一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于海藻良种培育技术领域，具体设及一种紫外线诱变培育海带品系的方 法。
【背景技术】
[0002] 海带是具异型世代交替的大型经济褐藻，其生活史包括短期的配子体和长期的抱 子体阶段，成熟海带抱子体放散产生游抱子，游抱子附着后发育为雌、雄配子体，而配子体 分别产生精卵，卵子受精形成合子，合子发育为幼抱子体。
[0003] 我国从50年代开始进行海带养殖，目前海带养殖业是我国海水养殖业的支柱产 业，海带品种选育技术也得到较大发展，射线诱变育种也应用过，在上个世纪科研人员利用 X射线诱变培育了 "1170"海带，还有研究化-Ne激光和紫外线对海带雌配子体的影响的报 道，但运种办法应用很少，主要原因在于诱变率低，导致筛选成本高，针对运个问题，本专利 提供一种方法解决运个问题。
【发明内容】
[0004] 本发明提供一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法，目的在于提高海带诱变 率，使海带产生的遗传变异个体增多，从而有效提高筛选的效率。
[0005] 本发明的方法，包括如下的步骤：
[0006] 1)准备诱变种质材料
[0007] 选择作为诱变亲本的海带，分离海带配子体;并将配子体进行扩增培养；
[000引 2)诱变前处理
[0009] 收集步骤1)扩增培养获得的的雌、雄配子体，培养的光照强度为25001X，溫度为10 。。
[0010] 3)诱变处理
[0011] 在诱变处理前7d，将雌、雄配子体粉碎至5-10个细胞段，将雌、雄配子体用双层500 目筛絹过滤，使配子体留在筛絹上，再用灭菌海水洗到相应容器中，加入苗帘，再加入Icm深 的海水，置于8-12°C的环境中，进行紫外福射;福射光源的功率是波长2537没，15W紫外线灯 管2支，灯管距离海水表面30cm，照射时间为40s;照射完毕再往容器内加入培养液，盖上盖 并用黑纸包好，24小时后将雌、雄配子体混合泼洒在苗帘上继续培养;培养条件为：光照 25001X，光周期12h;溫度10°C ;海水中加 NaN〇3和K也P〇4，添加浓度为N-4mg/L，P-0.4mg/l;
[0012] 待有合子形成，则将苗帘的水倒掉，加入预冷消毒海水使苗帘保持湿润状态，采用 上述福射条件再进行紫外照射，2地后重复操作一次；
[0013] 4)诱变苗种的养殖
[0014] 把步骤3)中筛选的苗帘进行培育，培育条件为:光照为2000-25001X，溫度为8-12 °C，每3天换=分之一低溫灭菌海水;待发育至8列细胞W上的幼抱子体时，进行流水培育； 最后转移至海上养殖;再进行性状检测筛选突变体。
[0015] 所述的性状包括有：
[0016] 1)表观性状检测:每2个月检测1次全部海带性状，包括长度、宽度、中带部宽和厚 度，与养殖群体作对照，标记出某一性状大于养殖群体的10 %的海带个体；
[0017] 2)品质性状检测：在海带成熟期，取梢部部分藻体，测定褐藻胶、甘露醇和舰等品 质性状指标，与养殖群体作对照，标记出某一性状大于养殖群体的10%的海带个体。
[0018] 本发明利用紫外线对海带父母本的配子体和合子阶段进行诱变，使诱变的海带在 低剂量紫外照射的情况下获得最大的突变率，从而获得产生突变的个体。
【具体实施方式】
[0019] 海带的生活史有明显的世代交替，包括长期的抱子体和短期的配子体世代，两者 差别很大，抱子体大而有组织的分化，配子体只有十几个细胞。抱子体成熟时，产生很多游 动抱子。游抱子附着12-14d后萌发为雌、雄配子体。雌配子体成熟时卵排出，卵在母体外受 精，形成二倍的合子。合子几日后即萌发为新的海带。下面就实施例对
【发明内容】
做具体描 述。
[0020] 实施例1:诱变条件的筛选
[0021] 所做实验分为3组，分别是未作紫外福射组、只福射配子体组和按照本方法处理 组。
[0022] 1、材料
[002引1)种质材料准备
[0024] 选择长海带和真海带分别作为父本和母本，记录海带父本和母本数量特征，包括 长度、宽度、厚度、中带部宽，W及藻体外形特征，包括梢部形状、基部形状W及藻体颜色等。 选用专利(ZL 2013 1 0225745.3)的方法分离海带种质并分雌、雄单独培养，使其营养生 长。
[0025] 待长到0.1 g左右，进行扩增培养至实验所需要的量，其条件是:0.1 Og的起始重量、 用组织粉碎机粉碎后，经300目筛絹过滤，放入IL锥形瓶中，锥形瓶内加入800ml的消毒海 水，海水中加化N03和KH2PO4,添加浓度为N-10mg/L，P-lmg/L。光照周期为12h，强度为 20001x〇
[00%]水溫 14°C。
[0027] 2)诱变处理
[00%]诱变处理前7d，再用组织粉碎机粉碎雌、雄配子体后，经300目筛絹过滤，将光照调 整为25001X，溫度为10°C。然后将雌、雄配子体用双层500目筛絹过滤，使配子体留在筛絹 上，再用少量灭菌低溫海水洗到相应容器中，保持少量水分。紫外福射诱变的条件：照射时 间分为5秒、10秒、20秒、40秒、1分、2分共6个时间剂量级。照射处理是在洁净工作台中进行 的，照射距离为30厘米。照射完毕再往容器内加入培养液，盖上盖并用黑纸包好，24小时后 去掉黑纸转入实验室培养。诱变后第3d对存活的细胞进行统计，在倒置显微镜10倍物镜下 (X 100)，随机挑选10个视野，颜色保持褐色的记为存活的，统计存活的数目，致死率（％ )= (1-存活的细胞数目/总细胞数目）X 100%。选用每个视野中细胞平均死亡率60-70%的20s 处理组。选用完处理组后，将相应的雌、雄配子体按照质量比3:1混合分别泼洒在6个苗帘 上，苗帘周围放置2-3个玻片，继续培养，其条件为:光照25001X，光周期12h;溫度1 (TC ;海水 中加 NaN〇3 和 K出 P〇4，添加浓度为 N-4mg/L，P-0.4mg/L。
[0029] 福射完约5d后每天镜检玻片，如果发现有合子形成，则将苗帘的水倒掉，留取少量 海水使苗帘保持湿润状态，选用与上述相同的福射条件再照射一次，24h后重复操作一次， 目的在于使大部分合子受到福射。7d后统计合子细胞死亡率，选用40s处理组，此组的死亡 率为50 %-55 %，相应表明突变率更高。
[0030] 实施例2
[0031] 诱变苗种的养殖
[0032] 把诱变后的苗帘进行培育，培育条件为:光照为2000-25001X，溫度为8-12°C，每3 天换=分之一低溫灭菌海水;待发育至8列细胞W上的幼抱子体时，进行流水培育；最后转 移至海上养殖;再进行性状检测筛选突变体。
[0033] 所述的性状包括有：
[0034] 到海带成熟期检测海带性状，包括长度、宽度、中带部宽和厚度，与对比组的杂交 群体作对照，标记出某一性状大于养殖群体的10% W上的海带个体；
[0035] 各获得海带10绳，分别是320株、310株和330株，统计结果，平均长度3.3m±0.3m， 平均宽度35cm±0.6cm;同时发现，有2株海带的长度性状较突出，长度达到3.89m和3.92m， 长度分别提高18%和19% ;2株海带的长度和宽度都达到3.83m和40.6cm，提高16%。有些海 带厚度和成熟期发生了不同程度的改变，性状发生变化的总体比例在25%。
【主权项】
1. 一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步 骤： 1) 准备诱变种质材料 选择作为诱变亲本的海带，分离海带配子体;并将配子体进行扩增培养； 2) 诱变前处理 收集步骤1)扩增培养获得的的雌、雄配子体，培养的光照强度为25001x，温度为10°C; 3) 诱变处理 在诱变处理前7d，将雌、雄配子体粉碎至5-10个细胞段，将雌、雄配子体用双层500目筛 絹过滤，使配子体留在筛絹上，再用灭菌海水洗到相应容器中，加入苗帘，再加入lcm深的海 水，置于8-12°C的环境中，进行紫外辐射;辐射光源的功率是波长2537A, 15W紫外线灯管2 支，灯管距离海水表面30cm，照射时间为40s;照射完毕再往容器内加入培养液，盖上盖并用 黑纸包好，24小时后将雌、雄配子体混合泼洒在苗帘上继续培养； 待有合子形成，则将苗帘的水倒掉，加入预冷消毒海水使苗帘保持湿润状态，采用上述 的辐射条件再进行紫外照射，24h后重复操作一次； 4) 诱变苗种的养殖 把步骤3)中筛选的苗帘进行培育，培育条件为:光照为2000-25001X，温度为8-12°C，每 3天换三分之一低温灭菌海水;待发育至8列细胞以上的幼孢子体时，进行流水培育;最后转 移至海上养殖;再进行性状检测筛选突变体。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)的培养条件如下:光照25001x， 光周期12h;温度10°C。3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)的海水中加入NaN03和KH2P〇4， 添加浓度为 N-4mg/L，P-0 · 4mg/L。4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的性状检测包括有： 1) 表观性状检测:每2个月检测1次全部海带性状，包括长度、宽度、中带部宽和厚度，与 养殖群体作对照，标记出某一性状大于养殖群体的10 %的海带个体； 2) 品质性状检测：在海带成熟期，取梢部部分藻体，测定褐藻胶、甘露醇和碘等品质性 状指标，与养殖群体作对照，标记出某一性状大于养殖群体的10%的海带个体。
【专利摘要】本发明提供一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法，目的在于提高海带诱变率，使海带产生的遗传变异个体增多，从而有效提高筛选的效率。本发明的方法的紫外辐射的功率是波长2537？，照射时间为40s。本发明利用紫外线对海带父母本的配子体和合子阶段进行诱变，使诱变的海带在低剂量紫外照射的情况下获得最大的突变率，从而获得产生突变的个体。
【IPC分类】A01H1/08
【公开号】CN105660390
【申请号】CN201610202335
【发明人】王翔宇
【申请人】山东省海洋生物研究院
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月31日