本发明涉及到一种两面针的快繁技术领域，特征是一种两面针的组织培养快繁方法。
背景技术：
两面针为芸香科植物，两面针Zanthoxylum nitidm cRoxbjdc 的干燥根。主产广东、广西、福建、云南、贵州、浙江、台湾等地，全年采，挖取根部，除去枝叶、泥土、洗净、切片、晒干，其药理药性为，根是类圆柱形，长5~20cm，直径0.5~7cm，表面呈棕黄色或淡黄色，皮孔类圆形，黄色。商品多切成不规则的块片或段。大小不一，厚1~4mm，外皮脱落处呈浅褐色。切面皮部成棕色，木部浅黄色，可见同心性环纹及密集的小孔，质硬。气微香，味苦而辛辣，有麻舌感。以根皮厚、气味浓者为佳。主要成份：根和根皮含两面针碱，根皮还含布桔叶苷。功用主治：行气止痛，活血化瘀。用于风湿骨病，喉痹，胃痛，牙痛，跌打损伤，烫伤，蛇咬伤。
技术实现要素：
本发明的目的就提供一种通过诱导导入定芽、丛生芽增殖、试管苗生根、炼苗移栽等，使两面针通过丛生芽的离体快繁方式获得管苗，再经移栽获得成功的一种两面针的组织培养快繁方法。
本发明的技术解决方案是这样的，一种两面针的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
（1）诱导不定芽：选取两面针带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒16秒种后，用无菌水冲洗6次后置于0.4%的升汞溶液中消毒32分钟，然后用无菌水冲洗7次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在29℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；
（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为1600lx，培养温度为29℃的条件下培养，19天转接一次；
（3）试管苗生根：将长至5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在29℃条件下全暗培养15天，然后每天光照16小时，光照强度为3100lx，培养温度为29℃的条件下培养至生根；
（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质中并定植于大田中。
步骤（1）所述的两面针带藤茎外植体在进行不定芽诱导之前需进行预处理，处理的方法是：将从野外采集的两面针带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.06%的高锰酸钾溶液中浸泡9小时，再用自来水冲洗6次后用胶塑料袋密封后置于6℃冰箱中过夜备用。
步骤（1）所述的诱导培养基为：以GS为基本培养基，附加3.6%蔗糖0.6%琼脂0.2%活性炭0.6%酸性水解酪蛋白以及2.2mg/L KT2.2mg/L IBA和1.2mg/L 2,4-D，pH值为5.3。
步骤（2）所述的增殖培养基为：以MS为基本培养基，附加3.2mg/L 6-BA1.6mg/L NAA 7.0mg/L核黄素0.6mg/L D-泛酸钙7.0mg/L抗坏血酸6.0mg/L L-半胱氨酸和3.6%蔗糖0.6%琼脂0.2%活性炭，pH值为5.3。
步骤（3）所述的生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，附加0.9mg/L IBA1.2mg/L GGR2.6mg/L L-半胱氨酸和2.6%蔗糖0.8%琼脂0.2%活性炭，pH值为5.3。
与现有技术相比本发明的突出效果是：技术工艺路线简单、可行，操作容易，育成的试管苗成活率达95%以上，为市场大量提供优质的两面针种苗打定基础。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1
1、外植体预处理：将从采集的两面针带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.02%的高锰酸钾溶液中浸泡6小时，再用自来水冲洗6次后用胶塑料袋密封后置于2℃冰箱中过夜备用。
2、培养过程：
（1）诱导不定芽：两面针带节藤茎经75%酒精消毒10秒种后，用无菌水冲洗4次后经0.1%的升汞溶液中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗5次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在26℃条件下全暗培养，培养46天后形成不定芽。所采用的诱导培养基为：GS+1.6mg/LKT+0.2mg/LIBA和0.5mg/L 2,4-D +3.3%蔗糖+0.30%琼脂+0.06%活性炭+0.2%酸性水解酪蛋白，pH值为5.6;
（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为1100lx，培养温度为26℃的条件下培养，26天转接一次，增殖系数为4。所采用的增殖培养基为：MS+1.6mg/L 6-BA+0.6mg/L NAA +1.2mg/L核黄素+0.6mg/L D-泛酸钙+1.2mg/L抗坏血酸+1.2mg/L L-半胱氨酸+3.5%蔗糖+0.30%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.6；
（3）试管苗生根：将长至5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在26℃条件下全暗培养8天，然后每天光照16小时，光照强度为3100lx，培养温度为26℃的条件下培养21天生根，生根率达96%。所采用的生根培养基为：1/2MS+0.2mg/L IBA+0.5mg/L GGR+1.2mg/L L-半胱氨酸+2.2%%蔗糖+0.5%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.6；
（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质并定植于大田中，成活率达95%。
实施例2
1、外植体预处理：将从野外采集的两面针带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.02%的高锰酸钾溶液中浸泡9小时，再用自来水冲洗4次后用胶塑料袋密封后置于6℃冰箱中过夜备用。
2、培养过程：
（1）诱导不定芽：两面针带节藤茎经75%酒精消毒6秒种后，用无菌水冲洗6次后经0.3%的升汞溶液中消毒12分钟，然后用无菌水冲洗6次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在26℃条件下全暗培养，培养41天后形成不定芽。所采用的诱导培养基为：GS+0.9mg/L KT+0.3mg/L IBA和0.3mg/L 2,4-D +3.2%蔗糖+0.5%琼脂+0.2%活性炭+0.6%酸性水解酪蛋白，pH值为5.5;
（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照13小时，光照强度为1250lx，培养温度为26℃的条件下培养，29天转接一次，增殖系数为7。所采用的增殖培养基为：MS+0.9mg/L 6-BA+0.4mg/L NAA +4.0mg/L核黄素+0.4mg/L D-泛酸钙+3.6mg/L抗坏血酸+4.6mg/L L-半胱氨酸+3.6%蔗糖+0.6%琼脂+0.06%活性炭，pH值为5.5；
（3）试管苗生根：将长至5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在26℃条件下全暗培养11天，然后置于每天光照13小时，光照强度为3000lx，培养温度为26℃的条件下培养29天生根，生根率达95%。所采用的生根培养基为：1/2MS+0.6mg/L IBA+1.2mg/L GGR+2.6mg/L L-半胱氨酸+2.6%%蔗糖+0.5%琼脂+0.06%活性炭，pH值为5.5；
（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质并定植于大田中，成活率达96%。
实施例3
1、外植体预处理：将从野外采集的两面针带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.05%的高锰酸钾溶液中浸泡4小时，再用自来水冲洗5次后用胶塑料袋密封后置于5℃冰箱中过夜备用。
2、培养过程：
（1）诱导不定芽：两面针带节藤茎经75%酒精消毒5秒种后，用无菌水冲洗4次后置于0.1%的升汞溶液中消毒13分钟，然后用无菌水冲洗5次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在25℃条件下全暗培养，培养48天后形成不定芽。所采用的诱导培养基为：GS+2.0mg/L KT+0.8mg/L IBA和0.4mg/L 2,4-D +3.5%蔗糖+0.4%琼脂+0.05%活性炭+0.3%酸性水解酪蛋白，pH值为5.4;
（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照13小时，光照强度为1200lx，培养温度为27℃的条件下培养，26天转接一次，增殖系数为3～6。所采用的增殖培养基为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.6mg/L NAA +5.0mg/L核黄素+0.5mg/L D-泛酸钙+6.0mg/L抗坏血酸+4.0mg/L L-半胱氨酸+3.5%蔗糖+0.5%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.4；
（3）试管苗生根：将长至6cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25℃条件下全暗培养13天，然后置于每天光照13小时，光照强度为3000lx，培养温度为25℃的条件下培养20天生根，生根率达95%。所采用的生根培养基为：1/2MS+0.2mg/L IBA+0.8mg/L GGR+1.5mg/L L-半胱氨酸+2.5%%蔗糖+0.5%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.4；
（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基质中并定植于大田中，成活率达95%。