一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方 法。
【背景技术】
[0002] 合柱金莲木，拉丁学名为Sauvagesiarhodoleuca(Diels)M.C.E?，又名辛木，属金 莲木科（Ochnaceae)落叶小灌木，为我国特有的单种属植物。合柱金莲木以根莖入药，具有 止痒杀虫等功效。由于合柱金莲木形态特征与南美洲产的Wallacea属植物很接近，因此， 它的存在对于进一步研究本科植物的区系、地理分布及其发生与演化等具有重要的科学意 义。
[0003] 合柱金莲木主要分布于广西金秀、龙胜、融水、德保和广东的封开、连山、怀集等 地。常生长在海拔200_1000m的中、低山区，呈片状生于密林或疏林下。由于森林砍伐，生 境破坏和挖取根茎入药，致使植株日趋减少，有面临绝灭的危险，因此于1999年被列入《国 家重点保护野生植物名录（第1批）》中，为国家一级重点保护野生植物。在自然条件下， 合柱金莲木主要依靠种子进行繁育，但种子微小，且果实成熟后即开裂散落的特性常造成 种子产量低，生产上难以实现大面积栽培。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法，能够有效快速地 提高合柱金莲木种苗的繁殖速度和质量，实现合柱金莲木优质种苗的工厂化育苗，以满足 生产上的需要。
[0005] 本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种合柱金莲木组织培养快速繁殖方 法，包括以下步骤：
[0006] (1)外植体的选择与消毒：选取合柱金莲木种子作为外植体，依次用2%洗洁精水 溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了 2-3滴吐温-20的100毫升0. 1 %升汞消 毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，所述无菌水为 经高压灭菌的蒸馏水；
[0007] (2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤⑴得到的外植体接种到MS培养基中，在 培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养20天，种 子发芽后获得无菌试管苗，所述MS培养基中添加1. 5mg/L灵发素LFS、0. 5mg/L的6-苄基 腺嘌呤6-BA、0. lmg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和4. 5g/L的琼脂，培养基的pH值为5. 8 ;
[0008] (3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤（2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培 养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养 30天得到试管苗丛生芽，所述MS繁殖培养基中添加1. 0-2.Omg/L灵发素LFS、0. 5-1. 5mg/L 的6-苄基腺嘌呤6-BA、0. 3-0. 5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖、4. 5g/L的琼脂和lg/L的活 性炭，培养基的pH值为5.8 ;
[0009] (4)丛生芽壮苗培养：将步骤（3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中， 在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得 到健壮植株，所述MS壮苗培养基中添加1. Omg/L灵发素LFS、1. Omg/L的萘乙酸NAA、0. 5mg/ L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖、4. 5g/L的琼脂和lg/L的活性炭，培养基的pH值为5. 8 ;
[0010] (5)健壮植株生根培养：将步骤⑷中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中， 在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得 到带根的完整植株，所述1/2MS生根培养基中添加0. 1-1. Omg/L灵发素LFS、0. 5-2. Omg/L 的吲哚丁酸IBA、0. 1-0. 3mg/L的ABT 1号生根粉、30g/L蔗糖、4. 5g/L的琼脂和lg/L的活 性炭，培养基的pH值为5.8 ;
[0011] (6)炼苗与移栽：步骤（5)获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内打开瓶 盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即 移栽到细河沙：泥炭土 = 1:2的苗床中，在苗床中生长一个月后移栽大田，移栽后一个星期 内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次lOmin，此后每天早8点、晚6点各喷雾1次，每次 lOmin;移栽时的温度条件为20-25°C，相对湿度75-90%，遮阳率为60-80%。
[0012] 本发明的突出优点在于：
[0013] (1)采用生物技术对合柱金莲木进行组织培养快速繁殖，保持了原有品种的优良 性状，在短时间内培育出大量可供大田栽培的合柱金莲木幼苗，具有繁育速度快、种苗质量 均一，且不受时间、空间和季节限制等突出优点，缩短了种苗繁育周期，提高了种苗质量和 种苗繁殖系数，适用于工厂化生产，从而满足生产上的需要。
[0014] (2)在MS诱导培养基中添加灵发素、6-苄基腺嘌呤和萘乙酸，能够诱导不定芽萌 发；在MS增殖培养基中添加灵发素、6-苄基腺嘌呤和激动素可促进不定芽的分化和生长； 在MS壮苗培养基中添加灵发素、萘乙酸和吲哚乙酸可促进苗壮和芽的再次增殖；在1/2MS 生根培养基中添加灵发素、吲哚丁酸和ABT 1号生根粉可获得完整的带根苗，经炼苗后可 直接移栽至苗床中。
[0015] (3)采用本发明所述的培养方法得到的丛生芽增殖系数高达16倍，经过扩繁、壮 苗和生根培养，组培苗生根率达78. 87%以上，移栽苗床后成活率在91. 7%以上。本发明提 供的合柱金莲木的组织培养方法能够快速、便捷、高效地繁殖出大量适合移栽的优良合柱 金莲木种苗，满足生产上的需要。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0017] 本发明所述的合柱金莲木组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
[0018](1)外植体的选择与消毒：选取合柱金莲木种子作为外植体，依次用2%洗洁精水 溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了 2-3滴吐温-20的100毫升0. 1 %升汞消 毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，所述无菌水为 经高压灭菌的蒸馏水；
[0019] ⑵种子萌发获得无菌试管苗：将步骤⑴得到的外植体接种到MS培养基中，在 培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养20天，种 子发芽后获得无菌试管苗。所述MS培养基中添加1. 5mg/L灵发素LFS、0. 5mg/L的6-苄基 腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和4. 5g/L的琼脂，培养基的pH值为5. 8 ;
[0020] (3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤（2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培 养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养 30天得到试管苗丛生芽。所述MS繁殖培养基中添加如表1所示的