本发明涉及一种培养生长蛹虫草的方法。
背景技术：
现有的蛹虫草菌丝体的培养方法普遍存在产量低、营养成分不理想等问题，需要进一步加以改进。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种方法简便、产量高、营养丰富的在金蝉上培养生长蛹虫草的方法。
本发明的技术解决方案是：
一种在金蝉上培养生长蛹虫草的方法，其特征是：包括下列步骤：
（1）菌种的活化和驯化：将蛹虫草菌种接在下列培养基上进行活化和驯化：
葡萄糖15-20克，牛肉膏5-10克，酵母浸粉3-5克，新鲜金蝉若虫浆液20-25克，大米粉5-10克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-3克，维生素B10.1-0.5毫克，琼脂粉15-20克，加水至1000毫升；将上述营养液在121℃，0.1MPa条件下灭菌30分钟，待冷却后倒入培养皿中；将蛹虫草菌种接入培养皿中，22℃黑暗条件下培养5-10天，选取生长速度快，菌丝致密，颜色纯正的菌落，再转接到斜面培养基上22℃黑暗条件下培养5-10天，所得菌种即为适应金蝉若虫的虫草菌种；
（2）液体菌种的制备：
首先按下列配方配制营养液I：葡萄糖15-20克，牛肉膏5-10克，新鲜金蝉若虫浆液20-25克，大米粉5-10克，硫酸镁1克，磷酸二氢钾1克，维生素B10.1-0.3毫克，加水至1000毫升；将营养液I分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入活化的虫草菌种，再在140转/分钟，22℃的摇床中震荡培养5-9天，待液体变为粘稠状并有均匀的小球可用；
（3）金蝉若虫的处理
首先冷冻的金蝉若虫化冻，再将其胸部背面的蝉蜕剪掉，腹部背面剪一个2厘米长的裂口；
（4）灭菌：
取培养盒，首先将培养盒的底部均匀的铺上一层2厘米厚的大米，加入营养液Ⅱ150-200毫升，以刚好浸润大米为准，然后将经步骤（3）处理好的金蝉若虫紧密的摆在大米表面，金蝉若虫背面朝上，封口膜封口；在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，超净台上紫外灭菌20分钟；
所述营养液Ⅱ配方为：葡萄糖15-20克，牛肉膏5-10克，酵母浸粉3-5克，硫酸镁1克，磷酸二氢钾1克，维生素B10.1-0.3毫克，加水至1000毫升；
（5）接种：
用移液枪将液体菌种均匀的洒在虫体表面及大米上，每盒35-40毫升菌液，封口膜封口；
（6）菌丝体的培养：
将接种后的虫体迅速转入恒温培养箱中避光培养7-10天，前4天保持温度18℃，之后将温度升至22℃，每天观察菌丝生长情况直至培养盒表面长满白色菌丝；
（7）虫体的分离：
在超净台上，将长满菌丝的虫体单个分开，分装在培养瓶中，每瓶3个，在培养瓶中加入10-15毫升无菌水；
（8）子实体的培养：
将培养瓶转移在光下继续培养，每天保持光照12-14小时，光照强度500-800勒克斯，温度20-22℃，瓶内湿度保持75%-90%，直到子实体长出；
（9）采收：
待子实体长到5-7厘米后，用镊子轻轻将虫体连同子实体夹出，在65℃烘箱中烘干至恒重，-20℃避光保存。
将经步骤（7）虫体分离后的含大米的培养盒进行下列培养：将装有大米的培养盒用聚乙烯薄膜封口，放在光下继续培养，每天保持光照12-14小时，光照强度500-800勒克斯，温度20-22℃，盒内湿度保持70%-85%，直到子实体长出，待子实体长到2-3厘米时，打开培养盒的通风口，保持盒内有新鲜空气，每隔5-6天向盒内喷少量的水，培养30-35天，子实体长到6-7厘米时即可采收。
金蝉俗称知了猴，是同翅目蝉科昆虫的代表种。据研究表明每100克黄金蝉若虫富含蛋白质72克，脂肪15克，灰分1.8克，还含有人体必需的钙、铁、磷和多种维生素及微量元素。金蝉体内含有丰富的氨基酸，其中人体必须的氨基酸占氨基酸总量的46.6%。把同样100克黄金蝉和其他动物的蛋白质含量比较，黄金蝉若虫含蛋白质为牛瘦肉（20.2%）的3.5倍，瘦猪肉（16.7%）的4.3倍，羊肉的3.8倍，鲤鱼的4倍，鸡肉的3倍，鸡蛋的6倍。可见金蝉若虫含蛋白质的量比许多肉食动物和禽蛋都高的多，又由于同时含有人体必需的多种营养素，对促进生长发育、补充机体代谢的消耗、体虚患者康复等都有极佳的辅助治疗的作用，因此成为难得的天然无公害高级营养食品，享有天然的“唐生肉”的美誉。
以金蝉若虫为培养基种植蛹虫草，不仅营养丰富，没有任何的毒副作用，且蛹虫草的子实体和菌丝体中虫草酸、虫草素、和虫草多糖等各种活性成分都比较高。另外，金蝉的若虫材料易得，价格适中，还比较容易储存，为大规模生产蛹虫草提供了前提条件。
菌种的固体培养基和液体培养液中添加了一定量的新鲜金蝉若虫浆液和大米粉，目的是选择出对若虫和大米都比较适应的菌种，这个过程需要重复进行2-3次，选择出的菌种再扩大培养，即可作为生产用的菌种。新鲜的若虫浆液是指将新鲜（冷冻或活的）的金蝉若虫用豆浆机打成匀浆。
生产过程中用的金蝉若虫是鲜活的经过冷冻（-18℃--30℃速冻2小时，备用）处理的若虫。
在金蝉若虫下面铺上大米的作用是有利于菌丝快速扩散进入虫体，防止杂菌侵染虫体。
培养瓶中加入无菌水的目的是为虫草生长提供水分和保持瓶中湿度。（因为金蝉若虫经过灭菌后失水比较多，虫体比较干燥。）
本发明的另外一个创新点就是取出若虫的大米培养基，同时在适宜条件下培养，也可获得虫草，且产量很高，经过检测这种大米虫草所含的虫草酸、虫草素及其它活性成分和金蝉若虫培养出的虫草几乎没有区别，可以使产出生物量增加一倍，大大提高了经济效益。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
一种在金蝉上培养生长蛹虫草的方法，包括下列步骤：
（1）菌种的活化和驯化：将蛹虫草菌种接在下列培养基上进行活化和驯化：
葡萄糖15-20克，牛肉膏5-10克，酵母浸粉3-5克，新鲜金蝉若虫浆液20-25克，大米粉5-10克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-3克，维生素B10.1-0.5毫克，琼脂粉15-20克，加水至1000毫升；将上述营养液在121℃，0.1MPa条件下灭菌30分钟，待冷却后倒入培养皿中；将蛹虫草菌种接入培养皿中，22℃黑暗条件下培养5-10天，选取生长速度快，菌丝致密，颜色纯正的菌落，再转接到斜面培养基上22℃黑暗条件下培养5-10天，所得菌种即为适应金蝉若虫的虫草菌种；
（2）液体菌种的制备：
首先按下列配方配制营养液I：葡萄糖15-20克，牛肉膏5-10克，新鲜金蝉若虫浆液20-25克，大米粉5-10克，硫酸镁1克，磷酸二氢钾1克，维生素B10.1-0.3毫克，加水至1000毫升；将营养液I分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入活化的虫草菌种，再在140转/分钟，22℃的摇床中震荡培养5-9天，待液体变为粘稠状并有均匀的小球可用；
（3）金蝉若虫的处理
首先冷冻的金蝉若虫化冻，再将其胸部背面的蝉蜕剪掉，腹部背面剪一个2厘米长的裂口；
（4）灭菌：
取培养盒，首先将培养盒的底部均匀的铺上一层2厘米厚的大米，加入营养液Ⅱ150-200毫升，以刚好浸润大米为准，然后将经步骤（3）处理好的金蝉若虫紧密的摆在大米表面，金蝉若虫背面朝上，封口膜封口；在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，超净台上紫外灭菌20分钟；
所述营养液Ⅱ配方为：葡萄糖15-20克，牛肉膏5-10克，酵母浸粉3-5克，硫酸镁1克，磷酸二氢钾1克，维生素B10.1-0.3毫克，加水至1000毫升；
（5）接种：
用移液枪将液体菌种均匀的洒在虫体表面及大米上，每盒35-40毫升菌液，封口膜封口；
（6）菌丝体的培养：
将接种后的虫体迅速转入恒温培养箱中避光培养7-10天，前4天保持温度18℃，之后将温度升至22℃，每天观察菌丝生长情况直至培养盒表面长满白色菌丝；
（7）虫体的分离：
在超净台上，将长满菌丝的虫体单个分开，分装在培养瓶中，每瓶3个，在培养瓶中加入10-15毫升无菌水；
（8）子实体的培养：
将培养瓶转移在光下继续培养，每天保持光照12-14小时，光照强度500-800勒克斯，温度20-22℃，瓶内湿度保持75%-90%，直到子实体长出；
（9）采收：
待子实体长到5-7厘米后，用镊子轻轻将虫体连同子实体夹出，在65℃烘箱中烘干至恒重，-20℃避光保存。
将经步骤（7）虫体分离后的含大米的培养盒进行下列培养：将装有大米的培养盒用聚乙烯薄膜封口，放在光下继续培养，每天保持光照12-14小时，光照强度500-800勒克斯，温度20-22℃，盒内湿度保持70%-85%，直到子实体长出，待子实体长到2-3厘米时，打开培养盒的通风口，保持盒内有新鲜空气，每隔5-6天向盒内喷少量的水，培养30-35天，子实体长到6-7厘米时即可采收。