本发明涉及一种铁皮石斛的仿野生栽培方法，特别是一种多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法。
背景技术：
铁皮石斛别称铁皮兰、吊兰、云南铁皮、铁皮吊兰，是兰科石斛属多年生草本植物，铁皮石斛是石斛类药材的上品，素有“中华仙草-药中黄金”之美称，以茎入药，含有多糖、石斛碱、生物碱等有效成分，具有滋阴清热、生津益胃、润喉明目等功效，在抗肿瘤、提高人体免疫力、治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治疗白内障等方面均有良好疗效。
现代药理学研究表明，铁皮石斛对非特异性及特异性免疫均有增强作用，在抗肿瘤、抗氧化、降低血糖以及白内障的治疗等方面，药理作用显著。其化学成分较复杂，已确定的化合物类型主要有：生物碱类、多糖类、菲类、联苄母核类，其中生物碱类、多糖类药理活性较为显著。多糖类成分是药用石斛发挥免疫活性作用的重要物质基础，铁皮石斛多糖能显著提高外周白细胞数，促进淋巴细胞产生移动抑制因子，可有效提高机体免疫力。2010版《药典》首次收载了铁皮石斛的质量标准，对多糖以及甘露糖进行含量测定。
随着铁皮石斛的保健功效被人们广泛的认识和接受，野生铁皮石斛已远远不能满足人们的需求。人们已经开始采用人工栽培铁皮石斛，铁皮石斛的仿野生栽培方法中，培养基是铁皮石斛赖以生存的条件，不同的培养原料和配方可对铁皮石斛的生长、产量和活性成分等产生重要的影响。现有技术中铁皮石斛用的培养基及现有仿野生栽培方法，不利于产出的铁皮石斛的品质保证。特别是不能保证铁皮石斛中多糖的含量，使得最终得到的铁皮石斛中多糖含量低。
技术实现要素：
本发明的目的，是提供一种多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法，本发明方法栽培铁皮石斛时，最终产出的铁皮石斛品质好，有效成分含量高，特别是多糖的含量的高。
本发明是这样实现的。
一种多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法，包括以下步骤：
（1）一次培养：取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；
（2）二次培养：取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，在昼温为20-25℃，夜温18-20℃条件下，直至生长到3-4cm高，有3-5条不定根的幼苗；
（3）驯苗：二次培养所得的幼苗放置于大棚内培养20-30天，然后室外继续培养7-9天，得铁皮石斛植株；
（4）种植：选择海拔800-1600m，相对湿度55％-70％，年降雨量1000-1500mm，冬季温度10℃以上，生长季节温度18-30℃，休眠期温度15-20℃，白天和夜晚温差保持10-15℃的石山与泥山过度地貌区域；在3月份～4月份，气温达到20℃～25℃，空气相对湿度为75%～85%，将铁皮石斛植株按3株～5株分为一丛，根部用青苔包裹好，然后放进石块凹缝或者石块之间的缝隙中；
（5）追肥：每年4月份～5月份，在每一丛铁皮石斛的根部放置5-10g肥料包；
（6）浇水：栽培后5-7天内，每天浇2-3次水；
（7）病虫害防治：每月用浓度为1-2‰的甲基托布津水溶液喷施进行叶面防治，防虫采用防虫网；
（8）采收：栽培1-2年后即可采收。
前述的多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法中，步骤（1）中，所述的生根培养基主要由按重量份计算的淫羊藿5-15份、蓝布正10-20份、忍冬5-15份、夜交藤10-20份、白芨5-15份、茯苓5-15份、蛋白胨1-10份、土豆1-10份、马铃薯1-5份和黄豆5-15份按下述步骤进行制备：
（1）取淫羊藿、蓝布正、忍冬、夜交藤、白芨和茯苓，加16-18倍量水煎煮5-6h后，过滤，滤渣弃去，收集滤液，得a品；
（2）取土豆和马铃薯，加入5-6倍量水，打成浆，得b品；
（3）取黄豆，粉碎成粉末，得c品；
（4）a品、b品混合，加热至50-60℃，加入c品和蛋白胨，搅拌5-10min后，冷却至5-10℃，即得。
前述的多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法中，所述的生根培养基主要由按重量份计算的淫羊藿8-12份、蓝布正13-17份、忍冬8-12份、夜交藤13-17份、白芨8-12份、茯苓8-12份、蛋白胨3-7份、土豆3-7份、马铃薯2-4份和黄豆8-12份按下述步骤进行制备：
（1）取淫羊藿、蓝布正、忍冬、夜交藤、白芨和茯苓，加16-18倍量水煎煮5-6h后，过滤，滤渣弃去，收集滤液，得a品；
（2）取土豆和马铃薯，加入5-6倍量水，打成浆，得b品；
（3）取黄豆，粉碎成粉末，得c品；
（4）a品、b品混合，加热至50-60℃，加入c品和蛋白胨，搅拌5-10min后，冷却至5-10℃，即得。
前述的多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法中，所述的生根培养基主要由按重量份计算的淫羊藿10份、蓝布正15份、忍冬10份、夜交藤15份、白芨10份、茯苓10份、蛋白胨5份、土豆5份、马铃薯3份和黄豆10份按下述步骤进行制备：
（1）取淫羊藿、蓝布正、忍冬、夜交藤、白芨和茯苓，加17倍量水煎煮5.5h后，过滤，滤渣弃去，收集滤液，得a品；
（2）取土豆和马铃薯，加入5.5倍量水，打成浆，得b品；
（3）取黄豆，粉碎成粉末，得c品；
（4）a品、b品混合，加热至50-60℃，加入c品和蛋白胨，搅拌8min后，冷却至5-10℃，即得。
前述的多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法中，步骤（2）中，所述幼苗培养基按重量份计算主要由熟玉米泥10-20份、山药泥10-20份、芋头泥10-20份、琼脂1-5份、陈皮粉1-5份和葛根粉1-5份混匀，即得。
前述的多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法中，所述幼苗培养基按重量份计算主要由熟玉米泥15份、山药泥15份、芋头泥15份、琼脂3份、陈皮粉3份和葛根粉3份混匀，即得。
前述的多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法中，步骤（5）中，所述的肥料包按重量份计算，主要由40-50%的泥浆50-60份、土豆泥5-15份、蛋白胨0.1-0.5份、琼脂0.1-0.5份、维生素b10.1-0.5份、麦芽0.1-0.5份和苦楝皮粉1-10份混匀，即得。
前述的多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法中，所述的肥料按重量份计算，主要由40-50%的泥浆55份、土豆泥10份、蛋白胨0.3份、琼脂0.3份、维生素b10.3份、麦芽0.3份和苦楝皮粉5份混匀，即得。
申请人对本发明进行了大量的实验研究，部分实验如下：
实验例1多糖含量考察.
1材料与方法
1.1材料
1.1.1铁皮石斛1：按实施例1进行栽培后，采收得到铁皮石斛1。
1.1.2铁皮石斛2：栽培时，生根培养基中不含淫羊藿、蓝布正、忍冬、夜交藤、白芨和茯苓；其余方法同实施例1进行栽培后，采收得到铁皮石斛2。
1.2仪器和试剂
葡萄糖标准品[d一(+)一葡萄糖]：kayon公司；甲醇(色谱纯)：天津市科密欧化学试剂有限公司；其余试剂均为分析纯；苯酚：上海凌峰化学试剂有限公司；硫酸：上海凌峰化学试剂有限公司。
2方法
2.1供试品溶液的制备
2.1.1供试品溶液1的制备：
取本发明铁皮石斛（铁皮石斛1）样品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，过三号筛，取过滤后药材粉末，挥干溶剂，加水2000ml，加热回流2小时，放冷，转移至250ml量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置15ml离心管中，精密加入95％乙醇，摇匀，冷藏1小时，取出，离心20分钟，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25ml量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液1。
2.1.2供试品溶液2的制备
取铁皮石斛2样品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，过三号筛，取过滤后药材粉末，挥干溶剂，加水2000ml，加热回流2小时，放冷，转移至250ml量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置15ml离心管中，精密加入95％乙醇，摇匀，冷藏1小时，取出，离心20分钟，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25ml量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液2。
2.2对照品溶液的制备
精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖适量，加水制成99mg/l溶液，备用。
2.3标准曲线制备
精密量取对照品溶液0．2、0．4、0．6、0．8、1．0ml置10ml具塞试管中，加水至1.0ml，精密加入5％苯酚溶液1ml(i临用前现配制)，摇匀，再精密加入硫酸5ml，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，放入冰水浴中冷却5分钟，以相应的试剂为空白，在488nm波长处测定吸光度，以吸光度y为纵坐标，浓度x(g/l)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：y=11．772x-0.1492，r=0.9995。结果表明多糖在0.02-0.10g/l范围内线性关系良好。
2.4测定法
分别精密量取供试品溶液1和供试品溶液2各0.5ml，置10ml具塞试管中，加水至1ml，按“2.3”标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入5％苯酚溶液1ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的含量，计算，即得。
2.5精密度试验
精密吸取葡萄糖对照品溶液6份，每份0.6ml，按照“2.4”项下的方法测定吸光度。测定结果，rsd分别为1.60%和1.62%，精密度良好。
2.6重复性试验
按上述方法制备6份供试品溶液1和供试品溶液2，照按上述方法测定吸光度。测定结果，rsd分别为2.70%和2.71%，重复性良好。
2.7稳定性试验
分别取同一供试品溶液1和供试品溶液2，在室温下放置，分别于10min、30min、1h、2h、4h、6h后按上述方法测定吸光度。测定结果，rsd分别为2.70%和2.73%，表明供试品溶液1和供试品溶液2均在6小时内稳定。
2.8加样回收率试验
称取已知含量(12.5%)的铁皮石斛1粉末6份，每份约1.65g，精密称定。准确加入葡萄糖对照品溶液(浓度为0.099g/l)2ml，按上述方法制备供试品溶液1，按上述方法测定，计算多糖含量，结果平均回收率为94.9%，rsd为2.7%。
称取已知含量(12.5%)的铁皮石斛2粉末6份，每份约1.65g，精密称定。准确加入葡萄糖对照品溶液(浓度为0.099g/l)2ml，按上述方法制备供试品溶液2，按上述方法测定，计算多糖含量，结果平均回收率为93.9%，rsd为2.6%。
2.9样品测定
按上述供试品溶液1和供试品溶液2的制备方法和测定条件，测定6份铁皮石斛1样品和6份铁皮石斛2样品中多糖的含量，记录结果，结果取平均值，结果见表1。
由表可知，本发明方法栽培得到的铁皮石斛，最终采收的铁皮石斛中多糖的含量较高。铁皮石斛的品质好。
与现有技术相比，本发明方法栽培铁皮石斛时，最终产出的铁皮石斛品质好，有效成分含量高，特别是多糖的含量的高。
具体实施方式
实施例1。
一种多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法，包括以下步骤：
（1）一次培养：取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；
（2）二次培养：取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，在昼温为20-25℃，夜温18-20℃条件下，直至生长到3-4cm高，有3-5条不定根的幼苗；
（3）驯苗：二次培养所得的幼苗放置于大棚内培养25天，然后室外继续培养8天，得铁皮石斛植株；
（4）种植：选择海拔800-1600m，相对湿度55％-70％，年降雨量1000-1500mm，冬季温度10℃以上，生长季节温度18-30℃，休眠期温度15-20℃，白天和夜晚温差保持10-15℃的石山与泥山过度地貌区域；在3月份～4月份，气温达到20℃～25℃，空气相对湿度为75%～85%，将铁皮石斛植株按3株～5株分为一丛，根部用青苔包裹好，然后放进石块凹缝或者石块之间的缝隙中；
（5）追肥：每年4月份～5月份，在每一丛铁皮石斛的根部放置5-10g肥料包；
（6）浇水：栽培后6天内，每天浇3次水；
（7）病虫害防治：每月用浓度为1.5‰的甲基托布津水溶液喷施进行叶面防治，防虫采用防虫网；
（8）采收：栽培1-2年后即可采收。
所述的生根培养基由淫羊藿10kg、蓝布正15kg、忍冬10kg、夜交藤15kg、白芨10kg、茯苓10kg、蛋白胨5kg、土豆5kg、马铃薯3kg和黄豆10kg按下述步骤进行制备：
（1）取淫羊藿、蓝布正、忍冬、夜交藤、白芨和茯苓，加17倍量水煎煮5.5h后，过滤，滤渣弃去，收集滤液，得a品；
（2）取土豆和马铃薯，加入5.5倍量水，打成浆，得b品；
（3）取黄豆，粉碎成粉末，得c品；
（4）a品、b品混合，加热至50-60℃，加入c品和蛋白胨，搅拌8min后，冷却至5-10℃，即得。
所述幼苗培养基由熟玉米泥15kg、山药泥15kg、芋头泥15kg、琼脂3kg、陈皮粉3kg和葛根粉3kg混匀，即得。
所述的肥料包由45%的泥浆55kg、土豆泥10kg、蛋白胨0.3kg、琼脂0.3kg、维生素b10.3kg、麦芽0.3kg和苦楝皮粉5kg混匀，即得。
实施例2.
一种多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法，包括以下步骤：
（1）一次培养：取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；
（2）二次培养：取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，在昼温为20-25℃，夜温18-20℃条件下，直至生长到3-4cm高，有3-5条不定根的幼苗；
（3）驯苗：二次培养所得的幼苗放置于大棚内培养30天，然后室外继续培养9天，得铁皮石斛植株；
（4）种植：选择海拔800-1600m，相对湿度55％-70％，年降雨量1000-1500mm，冬季温度10℃以上，生长季节温度18-30℃，休眠期温度15-20℃，白天和夜晚温差保持10-15℃的石山与泥山过度地貌区域；在3月份～4月份，气温达到20℃～25℃，空气相对湿度为75%～85%，将铁皮石斛植株按3株～5株分为一丛，根部用青苔包裹好，然后放进石块凹缝或者石块之间的缝隙中；
（5）追肥：每年4月份～5月份，在每一丛铁皮石斛的根部放置5-10g肥料包；
（6）浇水：栽培后7天内，每天浇2次水；
（7）病虫害防治：每月用浓度为1-2‰的甲基托布津水溶液喷施进行叶面防治，防虫采用防虫网；
（8）采收：栽培2年后即可采收。
所述的生根培养基由淫羊藿12kg、蓝布正17kg、忍冬12kg、夜交藤17kg、白芨12kg、茯苓12kg、蛋白胨7kg、土豆7kg、马铃薯4kg和黄豆12kg按下述步骤进行制备：
（1）取淫羊藿、蓝布正、忍冬、夜交藤、白芨和茯苓，加18倍量水煎煮6h后，过滤，滤渣弃去，收集滤液，得a品；
（2）取土豆和马铃薯，加入6倍量水，打成浆，得b品；
（3）取黄豆，粉碎成粉末，得c品；
（4）a品、b品混合，加热至50-60℃，加入c品和蛋白胨，搅拌10min后，冷却至5-10℃，即得。
所述幼苗培养基由熟玉米泥20kg、山药泥20kg、芋头泥20kg、琼脂5kg、陈皮粉5kg和葛根粉5kg混匀，即得。
所述的肥料包由50%的泥浆60kg、土豆泥15kg、蛋白胨0.5kg、琼脂0.5kg、维生素b10.5kg、麦芽0.5kg和苦楝皮粉10kg混匀，即得。
实施例3.
一种多糖含量高的铁皮石斛的仿野生栽培方法，包括以下步骤：
（1）一次培养：取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；
（2）二次培养：取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，在昼温为20-25℃，夜温18-20℃条件下，直至生长到3-4cm高，有3-5条不定根的幼苗；
（3）驯苗：二次培养所得的幼苗放置于大棚内培养20天，然后室外继续培养7天，得铁皮石斛植株；
（4）种植：选择海拔800-1600m，相对湿度55％-70％，年降雨量1000-1500mm，冬季温度10℃以上，生长季节温度18-30℃，休眠期温度15-20℃，白天和夜晚温差保持10-15℃的石山与泥山过度地貌区域；在3月份～4月份，气温达到20℃～25℃，空气相对湿度为75%～85%，将铁皮石斛植株按3株～5株分为一丛，根部用青苔包裹好，然后放进石块凹缝或者石块之间的缝隙中；
（5）追肥：每年4月份～5月份，在每一丛铁皮石斛的根部放置5-10g肥料包；
（6）浇水：栽培后7天内，每天浇2次水；
（7）病虫害防治：每月用浓度为1‰的甲基托布津水溶液喷施进行叶面防治，防虫采用防虫网；
（8）采收：栽培1年后即可采收。
所述的生根培养基由淫羊藿8kg、蓝布正13kg、忍冬8kg、夜交藤13kg、白芨8kg、茯苓8kg、蛋白胨3kg、土豆3kg、马铃薯2kg和黄豆8kg按下述步骤进行制备：
（1）取淫羊藿、蓝布正、忍冬、夜交藤、白芨和茯苓，加16倍量水煎煮5h后，过滤，滤渣弃去，收集滤液，得a品；
（2）取土豆和马铃薯，加入5倍量水，打成浆，得b品；
（3）取黄豆，粉碎成粉末，得c品；
（4）a品、b品混合，加热至50-60℃，加入c品和蛋白胨，搅拌5min后，冷却至5-10℃，即得。
所述幼苗培养基由熟玉米泥10kg、山药泥10kg、芋头泥10kg、琼脂1kg、陈皮粉1kg和葛根粉1kg混匀，即得。
所述的肥料包由40%的泥浆50kg、土豆泥5kg、蛋白胨0.1kg、琼脂0.1kg、维生素b10.1kg、麦芽0.1kg和苦楝皮粉1kg混匀，即得。