本发明涉及食用菌技术领域，具体涉及一种无菌空腔组织分离方法。
背景技术：
食用菌的组织分离法通常是指通过在无菌条件下获取子实体组织，于适宜条件下培养获得纯菌种的方法。这是一种菌种复壮必须的技术。但对于胶质菌，如黑木耳、银耳等，由于耳片薄，操作难度大，难以获得足够大小的组织块，并易发生杂菌污染。另一方面，由于子实体中胶质多，菌丝少，组织分离获得纯菌种的难度较大。
技术实现要素：
为解决上述问题，本发明提供一种分离方法简单，分离效果好，无杂菌，分离彻底的无菌空腔组织分离方法。
本发明的技术方案：
一种无菌空腔组织分离方法，取胶质菌子实体原基进行组织分离；包括以下步骤：
（1）将培养基放置在瓶中，瓶体内65%-75%为压实的培养基，瓶体内剩余部分空出来，瓶体内壁干净，瓶内为无菌环境；
（2）菌丝体在瓶中，正常发菌，在发菌过程中向瓶中主动提供无菌空气，同时从排废气口排出废气，最终形成凸体的原基；
（3）挑选生长健壮、无任何污染的培养对象作分离材料，取该原基内部组织做组织分离。
进一步的，所述无菌空气通过空气过滤器进行净化，所述空气过滤器包括一级空气过滤器、二级空气过滤器，所述一级空气过滤器的孔径为0.1-0.5μm，二级空气过滤器的孔径为0.01μm，所述空气过滤器连接空气压缩机。
进一步的，所述排废气口上用塑料袋密封，所述塑料袋上布满微孔，孔径大小0.01-0.05μm，微孔密度为50-100个/cm3。
进一步的，所述凸体的原基的直径为4-5cm。
进一步的，在无菌环境下用接种工具将原基内部勾取绿豆颗粒大小的块状，然后移接到试管的斜面培养基上。
进一步的，所述瓶内二氧化碳的浓度保持在0.034%-0.1%，当二氧化碳浓度大于此浓度时开启空气压缩机。
进一步的，所述瓶连接二氧化碳浓度检测仪，所述二氧化碳浓度检测仪连接控制器，所述控制器连接空压机启动开关。
进一步的，所述培养基连接ph检测仪和湿度检测仪。
本发明的有益效果：
本发明分离方法克服了常规条件下的难以获得足够大小的组织块和操作可控性差导致杂菌污染高几率发生的两大难题，获得组织分离物的大小可完全自由掌控，分离物内菌丝量大，萌发快，48小时有肉眼可见的菌丝萌发，可见杂菌污染的发生率几近于零，获得纯菌种的机会接近100%；
培养基连接ph检测仪和湿度检测仪能够严格控制菌丝体生长过程中的ph和湿度；无菌环境下用接种工具将原基内部勾取绿豆颗粒大小的块状，保证获得菌种的纯正，避免杂菌污染的发生；
所述无菌空气通过空气过滤器进行净化，所述空气过滤器为二级空气过滤器，所述一级空气过滤器的孔径为0.1-0.5μm，二级空气过滤器的孔径为0.01μm，所述空气过滤器连接空气压缩机，所述排废气口上用塑料袋密封，所述塑料袋上布满微孔，孔径大小0.01-0.05μm，微孔密度为50-100个/cm3；能够保证菌丝体生长中所需氧气量，同时能够将多余的二氧化碳排出，且不会造成杂菌的感染；
瓶体的下面65%-75%内为压实的培养基，瓶体上不部剩余部分空出，能够保证氧气充足和原基的生长。
具体实施方式
实施例1
一种无菌空腔组织分离方法，取胶质菌子实体原基进行组织分离；包括以下步骤：
（1）将培养基放置在瓶中，瓶体内70%为压实的培养基，瓶体内剩余部分空出来，瓶体内壁干净，瓶内为无菌环境；
（2）菌丝体在瓶中，正常发菌，在发菌过程中向瓶中主动提供无菌空气，同时从排废气口排出废气，最终形成凸体的原基；
（3）挑选生长健壮、无任何污染的培养对象作分离材料，取该原基内部组织做组织分离。
所述无菌空气通过空气过滤器进行净化，所述一级空气过滤器的孔径为0.3μm，二级空气过滤器的孔径为0.01μm，所述空气过滤器连接空气压缩机。
所述排废气口上用塑料袋密封，所述塑料袋上布满微孔，孔径大小0.05μm，微孔密度为50个/cm3。
所述凸体的原基的直径为4-5cm。
在无菌环境下用接种工具将原基内部勾取绿豆颗粒大小的块状，然后移接到试管的斜面培养基上。
所述瓶内二氧化碳的浓度保持在0.034%-0.1%，当二氧化碳浓度大于此浓度时开启空气压缩机。
所述瓶连接二氧化碳浓度检测仪，所述二氧化碳浓度检测仪连接控制器，所述控制器连接空压机启动开关。
所述培养基连接ph检测仪和湿度检测仪。
所述二氧化碳浓度检测仪gt-903-co2为二氧化碳浓度检测仪，所述ph检测仪为phs-25cph检测仪，所述湿度检测仪为防水型微电脑温湿度测定仪hi93640。
实施例2
一种无菌空腔组织分离方法，取胶质菌子实体原基进行组织分离；包括以下步骤：
（1）将培养基放置在瓶中，瓶体的下面65%内为压实的培养基，瓶体内剩余部分空出来，瓶体内壁干净，瓶内为无菌环境；
（2）菌丝体在瓶中，正常发菌，在发菌过程中向瓶中主动提供无菌空气，同时从排废气口排出废气，最终形成凸体的原基；
（3）挑选生长健壮、无任何污染的培养对象作分离材料，取该原基内部组织做组织分离。
所述无菌空气通过空气过滤器进行净化，所述一级空气过滤器的孔径为0.1μm，二级空气过滤器的孔径为0.01μm，所述空气过滤器连接空气压缩机。
所述排废气口上用塑料袋密封，所述塑料袋上布满微孔，孔径大小0.05μm，微孔密度为100个/cm3。
所述凸体的原基的直径为4-5cm。
在无菌环境下用接种工具将原基内部勾取绿豆颗粒大小的块状，然后移接到试管的斜面培养基上。
所述瓶内二氧化碳的浓度保持在0.034%-0.1%，当二氧化碳浓度大于此浓度时开启空气压缩机。
所述瓶连接二氧化碳浓度检测仪，所述二氧化碳浓度检测仪连接控制器，所述控制器连接空压机启动开关。
所述培养基连接ph检测仪和湿度检测仪。
所述二氧化碳浓度检测仪gt-903-co2为二氧化碳浓度检测仪，所述ph检测仪为phs-25cph检测仪，所述湿度检测仪为防水型微电脑温湿度测定仪hi93640。
实施例3
一种无菌空腔组织分离方法，取胶质菌子实体原基进行组织分离；包括以下步骤：
（1）将培养基放置在瓶中，瓶体内75%为压实的培养基，瓶体内剩余部分空出来，瓶体内壁干净，瓶内为无菌环境；
（2）菌丝体在瓶中，正常发菌，在发菌过程中向瓶中主动提供无菌空气，同时从排废气口排出废气，最终形成凸体的原基；
（3）挑选生长健壮、无任何污染的培养对象作分离材料，取该原基内部组织做组织分离。
所述无菌空气通过空气过滤器进行净化，所述一级空气过滤器的孔径为0.5μm，二级空气过滤器的孔径为0.01μm，所述空气过滤器连接空气压缩机。
所述排废气口上用塑料袋密封，所述塑料袋上布满微孔，孔径大小0.05μm，微孔密度为80个/cm3。
所述凸体的原基的直径为4-5cm。
在无菌环境下用接种工具将原基内部勾取绿豆颗粒大小的块状，然后移接到试管的斜面培养基上。
所述瓶内二氧化碳的浓度保持在0.034%-0.1%，当二氧化碳浓度大于此浓度时开启空气压缩机。
所述瓶连接二氧化碳浓度检测仪，所述二氧化碳浓度检测仪连接控制器，所述控制器连接空压机启动开关。
所述培养基连接ph检测仪和湿度检测仪。
所述二氧化碳浓度检测仪gt-903-co2为二氧化碳浓度检测仪，所述ph检测仪为phs-25cph检测仪，所述湿度检测仪为防水型微电脑温湿度测定仪hi93640。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。