浮于灭菌后的包埋剂中，同时加入过滤灭菌的四环素l〇〇mg/L和硫酸链霉 素100mg/L;然后，用直径为5mm的滴管吸取带胚状体的液滴，滴入已灭菌的2%氯化钙溶液 中，约l〇-15min后，倒去氯化妈溶液，用无菌水冲洗20min，得到八角莲人工种子。
[0045] 3)人工种子后处理：在得到的八角莲人工种子表面喷洒浓度2. 5_40g/L的普鲁兰 多糖溶液，待干燥后放入无菌的三角瓶中，用封口膜封好，在4°C的冰箱中贮藏30天左右， 即得到所述的人工种子。普鲁兰多糖溶液可以保持人工种子的水分，克服海藻酸钠+氯化 f丐包裹系统易失水的缺点，提尚人种子的明发率。
[0046] 实例 1
[0047] -、制作八角莲人工种子
[0048] 1)八角莲体细胞胚胎的诱导
[0049] 将八角莲松散的胚性愈伤组织转入分化培养基MS+1.Omg/L6-BA+2.Omg/LNAA的 培养基上，暗培养20d后，组织结构的质地紧密，愈伤组织表面形成一堆堆较为松散的结节 状突起。随着暗培养时间的延长，结节状突起大部分分化出胚状体，有少量则分化出根，所 述胚状体即为体细胞胚胎，培养条件为：暗培养，温度22°C±2°C，培养周期20d。
[0050] 2)体细胞胚胎液体增殖培养
[0051] 将继代 4 代的胚状体转接到MS+1.Omg/L6-BA+l.Omg/LNAA+2.Omg/L2， 4-D+O. 5mg/LABA的液体培养基中悬浮培养，同时使用搅拌机搅拌。每个250mL三角瓶装培 养液100mL，接种量体细胞胚胎的重量为8g。培养条件为：暗培养，温度22°C±2°C，培养周 期20d，搅拌机转速为120r/min。
[0052] 3)包埋剂的制作
[0053] 以1/21^+0.511^/16-8厶+0.511^/16厶3+0.511^/118厶+158/1麦芽糖+0.5%多菌灵 +0. 5%活性炭为人工胚乳，并按4%比例加入海藻酸钠粉末后，混合加热使之成溶胶状态， 即包埋剂，所述包埋剂的pH= 5. 8,包埋剂经121°C高压灭菌20min后，冷却备用。
[0054] 4)八角莲人工种子的制作
[0055] 在已进行灭菌的超净工作台上，将液体培养的3_5mm胚状体在100目的镍网上过 滤后，均匀悬浮于灭菌后的包埋剂中，同时加入过滤灭菌的四环素l〇〇mg/L和硫酸链霉素 100mg/L;然后，用直径为5mm的滴管吸取带胚状体的液滴（确保每个液滴含有1个胚状 体），滴入已灭菌的2%氯化钙溶液中，经过约15min的离子交换后，倒去氯化钙溶液，用无 菌水冲洗20min，即可得到八角莲人工种子。
[0056] 5)八角莲人工种子后处理：在八角莲人工种子表面喷洒30g/L的普鲁兰多糖溶 液，待干燥后放入无菌的三角瓶中，用封口膜封好，在4°C的冰箱中贮藏30天即得到所述的 人工种子。
[0057] 二、八角莲人工种子表面喷洒普鲁兰多糖溶液的对比实验
[0058] 在八角莲人工种子表面喷洒普鲁兰多糖溶液，待干燥后放入无菌的三角瓶中，用 封口膜封好，在4°C的冰箱中贮藏。普鲁兰多糖的浓度设计为5个梯度：0g/L、10g/L、30g/ L、50g/L、100g/L。每个浓度处理50粒种子。
[0059] 30天后，将本实验中的人工种子接种到有5cm厚的腐殖土育苗盆中，密度为1粒/ cm2,深度为0. 5cm。培养条件为：25°C恒温光/暗交替培养，湿度为85%，30天后观察种子 的转化情况，统计萌发率。实验结果见表1。
[0060] 转发率的统计依据：将八角莲人工种子接种于腐殖土中，恒温培养1个月后，统计 转发率，以体胚产生子叶和根作为转化成功的标准。
[0061]表1八角莲人工种子表面喷洒普鲁兰多糖溶液的对比实验
[0062]
[0063]
[0064] 由表1可知，普鲁兰多糖可以保持人工种子的水分，克服海藻酸钠+2%氯化钙包 裹系统易失水的缺点，提尚人种子的明发率。
[0065] 实施例2
[0066] 一、制作八角莲人工种子
[0067] 1)八角莲体细胞胚胎的诱导
[0068] 将八角莲松散的胚性愈伤组织转入分化培养基MS+0. 8mg/L 6-BA+l. 5mg/LNAA的 培养基上，暗培养20d后，组织结构的质地紧密，愈伤组织表面形成一堆堆较为松散的结节 状突起。随着暗培养时间的延长，结节状突起大部分分化出胚状体，有少量则分化出根，所 述胚状体即为体细胞胚胎，培养条件为：暗培养，温度22°C±2°C，培养周期15-20d。
[0069] 2)体细胞胚胎液体增殖培养：
[0070] 将继代 3 代的胚状体转接到MS+0. 8mg/L6-BA+O. 8mg/LNAA+1. 5mg/L2， 4-D+O. 4mg/LABA的液体培养基中悬浮培养，同时使用搅拌机搅拌。每个250mL三角瓶装培 养液100mL，接种量体细胞胚胎的重量为7g。培养条件为：暗培养，温度22°C±2°C，培养周 期10 - 20d，搅拌机转速为120r/min。
[0071] 3)包埋剂的制作
[0072] 以1/21^+0.511^/16-8八+0.511^/16八3+0.511^/118八+158/1麦芽糖+0.4%多菌灵 +0. 5%活性炭为人工胚乳，并按3%比例加入海藻酸钠粉末后，混合加热使之成溶胶状态， 即包埋剂，所述包埋剂的pH = 5. 8,包埋剂经121°C高压灭菌20min后，冷却备用。
[0073] 4)八角莲人工种子的制作
[0074] 在已进行灭菌的超净工作台上，将液体培养的3_5mm胚状体在100目的镍网上过 滤后，均匀悬浮于灭菌后的包埋剂中，同时加入过滤灭菌的四环素l〇〇mg/L和硫酸链霉素 100mg/L;然后，用直径为5mm的滴管吸取带胚状体的液滴（确保每个液滴含有1个胚状 体），滴入已灭菌的2%氯化钙溶液中，经过约13min的离子交换后，倒去氯化钙溶液，用无 菌水冲洗20min，即可得到八角莲人工种子。
[0075] 5)人工种子后处理：在八角莲人工种子表面喷洒30g/L的普鲁兰多糖溶液，待干 燥后放入无菌的三角瓶中，用封口膜封好，在4°C的冰箱中贮藏30天左右即得到所述人工 种子。
[0076] 二、八角莲人工种子表面喷洒普鲁兰多糖溶液的对比实验
[0077] 在八角莲人工种子表面喷洒普鲁兰多糖溶液，待干燥后放入无菌的三角瓶中，用 封口膜封好，在4°C的冰箱中贮藏。普鲁兰多糖的浓度设计为5个梯度：0g/L、10g/L、30g/L、50g/L、100g/L。每个浓度处理50粒种子。
[0078] 30天后，将本实验中的人工种子接种到有5cm厚的腐殖土育苗盆中，密度为1粒/ cm2,深度为0. 5cm。培养条件为：25°C恒温光/暗交替培养，湿度为85%，30天后观察种子 的转化情况，统计萌发率。实验结果见表1。
[0079] 转发率的统计依据：将八角莲人工种子接种于腐殖土中，恒温培养1个月后，统计 转发率，以体胚产生子叶和根作为转化成功的标准。
[0080] 表2八角莲人工种子表面喷洒普鲁兰多糖溶液的对比实验
[0081]
[0082] 由表2可知，普鲁兰多糖可以保持人工种子的水分，克服海藻酸钠+2%氯化钙包 裹系统易失水的缺点，提尚人种子的明发率。
[0083] 实施例3
[0084] 一、制作八角莲人工种子
[0085] 1)八角莲体细胞胚胎的诱导
[0086] 将八角莲松散的胚性愈伤组织转入分化培养基MS+0. 5mg/L6-BA+lmg/LNAA的培 养基上，暗培养20d后，组织结构的质地紧密，愈伤组织表面形成一堆堆较为松散的结节状 突起。随着暗培养时间的延长，结节状突起大部分分化出胚状体，有少量则分化出根，所述 胚状体即为体细胞胚胎，培养条件为：暗培养，温度22°C±2°C，培养周期15-20d。
[0087] 2)体细胞胚胎液体增殖培养：
[0088] 将继代 4 代的胚状体转接到MS+0. 5mg/L6-BA+O. 5mg/LNAA+lmg/L2， 4-D+O. 2mg/LABA的液体培养基中悬浮培养，同时使用搅拌机搅拌。每个250mL三角瓶装培 养液100mL，接种量体细胞胚胎的重量为5g。培养条件为：暗培养，温度22°C±2°C，培养周 期15D，搅拌机转速为120r/min。
[0089] 3)包埋剂的制作
[0090] 以1/21^+0.511^/16-8厶+0.511^/16厶3+0.511^/118厶+158/1麦芽糖+0.3%多菌灵 +0. 3%活性炭为人工胚乳，并按4%比例加入海藻酸钠粉末后，混合加热使之成溶胶状态， 即包埋剂，所述包埋剂的pH= 5. 8,包埋剂经121°C高压灭菌20min后，冷却备用。
[0091] 4)八角莲人工种子的制作
[0092] 在已进行灭菌的超净工作台上，将液体培养的3_5mm胚状体在100目的镍网上过 滤后，均匀悬浮于灭菌后的包埋剂中，同时加入过滤灭菌的四环素l〇〇mg/L和硫酸链霉素 lOOmg/L;然后，用直径为5mm的滴管