专利名称：一种东方百合组织培养方法
技术领域：
本发明属于脱毒苗生产领域，具体地说是一种东方百合组织培养方法。
背景技术：
东方百合(Zi7iw “Oriental百合科百合属，为多年生草本,花朵硕大，花色各异，姿态优雅，芳香浓郁，倍受人们喜爱，近几年的需求量急剧上升。在我国东方百合切花种植面积逐年扩大，对于优质种球的需求不断增大。我国进行东方百合鲜切花商品生产的时间较短，其国产种球的数量和质量还不能满足生产的需要，目前国内东方百合种球90%以上仍依靠荷兰进口，而且东方百合种球鲜切花生产技术，至今仍然是国外的方法，用来生产一茬切花就废弃不用；造成生产成本较高，又使种球供应完全受制于外国供应商，使得东方百合的种植成本居高不下。百合无毒苗生产需要快速、灵敏、特异的检测方法。指示植物检测是一种准确、可靠的检测方法，至今东方百合病毒病的检测仍主要依靠于指示植物检测，按照常规做法，首先必须将试管苗进行生根培养，移栽成活后才能用指示植物进行检测，并以指示植物检测的结果作为判断待检植物是否带毒的最终依据。但这种方法费时较长，需要I年的时间才能完成，并且病毒病的症状表现易受环境因素的影响。因此需要寻找更好的东方百合脱毒组培苗的病毒快速检测方法。我国对百合研究工作多集中在野生种和食用上，国内东方百合主产区的企业与科技单位也在试探研究东方百合种球的复壮技术，但至今利用东方百合复壮繁育成功的企业和个人很少，国产种球其 商品性还不太被切花种植者所认可，产生差距的原因如下:1.种球自身的病毒积累；2.种球在繁育过程中由于外在条件不合理运用造成种球出现生理上的缺撼；3.种球采收后的冷处理技术尚有缺欠。在国外有关百合栽培的研究很多，但较少涉及切花百合种球复壮技术的文献报道与专利公告。
发明内容
本发明的目的在于提供一种东方百合组织培养方法，解决了传统东方百合种球只能进行一茬切花生产的问题。为实现上述目的，本发明所述一种东方百合组织培养方法，其特征在于:按如下步骤进行:
1.从盆栽植株或大田植株上剪取顶芽或带腋芽茎段为外植体，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；
2.将灭菌处理后的顶芽或带腋芽茎段在无菌条件下，在40倍的双筒解剖镜下，摘出0.2 0.3mm大小的带I 2个叶原基的茎尖，接种在诱导培养基上，在培养条件下培养20 30天后，从茎尖诱导形成幼芽，再培养20 30天，茎不断抽长，培养成约3 5节、高5 7cm的幼苗；
3.将诱导形成的幼苗切成约3 5mm节段；转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30 45天；
4.将微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然后将微嫁接接穗插入微嫁接砧木上端的纵切口中，最后将微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口处，将微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢；
5.将嫁接苗接种到微嫁接培养基中生根培养，在培养条件下经45 60天的培养，幼苗长高成约5 7cm、苗基部长出5 10根细根；
6.将生根组培苗移栽于基质中，培育I 2个月至成苗。7.将移栽苗定植在大田中，培育6 10个月至植株。所述诱导培养基:MS+BA0.1 1.0mg/L+NAA 0.05 0.5mg/L ；
所述微扦插培养基:MS+BA 0.5 2.0mg/L+IAA 0.05 0.5mg/L ；
所述生根培养基:MS+BA0.05 0.5mg/L+NAA0.01 0.lmg/L+PP3330.1 0.5mg/L ；所述的东方百合茎尖脱毒培养时外植体的灭菌处理是经75%酒精浸泡0.5 1.0min,再用0.196升萊溶液灭菌10 15min,最后用无菌水冲洗3 5次。所述的东方百合茎尖脱毒培养和脱病毒组培培养时各组培阶段的培养条件是，培养温度为25±2°c，光照光强为2500 3000LX，光照时间为12h/d。所述的移栽基质由泥炭:珍珠岩:蛭石按体积比2:1:1配制而成。本发明所述一种东方百合组织培养方法，其有益效果在于:东方百合脱毒苗易于在较小的空间和较短的时 间内大量繁殖，且不受季节和外界气候的影响；所用的培养基、组培条件和微嫁接器适于东方百合脱毒苗的微嫁接培养，利于嫁接口的愈合，平均嫁接成功率超过90%，可完全满足病毒检测的要求；能够用于东方百合的规模化生产。
具体实施例方式以下实施例为本发明作进一步出阐述。实施例1
1.从盆栽植株或大田植株上剪取顶芽或带腋芽茎段为外植体，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；
2.将灭菌处理后的顶芽或带腋芽茎段在无菌条件下，在40倍的双筒解剖镜下，摘出
0.2mm大小的带I个叶原基的茎尖，接种在诱导培养基(MS+BA0.lmg/L+NAA0.05mg/L)上，在培养条件下培养20 30天后，从茎尖诱导形成幼芽，再培养20天，茎不断抽长，培养成高5 7cm的幼苗；
3.将诱导形成的幼苗切成3mm节段；转接到微扦插培养基(MS+BA0.5mg/L+IAA
0.05mg/L)上，在培养条件下培养30天；
4.将微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然后将微嫁接接穗插入微嫁接砧木上端的纵切口中，最后将微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口处，将微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢；
5.将嫁接苗接种到微嫁接培养基中生根培养，在培养条件下经45天的培养，幼苗长高成约5cm、苗基部长出5根细根，将生根组培苗移栽于基质(MS+BA0.05 0.5mg/L+NAA0.0l 0.lmg/L+PP3330.1 0.5mg/L)中，培育 I 个月至成苗。 6.将移栽苗定植于由泥炭:珍珠岩:蛭石按体积比2:1:1配制而成的大田中，培育6个月至植株 。
权利要求
1.一种东方百合组织培养方法，其特征在于: I从盆栽植株或大田植株上剪取顶芽或带腋芽茎段为外植体，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体； O将灭菌处理后的顶芽或带腋芽茎段在无菌条件下，在40倍的双筒解剖镜下，摘出0.2 0.3mm大小的带I 2个叶原基的茎尖，接种在诱导培养基上，在培养条件下培养20 30天后，从茎尖诱导形成幼芽，再培养20 30天，茎不断抽长，培养成约3 5节、高5 7cm的幼苗； S将诱导形成的幼苗切成约3 5mm节段；转接到微扦插培养基上，在培养条件下培养30 45天； 将微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然后将微嫁接接穗插入微嫁接砧木上端的纵切口中，最后将微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口处，将微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢； <3将嫁接苗接种到微嫁接培养基中生根培养，在培养条件下经45 60天的培养，幼苗长高成约5 7cm、苗基部长出5 10根细根； 将生根组培苗移栽于基质中，培育I 2个月至成苗； 将移栽苗定植在大田中，培育6 10个月至植株。
2.如权利要求1所述一种东方百合组织培养方法，其特征在于:所述诱导培养基:MS+BA0.1 1.0mg/L+NAA 0.05 0.5mg/L。
3.如权利要求1所述一种东方百合组织培养方法，其特征在于:所述微扦插培养基:MS+BA 0.5 2.0mg/L+I AA 0.05 0.5mg/L。
4.如权利要求1所述一种东方百合组织培养方法，其特征在于:所述生根培养基:MS+BA0.05 0.5mg/L+NAA0.01 0.lmg/L+PP3330.1 0.5mg/L。
5.如权利要求1所述一种东方百合组织培养方法，其特征在于:所述的东方百合茎尖脱毒培养时外植体的灭菌处理是经75%酒精浸泡0.5 1.0min,再用0.196升汞溶液灭菌10 15min，最后用无菌水冲洗3 5次。
6.如权利要求1所述一种东方百合组织培养方法，其特征在于:所述的东方百合茎尖脱毒培养和脱病毒组培培养时各组培阶段的培养条件是，培养温度为25±2°C,光照光强为2500 3000Lx，光照时间为12h/d。
7.如权利要求1所述一种东方百合组织培养方法，其特征在于:所述的移栽基质由泥炭:珍珠岩:蛭石按体积比2:1:1配制而成。
全文摘要
本发明公开一种东方百合组织培养方法，属于脱毒苗生产领域。其特征在于将从盆栽植株或大田植株上剪取顶芽或带腋芽茎段为外植体，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；进行诱导、微嫁接、生根培养。其有益效果在于东方百合脱毒苗易于在较小的空间和较短的时间内大量繁殖，且不受季节和外界气候的影响；所用的培养基、组培条件和微嫁接器适于东方百合脱毒苗的微嫁接培养，利于嫁接口的愈合，平均嫁接成功率超过90%，可完全满足病毒检测的要求；能够用于东方百合的规模化生产。
文档编号A01H4/00GK103141381SQ20131005692
公开日2013年6月12日 申请日期2013年2月24日 优先权日2013年2月24日
发明者周世永 申请人:周世永