一种促进香蕉组培苗生根和壮根的方法与流程

本发明涉及香蕉组织培养领域，尤其涉及一种促进香蕉组培苗生根和壮根的方法。

背景技术：

香蕉是世界第二大水果，同时也是第四大粮食作物。我国是香蕉的重要原产地，种植面积达620万亩，年产1000多万吨，是世界上第二大香蕉生产国。香蕉产业已成为我国华南地区重要的农业支柱产业。与传统吸芽分株繁殖的方式相比，组培苗具有遗传性状稳定、长势均匀一致、繁殖快速、抗病能力强等特点，因此香蕉生产中多选用组培苗。组培苗根系数目的多少及须根丰盈度是衡量组培苗质量的重要标准，同时壮苗生根也是决定移栽成活率的关键环节。

香蕉组培苗工厂化生产中常面临生根数少和根系较弱的问题。印度梨形孢最早是在印度塔尔沙漠中的两株灌木的根际土壤中分离获得，是一种能进行纯培养的类菌根真菌，其典型特征是其厚垣孢子呈梨形，因此得名印度梨形孢。研究发现印度梨形孢对多种植物根系的形成、生长与生根数具有明显的促进作用，遗憾的是至今仍未见其在香蕉尤其是香蕉组培苗生产中应用的报道。如能利用该菌促进香蕉组培苗的生根和壮根，提高根系活力，无疑会对香蕉组培苗工厂化生产和香蕉产业的健康发展大有裨益。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种促进香蕉组培苗生根和壮根的方法，可以通过在培养基中添加印度梨形孢菌块促进组培苗生根、增加组培苗生根数和粗度。

为实现上述内容，本发明采用如下技术方案：

一种促进香蕉组培苗生根和壮根的方法，其中包括印度梨形孢的培养、香蕉生根培养基的配制、印度梨形孢与香蕉组培苗共培养的接种等步骤。通过利用印度梨形孢的定殖促进香蕉组培苗生根，该方法操作简单，缩短了组培苗生根周期，可以显著促进香蕉组培苗生根并有一定的壮根效果。本发明可操作性强、效果显著。

具体包括如下步骤：

（1）印度梨形孢的培养

将马铃薯洗净去皮称重200g，切成细小的块状或条状，加800ml蒸馏水入锅煮沸至马铃薯熟透，4层纱布过滤，称取20g葡萄糖和20g琼脂分别加入滤液中，蒸馏水定容至1l并煮沸溶解，分装到三角瓶中高压蒸汽灭菌（121℃，20min），稍凉后倒入培养皿板中封口待用，配制成pda固体培养基；

活化印度梨形孢菌株，用打孔器取菌落边缘直径为5mm的菌块，接入pda固体培养基平板中间，28℃倒置黑暗培养7天后备用；

（2）香蕉组培苗生根培养基的配制

生根培养基的配方为ms+0.3mg/lnaa+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph5.8，煮沸分装至组培瓶中，每瓶30ml，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）待用；

（3）印度梨形孢与香蕉组培苗共培养

将正常继代保存培养的香蕉组培苗切取单株小苗，保留顶部叶片切除须根后转接到生根培养基中，每瓶接2株，取pda倒置28℃黑暗培养7天的印度梨形孢，用打孔器取菌落边缘直径为5mm的菌块，接入香蕉组培苗的培养基中心位置，距离植株1cm左右，每个组培瓶接种一个印度梨形孢菌块，培养温度25±2℃，2000lx，光照时间12h/d。

与常规的香蕉组培苗生根方法相比，本发明具有以下优点：

（1）本发明所采用的印度梨形孢，可人工纯培养，培养方式简单，易于规模化制备。

（2）在培养基中接种印度梨形孢菌块，与香蕉共培养的方式操作简单，效果显著。

（3）本发明可以缩短香蕉组培苗生根周期，工厂化香蕉组培苗生产一般生根培养周期为4-5周左右，通过添加印度梨形孢可将其生根周期缩短至3周。

（4）利用本发明显著提高了香蕉生根数和根系粗度，有效增强根系活力。

（5）本发明适用于多种香蕉种质，简单采用一种通用培养基就能很好的促进生根，有效节约专用培养基配置的生产环节。

附图说明

图1为实施例1生根培养30天的三明野生蕉根系生长情况图；

图2为实施例2生根培养30天的‘天宝蕉’根系生长情况图；

图3为实施例3生根培养30天的福州粉蕉1号根系生长情况图；

图4为实施例4生根培养30天的福州芭蕉根系生长情况图；

注：-p.indica为无印度梨形孢对照；+p.indica为接种印度梨形孢菌块。

具体实施方式

下面结合具体的实施例，以福建地区特色种质野生蕉（三明野生蕉）和栽培蕉（‘天宝蕉’、福州粉蕉1号、福州芭蕉）为材料，对本发明的技术方案作进一步说明，但本发明并不仅限于此。

实施例1：

1、印度梨形孢的培养

将马铃薯洗净去皮称重200g，切成细小的块状或条状，加800ml蒸馏水入锅煮沸20-30min至马铃薯熟透，4层纱布过滤，称取20g葡萄糖和20g琼脂分别加入滤液中，蒸馏水定容至1l并煮沸溶解，分装到三角瓶中高压蒸汽灭菌（121℃，20min），稍凉后倒入培养皿板中封口待用，配制成pda固体培养基。

活化印度梨形孢菌株，用打孔器取菌落边缘直径为5mm的菌块，接入pda固体培养基平板中间，28℃倒置黑暗培养7天后备用。

2、香蕉组培苗生根培养基的配制

生根培养基的配方为ms+0.3mg/lnaa+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph5.8，煮沸分装至组培瓶中，每瓶30ml左右，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）待用。

3、印度梨形孢与香蕉组培苗共培养

将正常继代保存培养的三明野生蕉组培苗切取单株小苗，保留顶部叶片切除须根后转接到生根培养基中，每瓶接2株，取pda倒置28℃黑暗培养7天的印度梨形孢，用打孔器取菌落边缘直径为5mm的菌块，接入香蕉组培苗的培养基中心位置，距离植株1cm左右，每个组培瓶接种一个印度梨形孢菌块。培养温度25±2℃，2000lx，光照时间12h/d。

接种印度梨形孢后每隔10天测量一次三明野生蕉组培苗株高、叶片数及生根数，30天后拍照记录见图1，数据具体结果见表1、表2。由表1、表2可以看出，接种印度梨形孢的三明野生蕉组培苗株高及叶片数与对照组差异不明显；而平均生根数却明显高于对照组，尤其是在接种印度梨形孢后10天和20天差异极显著，在接种30天时平均生根数仍显著高于对照组，有效解决了三明野生蕉生根弱且困难的问题。

表1印度梨形孢对三明野生蕉组培苗株高、叶片数的影响

表2印度梨形孢对三明野生蕉组培苗生根数的影响

实施例2：

1、印度梨形孢的培养

将马铃薯洗净去皮称重200g，切成细小的块状或条状，加800ml蒸馏水入锅煮沸20-30min至马铃薯熟透，4层纱布过滤，称取20g葡萄糖和20g琼脂分别加入滤液中，蒸馏水定容至1l并煮沸溶解，分装到三角瓶中高压蒸汽灭菌（121℃，20min），稍凉后倒入培养皿板中封口待用，配制成pda固体培养基。

活化印度梨形孢菌株，用打孔器取菌落边缘直径为5mm的菌块，接入pda固体培养基平板中间，28℃倒置黑暗培养7天后备用。

2、香蕉组培苗生根培养基的配制

生根培养基的配方为ms+0.3mg/lnaa+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph5.8，煮沸分装至组培瓶中，每瓶30ml左右，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）待用。

3、印度梨形孢与香蕉组培苗共培养

将正常继代保存培养的‘天宝蕉’组培苗切取单株小苗，保留顶部叶片切除须根后转接到生根培养基中，每瓶接2株，取pda倒置28℃黑暗培养7天的印度梨形孢，用打孔器取菌落边缘直径为5mm的菌块，接入香蕉组培苗的培养基中心位置，距离植株1cm左右，每个组培瓶接种一个印度梨形孢菌块。培养温度25±2℃，2000lx，光照时间12h/d。

接种印度梨形孢后每隔10天测量一次‘天宝蕉’组培苗株高、叶片数、生根数及根长，30天后拍照记录见图2，数据具体结果见表3、表4。从表3、表4中可以看出，接种印度梨形孢的天宝蕉组培苗株高平均值略高于对照组；在接种后20天和30天，叶片数平均值显著高于对照组，平均根长在20天时显著优于对照；在接种后10天，接种了印度梨形孢的天宝蕉组培苗平均数生根极显著高于对照组，根系更旺盛，须根数和根长显著优于对照，根系活力更强。

表3印度梨形孢对‘天宝蕉’组培苗株高、叶片数的影响

表4印度梨形孢对‘天宝蕉’组培苗生根数、根长的影响

实施例3：

1、印度梨形孢的培养

将马铃薯洗净去皮称重200g，切成细小的块状或条状，加800ml蒸馏水入锅煮沸20-30min至马铃薯熟透，4层纱布过滤，称取20g葡萄糖和20g琼脂分别加入滤液中，蒸馏水定容至1l并煮沸溶解，分装到三角瓶中高压蒸汽灭菌（121℃，20min），稍凉后倒入培养皿板中封口待用，配制成pda固体培养基。

活化印度梨形孢菌株，用打孔器取菌落边缘直径为5mm的菌块，接入pda固体培养基平板中间，28℃倒置黑暗培养7天后备用。

2、香蕉组培苗生根培养基的配制

生根培养基的配方为ms+0.3mg/lnaa+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph5.8，煮沸分装至组培瓶中，每瓶30ml左右，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）待用。

3、印度梨形孢与香蕉组培苗共培养

将正常继代保存培养的福州粉蕉1号组培苗切取单株小苗，保留顶部叶片切除须根后转接到生根培养基中，每瓶接2株，取pda倒置28℃黑暗培养7天的印度梨形孢，用打孔器取菌落边缘直径为5mm的菌块，接入香蕉组培苗的培养基中心位置，距离植株1cm左右，每个组培瓶接种一个印度梨形孢菌块。培养温度25±2℃，2000lx，光照时间12h/d。

接种印度梨形孢后每隔10天测量一次福州粉蕉1号组培苗株高、叶片数、生根数，30天后拍照记录见图3，数据具体结果见表5、表6。从表5、表6中可以看出，接种印度梨形孢的福州粉蕉1号组培苗株高在接种后20天显著高于对照，叶片数和生根数平均值上均高于对照组，根系更旺盛丰盈且更粗壮。

表5印度梨形孢对福州粉蕉1号组培苗株高、叶片数的影响

表6印度梨形孢对福州粉蕉1号组培苗生根数的影响

实施例4：

1、印度梨形孢的培养

将马铃薯洗净去皮称重200g，切成细小的块状或条状，加800ml蒸馏水入锅煮沸20-30min至马铃薯熟透，4层纱布过滤，称取20g葡萄糖和20g琼脂分别加入滤液中，蒸馏水定容至1l并煮沸溶解，分装到三角瓶中高压蒸汽灭菌（121℃，20min），稍凉后倒入培养皿板中封口待用，配制成pda固体培养基。

活化印度梨形孢菌株，用打孔器取菌落边缘直径为5mm的菌块，接入pda固体培养基平板中间，28℃倒置黑暗培养7天，获得印度梨形孢。

2、香蕉组培苗生根培养基的配制

生根培养基的配方为ms+0.3mg/lnaa+30g/l蔗糖+6g/l琼脂，ph5.8，煮沸分装至组培瓶中，每瓶30ml左右，高压蒸汽灭菌（121℃，20min）待用。

3、印度梨形孢与香蕉组培苗共培养

将正常继代保存培养的福州芭蕉组培苗切取单株小苗，保留顶部叶片切除须根后转接到生根培养基中，每瓶接2株，取pda倒置28℃黑暗培养7天的印度梨形孢，用打孔器取菌落边缘直径为5mm的菌块，接入香蕉组培苗的培养基中心位置，距离植株1cm左右，每个组培瓶接种一个印度梨形孢菌块。培养温度25±2℃，2000lx，光照时间12h/d。

接种印度梨形孢后每隔10天测量一次福州粉蕉1号组培苗株高、叶片数、生根数，30天后拍照记录见图4，数据具体结果见表7、表8。由表7、表8可以看出，接种印度梨形孢的福州芭蕉组培苗株高、叶片上均与对照组差异不大，而生根数上与对照组的差异极显著，约为对照的2倍，根系更旺盛且更粗壮，促生效果明显。

表7印度梨形孢对福州芭蕉组培苗株高、叶片数的影响

表8印度梨形孢对福州芭蕉组培苗生根数的影响

由以上实施例可以看出：利用印度梨形孢促进植物生根的作用，将其接种至生根培养基中与香蕉组培苗共培养，接种后30天可以显著促进香蕉苗的生根数和根系粗度，且由实验得出，在接种印度梨形孢3周左右即可达到常规组培苗移栽要求，缩短了香蕉组培苗生根周期，具有较大的生产应用价值。在本实验中，采用同一种生根培养基，在接入印度梨形孢后均能促进以上4种香蕉种质组培苗根系的生长。此外，利用本发明获得的香蕉苗有印度梨形孢定殖，可以促进香蕉苗对土壤介质的吸收，提高香蕉苗的生长和抗逆能力，具有极高的经济价值。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明所提交的权利要求书确定的保护范围。