本发明采用300mg·L-1GA3溶液引发处理通关藤种子12h后，可显著提高盐胁迫下通关藤种子的发芽率、发芽势以及发芽指数。发芽率从52.67％提高至80.67％，发芽势从24.00％提高至36.67％，发芽指数从7.43提高至10.95，抗氧化物酶活性显著增加，显著增强了通关藤种子在盐胁迫条件下的抗逆性。此外，此方法简单，易于操作，成本低，对环境无污染，适宜于实际生产应用。
【专利说明】一种促进通关藤种子盐胁迫下萌发的引发方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及促进通关藤种子盐胁迫下萌发的引发方法，属中药材栽培【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 通关藤Marsdenia tenocissima(Roxb)Wight et Arn.为萝摩科牛奶菜属植物，以 藤茎入药，药材名为通关藤，具有清热解毒、保肝利尿，散结止痛等功效。近年来通关藤广泛 地被用于治疗临床各种癌症，每年的药材需求量较大，仅靠野生收购已不能满足供应，大面 积人工栽培将成为通关藤的一个发展趋势。
[0003] 我国是土壤受盐碱化危害较重的国家之一，大量盐碱地的存在为限制农作物生长 的主要胁迫因子之一。植物种子在萌发阶段对盐分敏感，盐胁迫条件下，种子萌发受阻。种 子能否在盐胁迫条件下健康成苗是植株生长发育的前提。GA 3是一种生物调节物质，能诱导 植物体内酶的产生，催化贮藏物质的降解，从而促进种子萌发的代谢作用，尤其对于盐逆境 下的种子萌发具有一定的促进作用。GA 3对高等植物作用研宄主要集中在蔬菜作物、粮食作 物及少有的药用植物。由于通关藤主要生长在喀斯特地貌区，其对土壤盐分比较敏感，且目 前对通关藤种子的研宄几乎没有，种子引发的应用更是未见报道。
[0004] 本发明提供了一种促进通关藤种子盐胁迫下萌发的引发方法，可提高种子的发芽 率和发芽指数，并增加其耐盐性。为提高通关藤种子的使用效率，实现通关藤的规范化栽培 具有重要意义，同时为GA 3在药用植物上的应用及促进种子在盐胁迫条件下的萌发提供一 定的技术支持。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种促进通关藤Marsdenia tenocissima(Roxb)Wight et Arn.种子在盐胁迫下萌发的引发方法，使种子的发芽率从52. 67%提高至80. 67%，发芽指 数从7. 43提高至10. 95,抗氧化酶活性显著升高，耐盐性显著增强。
[0006] 本发明所提供的一种促进通关藤种子盐胁迫下萌发的引发方法，包含：
[0007] A :种子采集与处理：将通关藤种子去除杂质及瘪粒后于4±0. 5°C冰箱保存备用；
[0008] B :种子前处理：选取饱满的种子用清水清洗2h，取饱满下沉的种子，捞出，于吸水 纸上晾干种子表面水分；
[0009] C :赤霉素引发：于30°C恒温黑暗条件下将种子置于300mg · T1GA3溶液中引发 12h，取出，自来水流水冲洗5min，吸水纸吸干表面水分，均匀摊在干净的滤纸上晾干至原来 干种子重量；
[0010] D :种子萌发：将引发回干后的种子置于4cm厚的湿润细砂（砂与盐溶液体积比为 4 : 1)中，每发芽床中100粒，培养温度30°C，光强33001x，光暗周期16h/8h，发芽期间，定 时定量喷洒适量自来水，种子经2?IOd萌发。
[0011] 本发明的优点在于：
[0012] 通过GAjI发种子，能显著提高盐胁迫下通关藤种子的发芽率和发芽势以及发芽 指数等，使其种子的发芽率从52. 67 %提高至80. 67%，发芽指数从7. 43提高至10. 95,抗 氧化酶活性显著升高，使通关藤种子的耐盐性显著增强。此外，此方法简单，易于操作，成本 低，对环境无污染，适宜于实际生产应用。
【专利附图】
【附图说明】
[0013] 图I GA3溶液引发与未引发处理通关藤幼苗情况
【具体实施方式】
[0014] 试验例1
[0015] A :种子采集与处理：将通关藤种子去除杂质及瘪粒后于4±0. 5°C冰箱保存备用；
[0016] B :种子前处理：选取饱满的种子用清水清洗2h，取饱满下沉的种子，捞出，于吸水 纸上晾干种子表面水分；
[0017] C:赤霉素引发：于30°C恒温黑暗条件下将种子置于100、200、300、400、 500mg ^r1GA3溶液中引发12h，取出，自来水流水冲洗5min，吸水纸吸干表面水分，均匀摊在 干净的滤纸上晾干至原来干种子重量；
[0018] D :种子萌发：将引发回干后的种子置于4cm厚的湿润细砂（砂与0. 8%盐溶液体 积比为4 : 1)中，每发芽床中100粒，培养温度30°C，光强33001x，光暗周期16h/8h，发芽 期间，定时定量喷洒适量自来水，种子经2?IOd萌发。
[0019] a.种子发芽率统计：以种子根茎处胚芽伸出2mm时的天数作为初次计数时间，以 种子萌发数达到最高，以后再无萌发种子出现时的天数作为末次计数时间。4d时统计发芽 势，IOd时统计发芽率、发芽指数、根茎长以及分根数。
[0020] b.幼苗抗氧化活性酶测定：种子发芽第10d，随机选取各处理生长部位一致的新 鲜叶片测定。超氧化物歧化酶（SOD)活性采用氮蓝四唑（NBT)法测定；过氧化氢酶（CAT) 活性采用紫外吸收法测定；丙二醛（MDA)含量采用硫代巴比妥酸（TBA)法测定；可溶性蛋 白含量采用考马斯亮蓝G-250法测定。
[0021] 结果表明，适当浓度的6以容液引发处理后，通关藤种子的发芽率、发芽势以及发 芽指数等显著提高（表1)，说明引发处理显著促进了通关藤幼苗在盐胁迫条件下的生长， 可以显著缓解盐胁迫对通关藤幼苗的伤害。GA 3溶液引发处理后通关藤幼苗的抗氧化酶活 性、可溶性蛋白含量均显著提高，丙二醛含量显著降低（表2)，说明引发处理显著提高了通 关藤幼苗保护酶活性，降低了细胞膜受损伤的程度，从而使通关藤耐盐性显著增强。
[0022] 表I GA3溶液处理下通关藤种子萌发情况
[0023] Table I Seed germination of M. tenocissima by GA3 priming
[0024]
【权利要求】
1. 一种促进通关藤Marsdenia tenacissima Roxb. Wight et Arn?种子盐胁迫下萌发 的引发方法，包含下列步骤： A :种子采集与处理：将通关藤种子去除杂质及瘪粒后于4±0. 5°C冰箱保存备用； B :种子前处理：选取饱满的种子用清水清洗2h，取饱满下沉的种子，捞出，于吸水纸上 瞭干种子表面水分； C :赤霉素引发：于30°C恒温黑暗条件下将种子置于300mg ? 17以3溶液中引发12h，取 出，自来水流水冲洗5min，吸水纸吸干表面水分，均匀摊在干净的滤纸上晾干至原来干种子 重量； D :种子萌发：将引发回干后的种子置于4cm厚的的、砂与0. 8% NaCl盐溶液体积比为 4 : 1的湿润细砂中，每发芽床中100粒，培养温度30°C，光强33001x，光暗周期16h/8h，发 芽期间，定时定量喷洒适量自来水，种子经2?10d萌发。
2. 根据权利要求1所述的一种促进通关藤种子盐胁迫下萌发的方法，其特征在于：盐 胁迫下发芽率为52.67%的通关藤种子经30〇1^*1716^溶液中引发1211后，10(1内发芽率 提高为80. 67 %，发芽指数从7. 43提高至10. 95,抗氧化酶活性显著升高，萌发率和耐盐性 显著增强。
【文档编号】A01C1/00GK104488404SQ201410815059
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月22日 优先权日:2014年12月22日
【发明者】郭巧生, 肖雪峰, 刘丽 申请人:南京农业大学