年6月和2014年6月应用制霉菌素进行了不同用药方式防治 青蟹苗种真菌病的生产性试验。两次试验均利用两口规格为15m2(3mX5mX1.4m)的室外 育苗池。其中，2013年采用常规用药，即全池泼洒方式，试验面积30m2 (两口池）；2014年采 用本发明用药方式，试验面积60m2 (两口池各重复一次）。两种用药方式的幼体放养密度均 为8万只/m3;以轮虫、卤虫无节幼体作为青蟹Zl~M(大眼幼体）培育阶段的主要生物饵 料。试验期间，常规用药方式在用药期间的换水次数和换水量高于本发明用药方式，本发明 用药方式在Z3之前仅少量加水，不换水。饵料维持密度、光照强度、盐度、温度等管理措施 两者基本相同。
[0025] 常规用药方式育苗试验在蟹苗由Zl变态至Z2的当天下午用药，为节约用药量，用 药前将苗池水位由80cm降至55cm，按25000IU/L终浓度将400片制霉菌素片（500000IU/ 片）（浙江震元制药有限公司，制霉素片，国药准字H33021393)置于250目筛网中加淡水浸 泡、溶解后泼洒入池。药浴3h后，连续2次换水洗除育苗水体中残留药液，之后按正常育苗 方式管理。
[0026] 经本发明用药方式药浴处理后的Zl初孵幼体放入苗池后采用正常育苗方式管 理。
[0027] A、抱卵亲蟹孵出幼体前夕，将其放入400L圆形平底孵化桶内，每个孵化桶内抱卵 亲蟹放养量视个体大小而定：亲蟹个体重300g以上（抱卵数量200万粒以上），1只/桶； 小于300g(抱卵数量150万粒以下），2只/桶。黑暗条件下充气待产。
[0028]B、当幼体全部孵出后，将亲蟹取出，停气，顺时针搅动水体，采用虹吸法去除集聚 一起的死卵、粪便等杂物后，按25000IU/L终浓度将20片（500000IU/片）制霉菌素片置于 250目筛网中，用淡水浸泡、溶解、过滤后泼洒入孵化桶。充气、黑暗条件下药浴3h后停止充 气，用水勺捞取趋光上浮的蟹苗放入育苗池，按常规育苗方法培育蟹苗。
[0029] 生产性试验结果表明：采用常规用药方式的两口育苗池Zl幼体能正常变态至Z2， 变态成活率分别为80%和85%，平均82. 5%，Z2~Z3的变态成活率分别为33%和40%， 平均36. 5%。育苗结束时，两口试验苗池分别收获大眼幼体8万只和15万只，单位水体出 苗5925只/m3和11111只/m3,平均8518只/m3;采用本发明用药方式的四口苗池，Zl~Z2 的变态成活率均在90%左右，Z2~Z3的变态成活率为70%~85%，平均78. 5%，各期变 态成活率显著高于常规用药。育苗结束时，四口试验苗池分别收获大眼幼体15~30万只 /池，平均22. 75万只/池，单位水体平均出苗16852只/m3 (大眼幼体按10万只/500g计 算）。
[0030] 综观制霉菌素的应用效果，两种用药方式下的试验结果均优于使用甲醛处理待产 抱卵亲蟹的真菌病防治方式，制霉菌素可认为是防治青蟹苗种真菌病的理想药品；在使用 方法上，与常规用药方式相比，本发明用药方式下的青蟹初期幼体变态成活率高，单位水体 出苗量提高近一倍，具有简便、有效和节约成本的现实意义。
[0031] 实施例2
[0032] 针对青蟹Zl初孵幼体和Z2初期幼体两个不同发育阶段进行了制霉菌素真菌防治 效果试验，最终确定Zl初孵幼体为制霉菌素适宜用药阶段。
[0033] 具体试验步骤为：分别取青蟹Zl初孵幼体、Z2初期幼体120只，各设三个实验组， 以40只为一组放入体积为IL的烧杯中，烧杯内制霉菌素的终浓度为25000IU/L。试验阶段 以轮虫为饵料，充气，保持水体中溶氧量>5mg/L，所有烧杯浸泡于于800L的圆形平底塑料 桶内，以保证烧杯内水体温度较为恒定，维持在28~30°C。整个试验持续72h，每24h检查 烧杯内青蟹幼体的变态和存活情况，计算不同实验组Zl~Z2，Z2~Z3的变态成活率，同时 更换烧杯内水体和饵料，以保证水体内制霉菌素的药物浓度，并保持水质清新。实验结果如 下表1 :
[0034] 表1不同幼体阶段制霉菌素处理后Zl~Z2和Z2~Z3平均变态成活率
[0035]
[0036] 试验结果显示在Zl初孵幼体阶段用药相对于Z2初期幼体阶段青蟹幼体Zl~Z2、 Z2~Z3的变态成活率显著较高，由此确定Zl初孵幼体为制霉菌素的适宜用药阶段。
[0037] 实施例3
[0038] 以Zl初孵幼体为试验对象，5000IU/L(国际单位/L)为浓度梯度，在0~50000IU/ L用药浓度范围内进行了 72h的制霉菌素安全性和有效性试验，最终确定将Zl初孵幼体置 于制霉菌素25000IU/L水体中药浴3h后按常规方法培育蟹苗可有效防止真菌病发生。
[0039] 具体的试验步骤为：以Zl初孵幼体为试验对象，以IL体积的烧杯为实验容器，设 定制霉菌素浓度梯度如下：0IU/L、5000IU/L、10000IU/L、15000IU/L、20000IU/L、25000IU/ L、30000IU/L、40000IU/L、50000IU/L;每个药物浓度下设置3个平行，每个烧杯中投放40只 Zl初孵幼体，烧杯内充气，保持溶氧量>5mg/L，所有烧杯浸泡于于800L的圆形平底塑料桶 内，以保证烧杯内水体温度较为恒定，维持在28~30°C。药浴3h后将各实验组水体更换为 无制霉菌素添加的消毒沙滤水，随后开始养殖试验。整个试验持续72h，以轮虫为饵料，每 24h检查烧杯内青蟹幼体的变态和存活情况，同时更换烧杯内水体和饵料，以保持水质清新 和适当的饵料密度。试验结果如下表2:
[0040] 表2不同浓度制霉菌素处理后24-72h青蟹幼体平均存活率 [0041 ]
[0042] 试验结果显示：整个试验过程中，通过制霉菌素3h药浴处理后的Zl初孵幼体存活 率显著提高，并在制霉菌素药物浓度>25000IU/L时幼体存活率稳定在80%以上，考虑到制 霉菌素药物浓度超过25000IU/L后幼体存活率基本稳定，为节约用药成本，确定25000IU/L 为养殖生产过程中制霉菌素的最佳使用浓度。
【主权项】
1. 一种防治拟穴青蟹苗种真菌病的方法，按照下述步骤进行： A、 将抱卵亲蟹放入400L圆形平底孵化桶内，每个孵化桶内抱卵亲蟹放养量视个体大 小而定：亲蟹个体重300g以上，抱卵数量200万粒以上，1只/桶；小于300g，抱卵数量150 万粒以下，2只/桶；黑暗条件下充气待产； B、 当幼体全部孵出后，将亲蟹取出，停气，顺时针搅动水体，采用虹吸法去除集聚一起 的死卵、粪便，按25000IU/L的终浓度将制霉菌素片置于250目筛网中，用淡水浸泡、溶解、 过滤后泼洒入孵化桶；充气、黑暗条件下药浴3h后停止充气，捞取趋光上浮的蟹苗放入育 苗池，按常规育苗方法培育蟹苗。2. 根据权利要求1所述的一种防治拟穴青蟹苗种真菌病的方法，其特征在于，其中步 骤A中充气待产时，保持溶氧量>5mg/L，水温28~30°C。3. 根据权利要求1所述的一种防治拟穴青蟹苗种真菌病的方法，其特征在于，其中步 骤B中制霉菌素片用淡水冲洗掉肠衣，浸泡后使用250目筛絹搓洗过滤。4. 根据权利要求1所述的一种防治拟穴青蟹苗种真菌病的方法，其特征在于，其中步 骤B中药浴时，保持溶氧量>5mg/L，水温28~30°C。
【专利摘要】本发明提供了一种有效防治拟穴青蟹苗种真菌病的方法，属于海水蟹类繁育技术领域。本发明以Z1初孵幼体为试验对象，5000IU/L(国际单位/L)为浓度梯度，在0～50000IU/L用药浓度范围内进行了72h的制霉菌素安全性和有效性试验，最终确定将Z1初孵幼体置于制霉菌素25000IU/L水体中药浴3h后按常规方法培育蟹苗可有效防止真菌病发生。本发明将蟹苗药浴处理与苗种培育分开进行的方式，可完全避免因用药而产生的上述副作用。
【IPC分类】A01K61/00, A61K31/7048, A61P31/10
【公开号】CN105028261
【申请号】CN201510338729
【发明人】王伟, 马凌波, 顾孝连, 蒋科技, 乔振国
【申请人】中国水产科学研究院东海水产研究所
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年6月18日