铁皮石斛组培苗生产方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种中药材组培方法，尤其涉及一种铁皮石斛组培苗生产方法。
【背景技术】
[0002]铁皮石斛(Dendrobiumofficinale)，为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生附生草本植物，别名黑节草；有极丰富的药用价值是我国濒危珍稀的中药材。《本草纲目》记载，铁皮石斛具有“主治伤中、补五脏虚劳、强阴益精、厚肠胃、补内绝不足、平胃气、长肌肉、益智除惊、轻身延年之功效”。其茎干入药，对咽喉疾病、提高人体免疫力乃至肿瘤都具有显著疗效。铁皮石斛生长十分缓慢，种子萌发率极低；在通常栽培条件下需要与某些真菌共生才能萌发，自然繁殖率极低。
[0003]目前，铁皮石斛组培快繁方法大多都选用茎尖、新芽、休眠芽为外植体，通过拟原球茎途径培养；用无菌种子产生原球茎组培方法鲜有报道。
【发明内容】
[0004]为了克服现有技术中存在的缺陷，本发明旨在提供一种铁皮石斛组培苗生产方法，以克服铁皮石斛资源短缺的问题。
[0005]为了实现上述目的，本发明的技术方案包括原球茎诱导、原球茎分化、生根培养、移栽炼苗；其步骤如下:
[0006]I)原球茎诱导:将外植体按无菌播种方式将种子播种于诱导培养基上，20天后诱导出原球茎，再进行30天的增殖扩繁；所述诱导培养为MS、PH值为5.4?6，诱导光照为9h/d、温度为23?28°C、湿度为50?70% ;
[0007]2)原球茎分化:将经过增殖扩繁的原球茎转移至分化壮苗培养基进行45?60天分化培养，将丛芽侧芽分离成单株、进行25天壮苗培养，得带刺小苗；所述分化壮苗培养基为1/2MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.8mg/L、PH值为5.4?6，分化壮苗光照为9h/d、温度为23?28°C、湿度为50?70% ;
[0008]3)将上述带刺小苗转入装有生根培养基的接种瓶中进行60天生根培养，保证每瓶接种8?12丛苗、每丛2?3棵苗；所述生根培养基为MS+NAA0.4 mg /L+100g果蔬汁/L、PH值为5.4?6，生根培养光照为10?llh/d、温度为22?28°C、湿度为40?70% ;
[0009]4)移栽炼苗:挑选出长势一致、茎高5cm以上、根系三条以上的壮苗，洗净生根培养基，将壮苗放入500?800倍代森锰锌液中浸泡10分钟消毒杀菌，然后放在散射光处8?10小时；用多菌灵将表面开有深度为3cm移栽孔的松木皮浸透，将经过消毒杀菌处理的壮苗植入该孔中。
[0010]在上述技术方案中，所述果蔬汁为土豆汁或香蕉汁，以香蕉汁为最佳。
[0011]在上述技术方案的基础上，还可在所述移栽孔中埋填有发酵羊粪。
[0012]与现有技术比较，本发明由于采用了上述技术方案，通过原球茎诱导分化出丛芽，再将丛芽增殖、培养成小苗，因此缩短了生产周期。由于在各阶段采用不同的优化培养基配方，使之在野生种源缺乏及繁殖率低的情况下能够快速繁衍，使该物种的优良性状的保存能够得到保障，同时避免了通过拟原球茎途径造成的周期长的缺点，缩短离体培养时间及生产成本，提高生根率和幼苗移栽率。实践证明，采用本发明方法组培铁皮石斛，原球茎增值系数可达5以上，植物存活率可达90%以上、生根率达100%、产量较自然生长可提高50%左右。
【具体实施方式】
[0013]下面结合具体的实施例对本发明作进一步说明:
[0014]实施例1，具体步骤如下:
[0015]I)原球茎诱导:将外植体按无菌播种方式将种子播种于诱导培养基上，20天后诱导出原球茎，再进行30天的增殖扩繁；所述诱导培养为MS、PH值为5.4?6，诱导光照为9h/d、温度为23?28°C、湿度为50?70% ;
[0016]2)原球茎分化:将经过增殖扩繁的原球茎转移至分化壮苗培养基进行45?60天分化培养，将丛芽侧芽分离成单株、进行25天壮苗培养，得带刺小苗；所述分化壮苗培养基为1/2MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.8mg/L、PH值为5.4?6，分化壮苗光照为9h/d、温度为23?28°C、湿度为50?70% ;
[0017]3)将上述带刺小苗转入装有生根培养基的接种瓶中进行60天生根培养，保证每瓶接种8?12丛苗(小苗12丛、大苗8?10丛)、每丛2?3棵苗；所述生根培养基为MS+NAA0.4 mg /L+100g果蔬汁/L、PH值为5.4?6，生根培养光照为10?llh/d(小苗10h、大苗Ilh)、温度为22?28°C、湿度为40?70% ;
[0018]转接苗必须注意:所接苗不可整丛接入或株苗带有整块未分化完全的球茎，必须单株接入；组培苗接在瓶内要均匀、整齐、直立；
[0019]4)移栽炼苗:挑选出长势一致、茎高5cm以上、根系三条以上的壮苗，洗净生根培养基，将壮苗放入500?800倍代森锰锌液中浸泡10分钟消毒杀菌，然后放在散射光处8?10小时，备用；
[0020]5)基质采用三层松木皮组合而成，底层为5?1cm大小的松木皮、中层和上层采用3?5cm大小的松木皮，在所述基质上开设深度为3cm移栽孔；用多菌灵将基质浸透，将经过消毒杀菌处理的壮苗植入该孔中；
[0021]5)管理:种植一月内小苗，保持基质潮润状态，一周后可喷洒MS全营养液1000倍液；空气湿度维持在70?85%，光照80%的折光率，温度控制在25?30°C。
[0022]实施例2，各步骤同实施例1 ;其中，所述移栽孔中埋填有发酵羊粪。
[0023]在上述各实施例中，所述果蔬汁为土豆汁或香蕉汁，以香蕉汁为最佳。
【主权项】
1.一种铁皮石斛组培苗生产方法，包括原球茎诱导、原球茎分化、生根培养、移栽炼苗；其特征在于:步骤如下: 1)原球茎诱导:将外植体按无菌播种方式将种子播种于诱导培养基上，20天后诱导出原球茎，再进行30天的增殖扩繁；所述诱导培养为MS、PH值为5.4?6，诱导光照为9h/d、温度为23?28°C、湿度为50?70% ; 2)原球茎分化:将经过增殖扩繁的原球茎转移至分化壮苗培养基进行45?60天分化培养，将丛芽侧芽分离成单株、进行25天壮苗培养，得带刺小苗；所述分化壮苗培养基为1/2MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.8mg/L、PH值为5.4?6，分化壮苗光照为9h/d、温度为23?28°C、湿度为50?70% ; 3)将上述带刺小苗转入装有生根培养基的接种瓶中进行60天生根培养，保证每瓶接种8?12丛苗、每丛2?3棵苗；所述生根培养基为MS+NAA0.4 mg /L+100g果蔬汁/L、PH值为5.4?6，生根培养光照为10?llh/d、温度为22?28°C、湿度为40?70% ; 4)移栽炼苗:挑选出长势一致、茎高5cm以上、根系三条以上的壮苗，洗净生根培养基，将壮苗放入500?800倍代森锰锌液中浸泡10分钟消毒杀菌，然后放在散射光处8?10小时；用多菌灵将表面开有深度为3cm移栽孔的松木皮浸透，将经过消毒杀菌处理的壮苗植入该孔中。
2.根据权利要求1所述的铁皮石斛组培苗生产方法，其特征在于:所述果蔬汁为土豆汁或香蕉汁。
3.根据权利要求1或2所述的铁皮石斛组培苗生产方法，其特征在于:所述移栽孔中埋填有发酵羊粪。
【专利摘要】本发明公开了一种铁皮石斛组培苗生产方法，属于中药材组培方法；旨在提供一种快速繁衍铁皮石斛的方法。它包括原球茎诱导、原球茎分化、生根培养、移栽炼苗；具体是：将外植体按无菌播种方式将种子播种于诱导培养基上，诱导出原球茎、并进行增殖扩繁；将增殖扩繁的原球茎转移至分化壮苗培养基进行分化培养，将丛芽侧芽分离成单株壮苗培养；将带刺小苗转入接种瓶中进行生根培养；挑选出壮苗，洗净生根培养基后进行消毒杀菌处理；将壮苗移栽松木皮基质上。采用本发明方法组培铁皮石斛，原球茎增值系数可达5以上，植物存活率可达90％以上、生根率达100％、产量较自然生长可提高50％左右；是一种快速繁衍铁皮石斛的方法。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104542286
【申请号】CN201410849414
【发明人】王发松
【申请人】贵州润芝霖生态农业科技开发有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月31日