本发明属于植物组织培养领域，尤其涉及一种艳山姜种子无菌萌发与快速繁殖的方法。
背景技术：
艳山姜(Alpinia zerumbet(Persoon)B.L.Burtt&R.M.Smith)为姜科山姜属多年生草本植物，植株高可达3米，花序下垂，花白色，唇瓣黄色具美丽的紫色条纹，花大而艳丽，花期4-6月，是极好的观花园林用材。目前尚无组织培养与快速繁殖的研究报道。艳山姜种子土壤播种出芽率低，分株繁殖系数小，难以快速繁殖种苗应用。姜科植物多是采用吸芽分株或根茎等进行繁殖，短时间内难以大量繁殖种苗。
综上所述，艳山姜种子土壤播种出芽率低，分株繁殖系数小，难以快速繁殖种苗应用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种艳山姜种子无菌萌发与快速繁殖的方法，旨在解决艳山姜种子土壤播种出芽率低，分株繁殖系数小，难以快速繁殖种苗应用的问题。
本发明是这样实现的，一种艳山姜种子无菌萌发与快速繁殖的方法，所述艳山姜种子无菌萌发与快速繁殖的方法是用种子进行无菌播种诱导发芽，然后利用芽扩繁继而生根的快速繁育种苗的方法；是以艳山姜种子作为繁殖外植体，采用适合艳山姜各个生长阶段的培养基，使种子萌发、增殖和生根，实现艳山姜种苗的规模化生产。
进一步，所述艳山姜种子无菌萌发与快速繁殖的方法包括以下步骤：
(1)采集艳山姜果实，剥出种子，去除瘪粒后装入纸袋中，置于4℃的冰箱储存备用；将种子放入纱布中扎紧口，移入超净工作台，置于无菌瓶中，用75﹪酒精消毒20s，倒去酒精后，再用0.1﹪升汞浸泡8min，期间不停晃动瓶子，最后用无菌水冲洗5次，洗掉残余的消毒液；种子预处理：用手术刀将已消毒好的种子切破少许种皮。
(2)将预处理后的种子接入培养基中，接种32d开始萌芽，先长出胚根，38d时为种子发芽高峰，发芽率57.5﹪，50d种子发芽率达到93.8﹪，60d时基部萌发出1-3个新芽。
(3)将萌发出的芽切分成单芽并去除部分顶端接入培养基，13d后长出侧芽，30d芽增殖倍率达到4.89倍；以后每隔30d转入相同的培养基中扩繁。
(4)将高约3㎝左右的丛芽切分成单芽接入培养基中培养，3d开始发根，30d生根率100％，根系粗长，平均每株生根5.58条，植株叶色绿生长健壮。
(5)将培养30d左右的组培苗移入室外荫棚中炼苗，3-5d后小心取出小苗，将其根部附着的培养基清洗干净，栽植到基质中，然后浇水淋透，用75％阴网遮阳，以后见干浇水，栽后30d成活率100％。
进一步，所述步骤(2)中培养基为MS+6-BA 5.0mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5；培养温度(26±2)℃，光照时间9h/d，光照强度1500lx。
进一步，所述步骤(3)中培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5；培养温度(26±2)℃，光照时间9h/d，光照强度1500lx。
进一步，所述步骤(4)中培养基为：MS+NAA 0.8mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5；培养温度(26±2)℃，光照时间9h/d，光照强度1500lx。
进一步，所述步骤(5)中移栽基质为取椰糖和河沙按体积1：1的比例混合均匀，装入穴盘中，种植前浇透水。
本发明的目的在于提供一种利用所述艳山姜种子无菌萌发与快速繁殖的方法种植艳山姜。
本发明提供的艳山姜种子无菌萌发与快速繁殖的方法，是一种用种子进行无菌播种诱导发芽，然后利用芽扩繁继而生根的快速繁育种苗的方法；解决了种子的处理、种子的消毒灭菌方法、种子萌发和诱芽培养基配方的研制、芽增殖培养基和生根培养基配方的研制及组培苗的移栽。本发明是用艳山姜种子作为繁殖外植体，通过种子在不同培养基上进行无菌萌发、增殖、生根培养，获得了适合于艳山姜各个生长阶段的独特培养基配方，从而实现了艳山姜种苗的规模化生产。
通过本发明无菌萌发获得的种子萌发率为93.8％，增殖培养得到的丛生芽30天增殖倍率达到4.89倍，生根培养的幼苗生根率100％，移栽成活率达到100％。与艳山姜种子直接播种到土壤中生长的方式相比，从无菌播种到炼苗移栽在4个月即可实现，大大缩短了艳山姜的生长周期，且种苗生长健壮；通过芽增殖扩繁可以规模化快速生产种苗；研制的培养基配方简单、成分来源广泛、易于操作配制。
附图说明
图1是本发明实施例提供的艳山姜种子无菌萌发与快速繁殖的方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的艳山姜种子无菌萌发与快速繁殖的方法包括以下步骤：
S101:采集艳山姜果实，剥出种子，去除瘪粒后装入纸袋中，置于4℃的冰箱储存备用；将种子放入纱布中扎紧口，纱布不宜太紧要有足够的松动以利于种子接触消毒液，然后将其移入超净工作台，置于无菌瓶中，用75﹪酒精消毒20s，倒去酒精后，再用0.1﹪升汞浸泡8min，期间不停晃动瓶子，最后用无菌水冲洗5次，充分洗掉残余的消毒液；种子预处理：用手术刀将已消毒好的种子切破少许种皮；
S102:将预处理后的种子接入培养基中，接种32d开始萌芽，先长出胚根，38d时为种子发芽高峰，发芽率57.5﹪，50d种子发芽率达到93.8﹪，60d时基部萌发出1-3个新芽；
S103:将萌发出的芽切分成单芽并去除部分顶端接入培养基，13d后长出侧芽，30d芽增殖倍率达到4.89倍。以后每隔30d转入相同的培养基中扩繁；
S104:将高约3㎝左右的丛芽切分成单芽接入培养基中培养，3d开始发根，30d生根率100％，根系粗长，平均每株生根5.58条，植株叶色绿生长健壮；
S105:将培养30d左右的组培苗移入室外荫棚中炼苗，3-5d后小心取出小苗，将其根部附着的培养基清洗干净，栽植到基质中，然后浇水淋透，用75％阴网遮阳，以后见干浇水；栽后30d成活率100％。
下面结合具体实施例对本发明的应用原理作进一步的描述。
本发明实施例提供的艳山姜种子无菌萌发与快速繁殖的方法包括以下步骤：
1种子处理
1.1种子采集：采集艳山姜果实，剥出种子，去除瘪粒后装入纸袋中，置于4℃的冰箱储存备用。
1.2种子消毒：将种子放入纱布中扎紧口，纱布不宜太紧要有足够的松动以利于种子接触消毒液，然后将其移入超净工作台，置于无菌瓶中，用75﹪酒精消毒20s，倒去酒精后，再用0.1﹪升汞浸泡8min，期间不停晃动瓶子，最后用无菌水冲洗5次，充分洗掉残余的消毒液。
1.3种子预处理：用手术刀将已消毒好的种子切破少许种皮，注意不要损伤到种胚。
2种子萌发和芽诱导培养
2.1培养基配方
MS+6-BA 5.0mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5。
2.2培养条件
培养温度(26±2)℃，光照时间9h/d，光照强度1500lx。
2.3接种
将预处理后的种子接入培养基中，接种32d开始萌芽，先长出胚根，38d时为种子发芽高峰，发芽率57.5﹪，50d种子发芽率达到93.8﹪，60d时基部萌发出1-3个新芽。
3芽增殖继代培养
3.1培养基配方
MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5。
3.2培养条件
培养温度(26±2)℃，光照时间9h/d，光照强度1500lx。
3.3接种
将萌发出的芽切分成单芽并去除部分顶端接入培养基，13d后长出侧芽，30d芽增殖倍率达到4.89倍。以后每隔30d转入相同的培养基中扩繁。
4生根培养
4.1培养基配方
MS+NAA 0.8mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5。
4.2培养条件
培养温度(26±2)℃，光照时间9h/d，光照强度1500lx。
4.3接种
将高约3㎝左右的丛芽切分成单芽接入培养基中培养，3d开始发根，30d生根率100％，根系粗长，平均每株生根5.58条，植株叶色绿生长健壮。
5组培苗移栽
5.1移栽基质
取椰糖和河沙按体积1：1的比例混合均匀，装入穴盘中，种植前浇透水。
5.2移栽方法
将培养30d左右的组培苗移入室外荫棚中炼苗，3-5d后小心取出小苗，将其根部附着的培养基清洗干净，栽植到基质中，然后浇水淋透，用75％阴网遮阳，以后见干浇水。栽后30d成活率100％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。