一种松毛虫质型多角体病毒油剂及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明属微生物制剂加工技术领域，具体涉及松毛虫防治的病毒杀虫剂油剂的制备方法以及应用。
【背景技术】
[0002]松毛虫质型多角体病毒(DendrolimusCytoplasmic Polyhedrosis Virus,DCPV)是松毛虫的一种天然病原体，松毛虫质型多角体病毒对防治松毛虫具有持续高效、对人畜安全无毒等特点，并且不污染环境，生产时无需三废处理。松毛虫质型多角体病毒为中肠感染型病毒，只在寄主中肠上皮细胞中复制。松毛虫质型多角体病毒的生产过程实际上是把感染松毛虫质型多角体病毒的松毛虫中肠中的该病毒多角体从虫体中分离出来并与其它固相物质(松毛虫虫体组织碎片等)分开，然后加以浓缩，加入一定的助剂制成剂型。
[0003]现有技术“松毛虫质型多角体病毒油剂的生产方法”(专利号为ZL03114048.3，CN1282416C,授权公告日2006年11月I日)包括切片、洗脱、过滤、沉降、离心分离、混配、检测、稀释、分装工序。所制备的油剂解决了易沉淀分层、阻塞喷头的问题，满足了超低容量喷雾的要求，具有杀虫率高、不污染环境、对人畜安全、生产成本低的特点。但由于该方法生产的松毛虫病毒油剂多角体含量低，林间应用时，用量大；保质期较短(1-2年)，其病毒1-2年就失去活性，该剂型仍然存在恶臭、异味大，使操作人员工作环境恶劣，影响工作效率，不利于操作人员健康，阻碍了其在生产上的推广和使用。因此，急待解决这些技术问题，以便能更高效便捷地推广使用松毛虫病毒产品。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种新型的松毛虫质型多角体病毒油剂及其制备方法和应用，以满足生产上大规模应用的需求。
[0005]本发明的技术方案如下:
[0006]1、一种松毛虫质型多角体病毒油剂的制备方法，包括依次进行的浸泡、切碎、洗脱过滤、离心分离、真空干燥、混配、分装各步骤，其特征在于:
[0007]所述浸泡是:将感染了松毛虫质型多角体病毒的松毛虫用清水浸泡14-16天；
[0008]所述洗脱过滤是:将经浸泡后切碎的松毛虫置于搅拌机中，加入清水搅拌后，转入脱水机中，用400-600转/分钟的转速，在脱水机出液口用20目尼龙纱网滤后得粗滤液，再将，在粗滤液放入脱水机中，用400-600转/分钟的转速，在脱水机出液口用120目滤网将粗滤液过滤得合格滤液；
[0009]所述离心分离是:将合格滤液用分离机在6800转/分的转速分离得到松毛虫质型多角体病毒浓缩液I;
[0010]所述真空干燥是:将松毛虫质型多角体病毒浓缩液I放入真空干燥机中，调整温度28-35°C之间，负0.9个大气压下，真空干燥10-15小时得松毛虫质型多角体病毒浓缩液II ；
[0011]所述混配是:将松毛虫质型多角体病毒浓缩液II置于真空干燥机的料罐中，按每100公斤松毛虫质型多角体病毒浓缩液II加入30公斤皂化甘油的比例加入皂化甘油，再按每100公斤松毛虫质型多角体病毒浓缩液II加入500克细度为120目以上的分析纯活性炭的比例加入所述细度为120目以上的分析纯活性炭，关好料罐，启动运转真空干燥机，运转过程中通过停机打开料罐取样，在600倍生物显微镜下，采用计数室法测定松毛虫质型多角体病毒含量，松毛虫质型多角体病毒的含量为15亿PIB/ml以上时，停止运转、分装即得松毛虫质型多角体病毒油剂。
[0012]2、技术方案I所述一种松毛虫质型多角体病毒油剂的制备方法获得的松毛虫质型多角体病毒油剂。
[0013]3、技术方案2所述一种松毛虫质型多角体病毒油剂的制备方法获得的松毛虫质型多角体病毒油剂在防治松毛虫的应用。
[0014]4、根据技术方案3所述一种松毛虫质型多角体病毒油剂的制备方法获得的松毛虫质型多角体病毒油剂在防治松毛虫的应用是沿林间路两边条状喷施所述松毛虫质型多角体病毒油剂。
[0015]与现有技术相比，本发明的主要创新点和有益效果是:
[0016]1、采用采用真空干燥，大量出去了现有松毛虫质型多角体病毒油剂的恶臭味(大的负压下真空干燥，使病毒液中的大量真菌和细菌失活，从而使病毒液停止腐败，同时负压下真空干燥抽出病毒液中的大量异味物质，使产品异味大大减小)，使工作人员喷施该油剂的工作环境得到了净化，在保证效果的前提下，解决了原来病毒产品含量低、恶臭、异味大等产品难以推广使用的问题。同时，本发明所采用的松毛虫病毒真空干燥提取加工技术，能够去除病毒液中的大量真菌和细菌，从而显著提高了病毒多角体的含量。
[0017]2、采用加入活性炭的方式，保护了松毛虫质型多角体病毒的活性，增强了产品的保质期，使所生产的油剂产品保质期达到3-4年(皂化甘油和活性炭都对多角体病毒起到保护作用，同时真空干燥使水份大量减少，降低了病毒多角体的水解作用，从而也使病毒油剂保存期延长)，即3-4年该油剂中病毒仍具有活性，而现有的松毛虫质型多角体病毒油剂由于没有保护该病毒的措施，使松毛虫质型多角体病毒油剂见光易分解死亡，保质期只有1-2 年。
[0018]3、本发明生产的油剂，防治松毛虫效率特别高，防治(喷施)一次可保松林5年以上松毛虫不成灾，达到事半功倍的效果。
[0019]本发明采用浸泡、切碎、洗脱过滤、离心分离、真空干燥、混配病毒保护剂、产品质检、分装等步骤，使本发明生产的松毛虫质型多角体病毒油剂的病毒多角体含量显著提高，使本制剂的致病力明显增强，另外，本发明生产的病毒油剂在林间的活力期明显延长(抗紫外线的能力加强)，使本制剂病毒的传染力明显增强，就可使松毛虫病毒感病率达到95%以上，使感染该毒病的松毛虫丧失了损害松林的损害能力，当年感染该病毒的松毛虫之后死亡虫落于林间，病毒多角体可在林中保存多年，第2年和之后多年都对林间松毛虫有持续控制效果，并且受该病毒感染的松毛虫还会传染给下一代，因此，本发明方法生产的油剂防治松毛虫效率特别高，只需喷施一次，在第2年和之后多年都对林间松毛虫都有持续控制效果，在第2年只有少部分虫，第3年难以找到虫，其后持续控制多年，可达5年以上的防治效果，达到事半功倍的效果。此外，本病毒制剂保质期达3-4年，生产一批产品，可多年使用，显著降低了病毒的生产成本，大大提高了产品的防治效率。而现有松毛虫质型多角体病毒油剂由于病毒多角体含量低，且多角体在林间容易失活，第一次施用，仅有少量松毛虫死亡，因此，该油剂需要在林间连续喷施3年以上，才能达到控制松毛虫的目的；而且，现有松毛虫质型多角体病毒油剂的保质期仅1-2年，较短的保质期使病毒的生产成本大大增加。
[0020]综上所述，本发明方法制得的松毛虫质型多角体病毒油剂，除去了恶臭异味，使该产品易于推广应用。制成的油剂的病毒多角体含量高，致病力强，延长了油剂的保质期，可保质3-4年。使用本发明油剂可使松毛虫病毒感病率达到95%以上，防治一次，持续防治效果可达5年以上。克服了现有松毛虫质型多角体病毒油剂多角体含量低，且恶臭异味大，工作人员工作环境恶劣，阻碍了油剂的推广应用，病毒活力低，使用时需多次大面积面面俱到喷施才可有效防治松毛虫，施用成本高，较难在林间操作，保质期只有1-2年，相对生产成本较高的缺陷和不足。
[0021]在收集感染松毛虫质型多角体病毒的松毛虫时，需使用喷洒了松毛虫质型多角体病毒的带新鲜针叶的松枝进行喂养接种，该松毛虫质型多角体病毒(DendrolimusCytoplasmic polyhedrosis Virus，DCPV)已在发明名称为“松毛虫质型多角体病毒油剂的生产方法”，专利号为ZL03114048.3，CN1282416C,授权公告日2006年11月I日的中国专利公开，本申请人云南省林业科学院保存有上述生物材料，申请人云南省林业科学院保证自本专利申请日起20年内向公众发放。申请人地址:云南省昆明市盘龙区蓝桉路2号，邮编:650201 ο
【具体实施方式】
[0022]以下各实施例无特殊说明为常规方法。
[0023]实施例1
[0024]1、感染松毛虫质型多角体病毒的松毛虫的收集
[0025](I)野外大围栏复制:每年开春，在松毛虫越冬代为害较为严重的4月初，采集4龄左右活松毛虫，放入事先设置好的处于平坦地方的大围栏内。围栏设置大小因地制宜，一般0.5-2.0亩，在围栏中放入喷洒了松毛虫质型多