一种伞房花耳草组培苗的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种伞房花耳草组培苗的快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]伞房花耳草，拉丁学名Oldenlandia corymbosa L.，又名蛇舌草、水线草，为茜草科耳草属植物，分布于我国南方各省，产量较大，其干燥全草入药，药材中含有多种三萜类化合物，其中乌索酸含量最高，为其主要活性成分。药理研究发现，乌索酸具有抗肿瘤、抗肝炎、抗病毒、抑菌等多种药理作用，具有重要的开发应用价值。目前伞房花耳草药材及种苗主要来源于野生资源，还没有人工繁育及人工种植技术的报道。为了防止伞房花耳草野生资源遭到严重的人为破坏，保证伞房花耳草资源的可持续利用，需要对伞房花耳草进行种苗繁育技术研究，以保障大规模采挖后能够提供充足的种苗满足资源更新的需要。通过生物技术的组织培养技术，可以有效快速地生产伞房花耳草种苗，实现伞房花耳草优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种伞房花耳草组培苗的快速繁殖方法，它能够提高伞房花耳草种苗的繁殖速度和质量，实现伞房花耳草优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
[0004]本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种伞房花耳草组培苗的快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0005](I)外植体的选择与消毒:取伞房花耳草的成熟未开裂果实作为外植体，依次用2 % (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1% (v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水，
[0006](2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体在超净工作台上剥开，将种子接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.2mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，
[0007](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-3.0mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、0.l-ο.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，
[0008](4)丛生芽生根培养:将步骤(3)中得到的丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中添加0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.3mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，
[0009](5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到苗床中，在苗床中生长一个月后移栽大田。
[0010]移栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次lOmin，此后每天早8点、晚6点各喷雾I次，每次1min ;移栽时的温度条件为20_28°C，相对湿度75-80%，遮阳率为80%。
[0011]本发明的突出优点在于:
[0012](I)采用组织培养技术繁育伞房花耳草种苗具有繁殖速度快、种苗质量均一，且不受时间、空间、季节限制的突出优点，缩短了种苗繁育周期，提高了种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
[0013](2)采用本发明所述的培养方法得到的伞房花耳草丛生芽增殖系数达到20-30倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达98.5%以上，炼苗后移栽苗床成活率达到95%。
【具体实施方式】
[0014]下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0015]实施例1
[0016]本发明所述的伞房花耳草的组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤:
[0017](I)外植体的选择与消毒:取伞房花耳草的成熟未开裂果实作为外植体，依次用2 % (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1% (v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水，
[0018](2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体在超净工作台上剥开，将种子接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.2mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，
[0019](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5mg/L的苄基腺嘌呤6_BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为23.5，
[0020](4)丛生芽生根培养:将步骤(3)中得到的丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中添加0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、0.3mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生根率为 93.0%，
[0021](5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到苗床中，在苗床中生长一个月后移栽大田，移栽成活率为95.5%。
[0022]实施例2
[0023]本发明所述的伞房花耳草的组织培养快速繁殖方法的另一个实例，包括以下步骤:
[0024](I)外植体的选择与消毒:取伞房花耳草的成熟未开裂果实作为外植体，依次用2 % (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1% (v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水，
[0025](2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体在超净工作台上剥开，将种子接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加0.2mg/L的苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，
[0026](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加3.0mg/L的苄基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为27.8，
[0027](4)丛生芽生根培养:将步骤(3)中得到的丛生芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，