专利名称:一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法
技术领域：
本发明涉及鱼类的养殖技术领域：
，具体涉及一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法。
背景技术：
黄姑鱼(Nibea albiflora)，俗称黄婆鸡，属鲈形目，石首鱼科，黄姑鱼属，近海中下水层鱼类，为我国东南沿海重要的增殖和养殖品种，具有较高的营养和药用价值，市场需求量在不断上升。目前黄姑鱼的繁殖大多依靠亲本自然成熟来实现产卵，由于黄姑鱼亲本成熟度的差异，造成产卵的不同步性，无法实现对产卵时间及产卵量的人为控制，既不利于生产，也无法满足鱼类遗传育种定向交配的要求。人工催产在一定程度上解决了黄姑鱼等鱼类亲本群体性腺成熟度差异造成的排卵不集中、排卵周期较长的问题，通过人工催产，可以促使亲鱼一次性产卵，产卵多，出苗整齐。如中国发明专利申请《黄姑鱼提早繁育方法》，发明公开号102257978A，公开了一种黄姑鱼的提早繁育方法，步骤包括选400g以上雄性亲鱼和600g以上雌性亲鱼，按I :1于培养池中，每立方米水体放养2飞对雌雄亲鱼；控制光照时间和水温温度一月内光照时间从10小时/天延至14小时/天，光照强度在300-5001ux ;水温从10°C始，1°C /天升至18°C 19°C稳定七天；然后O. 5°C 1°C /天升至22°C停止升温；维持14小时/天、22°C—个月，得性腺成熟的雌雄亲鱼；雌性亲鱼用激素按O. 3-1. 5微克/千克剂量注射催产，雄性减半；亲鱼在激素诱导下自然受精得受精卵，然后进行常规人工育苗。然而该方法未详细确定亲本的最佳催产期和催产剂，也未建立明确的催产亲体培育温度和催产效应时间的关系，无法形成一个黄姑鱼系统的长期的优良家系。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明在黄姑鱼性腺发育规律的基础上，确定亲本的最佳催产期和催产剂，建立催产亲体培育温度和催产效应时间的关系。
为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于按以下步骤
(1)将黄姑鱼亲本移入室内大棚中养殖，养殖过程中控制水温在14 19°C之间，溶解氧5. Omg/L以上，养殖密度10 15尾/立方米，日常投喂料中，每隔2 5天加投喂一次冰鲜小杂鱼，投喂量控制在鱼体质量2 3%，所述的冰鲜小杂鱼以带鱼和小黄鱼为主；
(2)将选取的黄姑鱼亲本转入室内水泥池进行营养强化，养殖期间控制养殖密度5 10尾/立方米,采用沙滤海水,每天早上换水90%以上,24h充氧，保持水体溶解氧5. Omg/L以上，日常投喂料中，每天加投喂I次缢経，投喂量为鱼体质量4 7%，并在投喂的缢蛏中加入O. 2%的维生素E ；
(3)挑选腹部有隆起，用手轻轻触摸腹部较柔软，泄殖孔有微微的突起并且颜色略带红色的亲本作为待催产的亲鱼，即性腺发育成熟至IV期的亲本，用注射用促黄体激素释放激素作为催产剂，对黄姑鱼雌鱼采用两次注射法进行腹腔注射，第一次催产时注射剂量为Ikg亲本注射I μ g催产素，第二次注射时注射剂量为Ikg亲本注射I. 5-2 μ g催产素，对黄姑鱼雄鱼采用一次注射法进行腹腔注射，注射剂量为Ikg亲本注射I μ g催产素；
(4)待亲鱼注射完催产素后，立即将它们分别放到不同的催产池中培育，雌鱼的培育池要用黑布将池口遮住，等效应时间过后，对催产后的雄鱼采精，用淡水冲洗雄鱼的泄殖孔，擦净，轻轻挤压腹部，用吸管将精液收集到离心管中暂存，再对催产后的雌鱼取卵，同样用淡水冲洗雌鱼的泄殖孔，擦净，轻轻挤压腹部，用塑料杯收集卵子，将收集好的精液用Hank’s液，按照I :30比例稀释，然后与卵子按照每IOOg卵子加入IOml精液的比例混合，并立即混匀，然后加入海水完成受精，所述的Hank’ s液配方为NaCl 8.01 g/1 ；KC1 0.4g/1 ；CaCl2 0. 14 g/1 ；NaHCO3 0. 35 g/1 ；KH2P04 0 . 06 g/1 ；Glucose 0. 34 g/1 ； pH 8. 0 ；
(5)收集精液和卵子时，分别把每一条雄鱼的精液和雌鱼的卵子都单独保存，在显微镜下分别观察，选取精子活力好的雄鱼和卵子形状完整规则并且透明的雌鱼进行I对I人工受精，并把雌性和雄性亲鱼分别剪取尾鳍低温保存，并做好记录，用于建立家系。所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(I)中当水温在16°C以上时日常投喂料中，每隔2 3天加投喂一次冰鲜小杂鱼，投喂量控制在鱼体质量2 3%，当水温低于16°C时日常投喂料中，每隔3 5天加投喂一次冰鲜小杂鱼，投喂量控制在鱼体质量2 3%。
所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(2)中在水泥池的四周和顶部以黑布遮光，并在上方Im安装2只60W的日光灯，尽量使灯光在培育池的水面分布均匀，开始每天连续照射8小时，并每隔5天增加I小时，至每日照射14个小时，后维持14小时/天，光照强度为50 lOOLx。
所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(3)所述的注射用促黄体激素释放激素选用注射用促黄体素释放激素A2。
所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(3)所述的雌鱼的第二次注射时间和雄鱼的注射时间都要选在早上的8 00o
所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(4)所述的效应时间为当培育水温为20°C时催产效应时间为31-32h，当培育温度为22°C时催产效应时间为29-30h。
所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(5)所述的I对I人工受精采用的是干法受精。
本发明的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，详细确定亲本的最佳催产期和催产剂，建立明确的催产亲体培育温度和催产效应时间的关系，且催产成功率高，产卵时间统一，产卵量多，解决了黄姑鱼排卵不同步的问题，实现对亲本的按需供卵，也便于建立黄姑鱼系统的长期的优良家系。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例在11月下旬将黄姑鱼亲本移入室内大棚中养殖，池壁和池底均用水泥修聋，养殖水深为I. 5-2. 0m，养殖密度10 15尾/立方米，控制水温在14 19°C之间，根据水体的温度调整投喂量，当水温在16°C以上时，日常投喂料中，每隔2-3天加投喂一次冰鲜小杂鱼，以带鱼和小黄鱼为主。当水温低于16°C时，日常投喂料中，每隔3-5天加投喂一次冰鲜小杂鱼，投喂量控制在鱼体重的2 3%，并且在室内大棚内放置增氧机两台，保持水体中的溶解氧充足。次年3月中旬将亲鱼运至室内水泥池中培育和营养强化,采用沙滤海水，每天早上换水90%以上，24h充氧，保持水体溶解氧5. Omg/L以上，在日常投喂料中，每天加投喂I次缢蛏,投喂量为鱼体重的4 7%，并在投喂的缢蛏中加入O. 2%的维生素E。在培育池四周和顶部以黑布遮光，并在亲鱼培育池的上方Im安装2只60W的日光灯，尽量使灯光在培育池的水面分布均匀，开始每天连续照射8小时，并每隔5天增加I小时，至每日照射14个小时，后维持14小时/天，光照强度为50 lOOLx。
亲本经营养强化后，至次年5月上旬，挑选性腺发育较好的黄姑鱼雌鱼200尾和雄鱼100尾转移至各自催产池中培育。挑选雌鱼时要选择个体较大、体色正常、健康的亲本，轻摸鱼体的腹部可以清晰地感觉到性腺的轮廓，且腹部较松软。挑选雄鱼时用毛巾裹住鱼 体的头部，轻轻的挤压腹部略有乳白色的精液流出。在亲本的挑选和转移过程中，可适当的用MS-222麻醉，以减少对亲本的刺激和伤害。
催产剂选用的是宁波第二激素厂生产的注射用促黄体素释放激素A2，利用O. 7%的生理盐水稀释催产素来进行腹腔注射。对于雌鱼选用两次注射法，第一次催产时注射剂量为Ikg亲本注射I μ g催产素，第二次注射时注射剂量为Ikg亲本注射I. 5-2 μ g催产素。对黄姑鱼雄鱼采用一次注射法，注射剂量为Ikg亲本注射I μ g催产素。待亲本注射完催产素后，立即将它们分别放到不同的催产池中培育，即催产后雌鱼和雄鱼是分开培育的，并且雌鱼的培育池要用黑布将池口遮住。当培育水温为20°C时亲本的催产效应时间为31-32h，而当培育温度为22°C时亲本的催产效应时间为29-30h，雌鱼的第二次注射时间和雄鱼的注射时间都要选在早上的8 :00，使亲本在第二天晚上的19:00前后产卵，与黄姑鱼自然产卵时间相近。5月中旬至六月中旬，共催产亲本11批次，共催产雌鱼120尾和雄鱼80尾，经人工催产的养殖亲鱼，雄鱼的催产成功率达到100%，雌鱼的催产成功率达到60%-80%，有效地提高了亲鱼的年供卵量，共提供给育苗场达20000ml优质受精卵，实现经济效益可达300余万。
对催产后的亲本分别进行精子和卵子的收集。首先用淡水冲洗完雄鱼的泄殖孔，擦净，轻轻挤压腹部，用吸管将精液收集到2ml离心管中，放置在保温冰盒中暂存。精液收集完后，再对雌鱼取卵，同样要将雌鱼的泄殖孔擦拭干净，防止海水污染，挤压腹部，用塑料杯收集卵子。将收集好的精液用Hank’s液按照I :30比例稀释，然后与卵子按照每IOOg卵子加入IOml精液的比例混合，并立即混匀，然后加入少量的海水完成受精，所述的Hank’ s液配方为NaCl 8. 01 g/1 ；KC1 O. 4 g/1 ；CaCl2 0. 14 g/1 ；NaHCO3 0. 35 g/1 ；KH2P04 0 . 06g/1 ；Glucose 0. 34 g/1 ； pH 8.0。
收集精液和卵子时，分别把每一条雄鱼的精液和雌鱼的卵子都单独保存，在显微镜下分别观察，选取精子活力好的雄鱼和卵子形状完整规则并且透明的雌鱼进行I对I人工干法受精，并把雌性和雄性亲鱼分别剪取尾鳍低温保存，并做好记录。在5月至6月共对人工催产后的16000ml卵子进行人工受精，受精率达到60% ;共构建黄姑鱼全同胞家系28个，此方法特别适用于黄姑鱼的遗传育种。
权利要求
1.一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于按以下步骤 (1)将黄姑鱼亲本移入室内大棚中养殖，养殖过程中控制水温在14 19°C之间，溶解氧5. Omg/L以上，养殖密度10 15尾/立方米，日常投喂料中，每隔2 5天加投喂一次冰鲜小杂鱼，投喂量控制在鱼体质量2 3%，所述的冰鲜小杂鱼以带鱼和小黄鱼为主； (2)将选取的黄姑鱼亲本转入室内水泥池进行营养强化，养殖期间控制养殖密度5 10尾/立方米,采用沙滤海水,每天早上换水90%以上,24h充氧，保持水体溶解氧5. Omg/L以上，日常投喂料中，每天加投喂I次缢経，投喂量为鱼体质量4 7%，并在投喂的缢蛏中加入O. 2%的维生素E ； (3)挑选腹部有隆起，用手轻轻触摸腹部较柔软，泄殖孔有微微的突起并且颜色略带红色的亲本作为待催产的亲鱼，即性腺发育成熟至IV期的亲本，用注射用促黄体激素释放激素作为催产剂，对黄姑鱼雌鱼采用两次注射法进行腹腔注射，第一次催产时注射剂量为Ikg亲本注射I μ g催产素，第二次注射时注射剂量为Ikg亲本注射I. 5-2 μ g催产素，对黄姑鱼雄鱼采用一次注射法进行腹腔注射，注射剂量为Ikg亲本注射I μ g催产素； (4)待亲鱼注射完催产素后，立即将它们分别放到不同的催产池中培育，雌鱼的培育池要用黑布将池口遮住，等效应时间过后，对催产后的雄鱼采精，用淡水冲洗雄鱼的泄殖孔，擦净，轻轻挤压腹部，用吸管将精液收集到离心管中暂存，再对催产后的雌鱼取卵，同样用淡水冲洗雌鱼的泄殖孔，擦净，轻轻挤压腹部，用塑料杯收集卵子，将收集好的精液用Hank’s液，按照I :30比例稀释，然后与卵子按照每IOOg卵子加入IOml精液的比例混合，并立即混匀，然后加入少量的海水完成受精，所述的Hank’s液配方为=NaCl 8.01 g/1 ；KC1O.4 g/1 ；CaCl2 0. 14 g/1 ；NaHCO3 0. 35 g/1 ；KH2P04 0 . 06 g/1 ；Glucose 0. 34 g/1 ； pH8.0 ； (5)收集精液和卵子时，分别把每一条雄鱼的精液和雌鱼的卵子都单独保存，在显微镜下分别观察，选取精子活力好的雄鱼和卵子形状完整规则并且透明的雌鱼进行I对I人工受精，并把雌性和雄性亲鱼分别剪取尾鳍低温保存，并做好记录，用于建立家系。
2.如权利要求
I所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(1)中当水温在16°C以上时日常投喂料中，每隔2 3天加投喂一次冰鲜小杂鱼，投喂量控制在鱼体质量2 3%，当水温低于16°C时日常投喂料中，每隔3 5天加投喂一次冰鲜小杂鱼，投喂量控制在鱼体质量2 3%。
3.如权利要求
I所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(2)中在水泥池的四周和顶部以黑布遮光，并在上方Im安装2只60W的日光灯，尽量使灯光在培育池的水面分布均匀，开始每天连续照射8小时，并每隔5天增加I小时，至每日照射14个小时，后维持14小时/天，光照强度为50 IOOLx。
4.如权利要求
I所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(3)所述的注射用促黄体激素释放激素选用注射用促黄体素释放激素A2。
5.如权利要求
I所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(3)所述的雌鱼的第二次注射时间和雄鱼的注射时间都要选在早上的8:00。
6.如权利要求
I所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(4)所述的效应时间为当培育水温为20°C时催产效应时间为31-32h，当培育温度为22°C时催产效应时间为29-30h。
7.如权利要求
I所述的一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，其特征在于步骤(5)所述的I对I人工受精采用的是干法受精。
专利摘要
一种黄姑鱼的人工催产受精及家系建立方法，属于鱼类的养殖技术领域：
。步骤包括1.亲鱼的培育及营养强化；2.催产亲鱼的选择；3.催产剂的选择以及剂量；4.催产时间及温度的选择；5.人工受精及家系建立。本发明在黄姑鱼性腺发育规律的基础上，确定亲本的最佳催产期和催产剂，建立催产亲体培育温度和催产效应时间的关系，催产成功率高，产卵时间统一，产卵量多，实现了对亲本的按需供卵。
文档编号A01K61/00GKCN102870719SQ201210420294
公开日2013年1月16日 申请日期2012年10月29日
发明者楼宝, 薛宝贵, 徐冬冬, 史会来, 詹炜, 辛俭, 毛国民, 祝家俊 申请人:浙江省海洋水产研究所导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan