本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种树兰的组培繁育方法，采用花梗作为外植体的组培快繁技术。
背景技术：
树兰(epidendrumradians)为兰科树兰属，原产美洲热带地区的厄瓜多尔，是一种具有很高观赏价值的热带气生兰。早期因树兰花色较单调、花型偏小，并未受到消费者的注意，但近年来经由品种的改良，树兰的株型花型已显著改善，且花色鲜丽繁多，优雅情趣，充满青春活力，深受兰花爱好者的青睐，具有很高的观赏价值，既可作鲜切花，也可用作室内盆栽花卉。
由于本属是濒危兰花物种，数量稀少，常规的分株繁育，速度慢，效率低，利用组织培养技术对优良树兰品种进行组培扩繁，加快树兰的繁殖速度，形成一套全面、高效、实用性强的树兰组培快繁技术体系。
技术实现要素：
为解决现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种树兰的组培繁育方法，该方法具有诱导率高、诱导时间短、丛生芽增殖率高、技术难度低、遗传性能稳定的优点。
本发明提供如下技术方案：
一种树兰的组培繁育方法，包括如下步骤：
(1)花梗预处理：选取绿色，无病虫害的花梗，用毛刷刷干净花梗表面的杂质，用75％酒精棉球擦洗花梗段，剪刀剪成带1-2个芽，3-7cm长的花梗段，然后用饱和洗衣粉水浸泡15-20min，流水冲洗20-30min；
(2)花梗灭菌处理：在超净工作台上，将花梗段放入0.1％升汞中浸泡13-18min，然后用无菌水洗4-5次，在接种盘中，用手术刀慢慢刮去花梗上包住腋芽的苞片，不能弄伤腋芽，然后在放入0.1％升汞中浸泡5-8min，进行第2次灭菌，无菌水洗4-5次，最后在接种盘中，切掉花梗段两端0.5cm，按生长方向垂直插入诱导培养基中，培养基不能没过腋芽；
(3)萌发诱导阶段：在诱导培养基培养10d后，腋芽开始伸长生长，60d后，腋芽可长至4-5cm，长出4-5片叶片；
(4)继代增殖阶段：取出腋芽，从基部切离原母株，切去叶片，切掉顶芽，剩余的茎段接入继代增殖培养基中培养60d后，单芽变壮，且从茎段基部长出许多小芽，增殖倍数达3-5倍；
(5)壮苗生根阶段：将丛生芽取出，把高于1.5cm的小芽切出，接入壮苗生根培养基中培养60d后，单芽伸长生长成健壮小苗，长出3-5条根，低于1.5cm的小丛芽再继续接入继代增殖培养基中；
(6)炼苗阶段：当生根苗根长1.5-2.0cm，苗高5-9cm，叶片数6-8片时，移至温棚内炼苗14d，然后除去瓶盖继续炼苗1-2d；
(7)移栽：移栽时，先用清水洗去粘附于苗上的培养基，在荫棚下晾5min，用口径5cm带孔小杯种植，并放置于四槽托内，每杯种植2-3株，将小苗种植在移栽基质正中，轻压根部，淋透定根水；移栽10d后，用水溶性促根肥2000-3000倍浓度喷洒叶面，以叶面稍有水珠形成为度；栽植1-3个月内，与水溶性均衡肥2000-3000倍浓度轮流喷洒，每3d喷洒1次，喷肥在晴天午后进行。
作为优选，步骤(2)中所述的诱导培养基为ms+6-ba0.5-1.0mg/l+椰汁30-50ml/l。
作为优选，步骤(4)中所述的继代增殖培养基ms+6-ba2.0-3.0mg/l+naa0.05-0.1mg/l+椰汁30-50ml/l+白糖30g/l+琼脂4.2g/l，ph5.5-5.8。
作为优选，步骤(5)中所述的壮苗生根培养基为1/2ms+naa0.5-1.0mg/l+香蕉30-50g/l+白糖25g/l+琼脂4.2g/l，ph5.5-5.8。
作为优选，步骤(6)中所述的炼苗的条件为：温度20-28℃，光照强度5000lx。
作为优选，步骤(7)中所述的移栽基质以兰石和树皮按照1:1的体积比配制而成。
作为优选，步骤(7)中所述的水溶性促根肥的n∶p2o5∶k2o＝9：45：15。
作为优选，步骤(7)中所述的水溶性均衡肥的n∶p2o5∶k2o＝20：20：20。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明的树兰组培快繁能快速获得大量无菌苗，选取花梗作为外植体的优点在于，花梗上的节间部位有生长旺盛的小芽，小芽是被苞片包裹着，具有污染率较低，灭菌难度低、诱导率高、诱导时间短、丛生芽增殖率高、技术难度低、遗传性能稳定的优点，可避免生产中发生大量变异，对大规模生产具有重要意义。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
实施例1：
一种树兰的组培繁育方法，包括如下步骤：
(1)花梗预处理：选取绿色，无病虫害的花梗，用毛刷刷干净花梗表面的杂质，用75％酒精棉球擦洗花梗段，剪刀剪成带1芽，4cm长的花梗段，然后用饱和洗衣粉水浸泡15min，流水冲洗20min。
(2)花梗灭菌处理：在超净工作台上，将花梗段放入0.1％升汞中浸泡15min，无菌水洗4次，最后在接种盘中，用手术刀慢慢刮去花梗上包住腋芽的苞片，不能弄伤腋芽，然后在放入0.1％升汞中浸泡8min，进行第二次灭菌，无菌水洗4次，最后在接种盘中，切掉花梗段两端0.5cm，按生长方向垂直插入诱导培养基中，培养基不能没过腋芽。
(3)萌发诱导阶段：诱导培养基为ms+6-ba0.5mg/l+椰汁30ml/l，约10d以后，腋芽开始伸长生长，60d后，腋芽可长至4cm，长出4片叶片。
(4)继代增殖阶段：取出腋芽，从基部切离原母株，切去叶片，切掉顶芽，剩余的茎段接入继代增殖培养基ms+6-ba2.0mg/l+naa0.05mg/l+椰汁30ml/l+白糖30g/l+琼脂4.2g/l，ph5.5，60d后，单芽变壮，且从茎段基部长出许多小芽，增殖倍数达3倍。
(5)壮苗生根阶段：将丛生芽取出，把高于1.5cm的小芽切出，接入壮苗生根培养基1/2ms+naa0.5mg/l+香蕉30g/l+白糖25g/l+琼脂4.2g/l，ph5.5，60d后，单芽伸长生长成健壮小苗，长出3-5条根，低于1.5cm的小丛芽继续接入继代增殖培养基中。
(6)炼苗阶段：生根苗根长1.5cm，苗高5cm，叶片数6片时，移至温棚内炼苗14d，温度20℃，光照强度5000lx，然后除去瓶盖继续炼苗1d。
(7)移栽：移栽基质以兰石和树皮按照1:1的体积比配制，移栽时，用清水洗去粘附于苗上的培养基，在荫棚下晾5min。用口径5cm带孔小杯种植，并放置于四槽托内，每杯种植2株，将小苗种植在基质正中，轻压根部，淋透定根水。移栽10d后，用水溶性促根肥(n∶p2o5∶k2o＝9：45：15)2000倍浓度喷洒叶面，以叶面稍有水珠形成为度；栽植1-3个月内，与水溶性均衡肥(n∶p2o5∶k2o＝20：20：20)2000倍浓度轮流喷洒，每3d一次，喷肥需在晴天午后实施。
实施例2：
一种树兰的组培繁育方法，包括如下步骤：
(1)花梗预处理：选取绿色，无病虫害的花梗，用毛刷刷干净花梗表面的杂质，剪刀剪成带1芽，5cm长的花梗段，然后用饱和洗衣粉水浸泡20min，流水冲洗30min。
(2)花梗灭菌处理：在超净工作台上，用75％酒精棉球擦洗花梗段，然后放入0.1％升汞中浸泡10min，无菌水洗5次，最后在接种盘中，切掉花梗段两端0.5cm，用手术刀慢慢刮去花梗上包住腋芽的苞片，不能弄伤腋芽，然后按生长方向垂直插入诱导培养基中，培养基不能没过腋芽。
(3)萌发诱导阶段：诱导培养基为ms+6-ba1.0mg/l+椰汁50ml/l，约10d以后，腋芽开始伸长生长，60d后，腋芽可长至5cm，长出5片叶片。
(4)继代增殖阶段：取出腋芽，从基部切离原母株，切去叶片，切掉顶芽，剩余的茎段接入继代增殖培养基ms+6-ba3.0mg/l+naa0.1mg/l+椰汁50ml/l+白糖30g/l+琼脂4.2g/l，ph5.8，60d后，单芽变壮，且从茎段基部长出许多小芽，增殖倍数达5倍。
(5)壮苗生根阶段：将丛生芽取出，把高于1.5cm的小芽切出，接入壮苗生根培养基1/2ms+naa1.0mg/l+香蕉50g/l+白糖25g/l+琼脂4.2g/l，ph5.8，60d后，单芽伸长生长成健壮小苗，长出5条根，低于1.5cm的小丛芽继续接入继代增殖培养基中。
(6)炼苗阶段：生根苗根长2.0cm，苗高9cm，叶片数8片时，移至温棚内炼苗14d，温度28℃，光照强度5000lx，然后除去瓶盖继续炼苗2d。
(7)移栽：移栽基质以兰石和树皮按照1:1的体积比配制，移栽时，用清水洗去粘附于苗上的培养基，在荫棚下晾5min。用口径5cm带孔小杯种植，并放置于四槽托内，每杯种植2株，将小苗种植在基质正中，轻压根部，淋透定根水。移栽10d后，用水溶性促根肥(n∶p2o5∶k2o＝9：45：15)2000倍浓度喷洒叶面，以叶面稍有水珠形成为度；栽植1-3个月内，与水溶性均衡肥(n∶p2o5∶k2o＝20：20：20)2000倍浓度轮流喷洒，每3d一次，喷肥需在晴天午后实施。
实施例3：
一种树兰的组培繁育方法，包括如下步骤：
(1)花梗预处理：选取绿色，无病虫害的花梗，用毛刷刷干净花梗表面的杂质，用75％酒精棉球擦洗花梗段，剪刀剪成带2个芽，5cm长的花梗段，然后用饱和洗衣粉水浸泡18min，流水冲洗25min；
(2)花梗灭菌处理：在超净工作台上，将花梗段放入0.1％升汞中浸泡14min，然后用无菌水洗4次，在接种盘中，用手术刀慢慢刮去花梗上包住腋芽的苞片，不能弄伤腋芽，然后在放入0.1％升汞中浸泡5-8min，进行第2次灭菌，无菌水洗5次，最后在接种盘中，切掉花梗段两端0.5cm，按生长方向垂直插入诱导培养基中，培养基不能没过腋芽；所述的诱导培养基为ms+6-ba0.8mg/l+椰汁40ml/l；
(3)萌发诱导阶段：在诱导培养基培养10d后，腋芽开始伸长生长，60d后，腋芽可长至4cm，长出5片叶片；
(4)继代增殖阶段：取出腋芽，从基部切离原母株，切去叶片，切掉顶芽，剩余的茎段接入继代增殖培养基中培养60d后，单芽变壮，且从茎段基部长出许多小芽，增殖倍数达4倍；所述的继代增殖培养基ms+6-ba2.5mg/l+naa0.08mg/l+椰汁40ml/l+白糖30g/l+琼脂4.2g/l，ph5.6；
(5)壮苗生根阶段：将丛生芽取出，把高于1.5cm的小芽切出，接入壮苗生根培养基中培养60d后，单芽伸长生长成健壮小苗，长出4条根，低于1.5cm的小丛芽再继续接入继代增殖培养基中；所述的壮苗生根培养基为1/2ms+naa0.8mg/l+香蕉40g/l+白糖25g/l+琼脂4.2g/l，ph5.6；
(6)炼苗阶段：当生根苗根长1.8cm，苗高7cm，叶片数7片时，移至温棚内炼苗14d，然后除去瓶盖继续炼苗1d；所述的炼苗的条件为：温度24℃，光照强度5000lx；
(7)移栽：移栽时，先用清水洗去粘附于苗上的培养基，在荫棚下晾5min，用口径5cm带孔小杯种植，并放置于四槽托内，每杯种植3株，将小苗种植在移栽基质正中，轻压根部，淋透定根水；移栽10d后，用水溶性促根肥2500倍浓度喷洒叶面，以叶面稍有水珠形成为度；栽植2个月内，与水溶性均衡肥2500倍浓度轮流喷洒，每3d喷洒1次，喷肥在晴天午后进行；所述的移栽基质以兰石和树皮按照1:1的体积比配制而成；所述的水溶性促根肥的n∶p2o5∶k2o＝9：45：15；所述的水溶性均衡肥的n∶p2o5∶k2o＝20：20：20。
待植株苗移栽90天后，分别对实施例1-3移栽后的树兰植株的生长情况及移栽成活率进行调查，结果见表1。
表1采用本发明方法繁育的树兰植株的生长情况及移栽成活率
由表1可知，采用本发明的方法繁育的树兰植株健壮、长出新叶、新根的生长情况，移栽成活率均在92％以上生根率均为100％。
上述实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的保护范围之内。