一种采用白及种子进行组培育种的技术的制作方法
【专利摘要】本发明公开一种采用白及种子进行组培育种的技术，包括诱导培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基，所述诱导培养基配方包括有：1/2MS、NAA0.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L或者1/2MS、6?BA1.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L，pH5.8；所述增殖培养基配方包括有：MS+6?BA3.0mg/L、NAA0.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L或者MS+6?BA4.0mg/L、NAA0.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L，pH5.8；所述生根壮苗培养基配方包括有：1/2MS、NAA0.4mg/L、IBA0.6mg/L、活性炭1.0g/L、蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L，pH5.8；该采用白及种子进行组培育种的技术具有种子萌发率高，增殖倍数高，生根快、多、粗壮，移栽成活率高，容易实现工业化的优点。
【专利说明】
一种采用白及种子进行组培育种的技术
技术领域
[0001] 本发明具体涉及一种采用白及种子进行组培育种的技术。
【背景技术】
[0002] 白及，拉丁学名【Bletilla striata(Thunb. )Reichb.f.】，为兰科白及属植物，另lj 名：白根、地螺丝、羊角七。具有补肺止血、消肿生肌等功能的常用中药。主治肺结核咳血、支 气管扩张咯血、胃溃疡吐血、尿血、便血等症;外用治外伤出血、烧烫伤、手足皲裂等症。白及 止血效果很好，用白及做的胶膜块可用于肝脾手术贴在伤口处，代替血钳子，效果非常好， 具有快速凝血作用，多用于外科手术。主产于四川、云南、陕西、甘肃等省，全国各地有栽培。
[0003] 白及多为野生，人工种植较少，主要是因为其很难通过种子繁殖进行大批量育苗， 但白及作为名贵中药，近年来越来越多的应用到医药领域，目前的白及种植现状已不适应 发展的需求;国内对白及的繁殖技术研究颇多。
[0004] 目前，现有的采用白及种子进行组培育种的技术不能实现工业化，培养基太单一， 组培苗成活率较低，难以炼苗或移栽。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是提供一种种子萌发率高，增殖倍数高，生根快、多、粗 壮，移栽成活率高，容易实现工业化的采用白及种子进行组培育种的技术。
[0006] 为解决上述问题，本发明采用如下技术方案：
[0007] -种采用白及种子进行组培育种的技术，包括诱导培养基、增殖培养基和生根壮 苗培养基，所述诱导培养基配方包括有：1/2MS、NAA0.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L或者1/ 2MS、6-BA1. Omg/L、蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L，pH5.8 ;所述增殖培养基配方包括有：1^+6_ BA3 · 0mg/L、NAA0 · 5mg/L、鹿糖30g/L、琼脂5 · 5g/L或者MS+6-BA4.0mg/L、NAA0 · 5mg/L、鹿糖 30g/L、琼脂5.5g/L，pH5.8 ;所述所述生根壮苗培养基配方包括有：1/2MS、NAA0.4mg/L、 IBAO · 6mg/L、活性炭 1 · Og/L、鹿糖 30g/L、琼脂 5 · 5g/L，pH5 · 8。
[0008] 所述的采用白及种子进行组培育种的技术，其特征在于:包括如下步骤：
[0009] 1)引种：选取健壮、无病虫害危害的野生白及蒴果，先用75%的酒精表面消毒 lmin，再用O.l·%的升汞消毒 12min，之后用无菌水冲洗4-5次，再用无菌滤纸吸干果荚表皮 水分，在超净工作台上用已经灭菌的手术刀把果荚从中切开，取出种子，备用；
[0010] 2)白及种子萌发培养：用无菌镊子将取出的种子均匀抖落在诱导培养基上，盖上 瓶盖，做好标记后，放在培养室中光照培养，培养温度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0011] 3)增殖培养:将步骤2)诱导出的幼苗接种到增殖培养基中，培养温度25°C，光照度 25001x，光照 12h/d;
[0012] 4)生根培养:将步骤3)得到的高度达到2cm的白及增殖苗分为单株，接种到生根壮 苗培养基中，放在培养室中光照培养，培养温度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0013] 5)炼苗：生根培养35-40天，待每株有须根8根以上时转移至自然环境中炼苗5-10 天。
[0014] 6)移栽：将炼苗后的白及移栽到大田，大田的土壤条件为：有机质含量在20%以 上，湿度为20-25 % ;交通便利，灌溉方便;移栽要求:带土移栽，移栽后盖黑色地膜；
[0015] 7)田间管理:及时追肥，中耕除草，使用杀虫杀菌剂防治地下害虫和土传病害;所 述杀虫剂为0.06%噻虫胺颗粒剂，亩用量20-25kg;所述杀菌剂为15%恶霉灵水剂，亩用量 300-500ml，滴管施药。
[0016] 本发明的有益效果是：由于采用诱导培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基，能够 有效的提高了移栽成活率，减低培养基成本；由于只需经过白及种子萌发培养、增值培养和 生根培养三个过程的控制，就可达到炼苗移栽，培养过程比较简单，且成活率高；同时易实 现工业化生产，提高了白及资源可持续性利用程度。
【具体实施方式】
[0017] 实施例一：
[0018] -种采用白及种子进行组培育种的技术，包括诱导培养基、增殖培养基和生根壮 苗培养基，所述诱导培养基配方包括有 ：1/215、财40.511^/1、蔗糖3(^/1^、琼脂5.58/1^， pH5 · 8;所述增殖培养基配方包括有:MS+6-BA3 · Omg/L、ΝΑΑ0 · 5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5 · 5g/ L，pH5.8;所述所述生根壮苗培养基配方包括有：1/2MS、NAAO . 4mg/L、IBAO. 6mg/L、活性炭 1 · Og/L、蔗糖 30g/L、琼脂 5 · 5g/L，pH5 · 8。
[0019] 所述的采用白及种子进行组培育种的技术，其特征在于:包括如下步骤：
[0020] 1)引种：选取健壮、无病虫害危害的野生白及蒴果，先用75%的酒精表面消毒 lmin，再用O.l·%的升汞消毒12min，之后用无菌水冲洗4-5次，再用无菌滤纸吸干果荚表皮 水分，在超净工作台上用已经灭菌的手术刀把果荚从中切开，取出种子，备用；
[0021] 2)白及种子萌发培养：用无菌镊子将取出的种子均匀抖落在诱导培养基上，盖上 瓶盖，做好标记后，放在培养室中光照培养，培养温度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0022] 3)增殖培养:将步骤2)诱导出的幼苗接种到增殖培养基中，培养温度25°C，光照度 25001x，光照 12h/d;
[0023] 4)生根培养:将步骤3)得到的高度达到2cm的白及增殖苗分为单株，接种到生根壮 苗培养基中，放在培养室中光照培养，培养温度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0024] 5)炼苗：生根培养35-40天，待每株有须根8根以上时转移至自然环境中炼苗5-10 天。
[0025] 6)移栽：将炼苗后的白及移栽到大田，大田的土壤条件为：有机质含量在20%以 上，湿度为20-25 % ;交通便利，灌溉方便;移栽要求:带土移栽，移栽后盖黑色地膜；
[0026] 7)田间管理:及时追肥，中耕除草，使用杀虫杀菌剂防治地下害虫和土传病害;所 述杀虫剂为0.06%噻虫胺颗粒剂，亩用量20-25kg;所述杀菌剂为15%恶霉灵水剂，亩用量 300-500ml，滴管施药。
[0027] 实施例二：
[0028] -种采用白及种子进行组培育种的技术，包括诱导培养基、增殖培养基和生根壮 苗培养基，所述诱导培养基配方包括有：1/21^、6-841.〇11^/1、蔗糖3(^/1、琼脂5.58/^， pH5 · 8;所述增殖培养基配方包括有:MS+6-BA4 · 0mg/L、ΝΑΑ0 · 5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5 · 5g/ L，pH5.8;所述所述生根壮苗培养基配方包括有：1/2MS、NAAO . 4mg/L、IBAO. 6mg/L、活性炭 1 · Og/L、蔗糖 30g/L、琼脂 5 · 5g/L，pH5 · 8。
[0029] 所述的采用白及种子进行组培育种的技术，包括如下步骤：
[0030] 1)引种：选取健壮、无病虫害危害的野生白及蒴果，先用75%的酒精表面消毒 lmin，再用O.l·%的升汞消毒12min，之后用无菌水冲洗4-5次，再用无菌滤纸吸干果荚表皮 水分，在超净工作台上用已经灭菌的手术刀把果荚从中切开，取出种子，备用；
[0031] 2)白及种子萌发培养：用无菌镊子将取出的种子均匀抖落在诱导培养基上，盖上 瓶盖，做好标记后，放在培养室中光照培养，培养温度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0032] 3)增殖培养:将步骤2)诱导出的幼苗接种到增殖培养基中，培养温度25°C，光照度 25001x，光照 12h/d;
[0033] 4)生根培养:将步骤3)得到的高度达到2cm的白及增殖苗分为单株，接种到生根壮 苗培养基中，放在培养室中光照培养，培养温度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0034] 5)炼苗：生根培养35-40天，待每株有须根8根以上时转移至自然环境中炼苗5-10 天。
[0035] 6)移栽：将炼苗后的白及移栽到大田，大田的土壤条件为：有机质含量在20%以 上，湿度为20-25 % ;交通便利，灌溉方便;移栽要求:带土移栽，移栽后盖黑色地膜；
[0036] 7)田间管理:及时追肥，中耕除草，使用杀虫杀菌剂防治地下害虫和土传病害;所 述杀虫剂为0.06%噻虫胺颗粒剂，亩用量20-25kg;所述杀菌剂为15%恶霉灵水剂，亩用量 300-500ml，滴管施药。
[0037] 实施例三：
[0038] -种采用白及种子进行组培育种的技术，包括诱导培养基、增殖培养基和生根壮 苗培养基，所述诱导培养基配方包括有 ：1/215、财40.511^/1、蔗糖3(^/1^、琼脂5.58/1^， pH5 · 8;所述增殖培养基配方包括有:MS+6-BA4 · Omg/L、ΝΑΑ0 · 5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5 · 5g/ L，pH5.8;所述所述生根壮苗培养基配方包括有：1/2MS、NAAO . 4mg/L、IBAO. 6mg/L、活性炭 1 · 0g/L、蔗糖 30g/L、琼脂 5 · 5g/L，pH5 · 8。
[0039] 所述的采用白及种子进行组培育种的技术，包括如下步骤：
[0040] 1)引种：选取健壮、无病虫害危害的野生白及蒴果，先用75%的酒精表面消毒 lmin，再用O.l·%的升汞消毒12min，之后用无菌水冲洗4-5次，再用无菌滤纸吸干果荚表皮 水分，在超净工作台上用已经灭菌的手术刀把果荚从中切开，取出种子，备用；
[0041] 2)白及种子萌发培养：用无菌镊子将取出的种子均匀抖落在诱导培养基上，盖上 瓶盖，做好标记后，放在培养室中光照培养，培养温度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0042] 3)增殖培养:将步骤2)诱导出的幼苗接种到增殖培养基中，培养温度25°C，光照度 25001x，光照 12h/d;
[0043] 4)生根培养:将步骤3)得到的高度达到2cm的白及增殖苗分为单株，接种到生根壮 苗培养基中，放在培养室中光照培养，培养温度25°C，光照度25001x，光照12h/d;
[0044] 5)炼苗:生根培养35-40天，待每株有须根8根以上时转移至自然环境中炼苗5-10 天。
[0045] 6)移栽：将炼苗后的白及移栽到大田，大田的土壤条件为：有机质含量在20%以 上，湿度为20-25 % ;交通便利，灌溉方便;移栽要求:带土移栽，移栽后盖黑色地膜；
[0046] 7)田间管理:及时追肥，中耕除草，使用杀虫杀菌剂防治地下害虫和土传病害;所 述杀虫剂为0.06%噻虫胺颗粒剂，亩用量20-25kg;所述杀菌剂为15%恶霉灵水剂，亩用量 300-500ml，滴管施药。
[0047] 实验例：
[0048] 以下各组试验，提供如下不同培养阶段培养基配方作对比试验，培养条件相同， 即：培养温度，光照度，光照时间在各培养阶段相同；实验时间为2个月。
[0049] 实验组1:实施例一的采用白及种子进行组培育种的技术所用的方法；
[0050] 实验组2:实施例二的采用白及种子进行组培育种的技术所用的方法；
[0051] 实验组3:实施例三的采用白及种子进行组培育种的技术所用的方法；
[0052] 对照组1:除省略步骤2)之外，按实施例一相同的实施方式进行实施；
[0053] 对照组2:除省略步骤3)之外，按实施例二相同的实施方式进行实施；
[0054]对照组3:除省略步骤4)之外，按实施例三相同的实施方式进行实施；
[0055] 表一:对比实验结果：
[0056]
?〇〇57?~由表1表明接种2个月后，采用诱导培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基可使培_ 养成活率提高90%以上，甚至可达到97%，效果佳，容易实现工业化，具有较好的应用前景。 [0058]本发明的有益效果是：由于采用诱导培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基，能够 有效的提高了移栽成活率，减低培养基成本；由于只需经过白及种子萌发培养、增值培养和 生根培养三个过程的控制，就可达到炼苗移栽，培养过程比较简单，且成活率高；同时易实 现工业化生产，提高了白及资源可持续性利用程度。
[0059]以上所述，仅为本发明的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何 不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本实用新保护范围为准。
【主权项】
1. 一种采用白及种子进行组培育种的技术，其特征在于:包括诱导培养基、增殖培养基 和生根壮苗培养基，所述诱导培养基配方包括有 ：1/21^、财40.511^/1、蔗糖3(^/^、琼脂 5.5g/L或者1 /2MS、6-BA1. Omg/L、蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L，pH5.8;所述增殖培养基配方包括 有:MS+6-BA3 · 0mg/L、NAA0 · 5mg/L、蔗糖 30g/L、琼脂 5 · 5g/L 或者 MS+6-BA4 · 0mg/L、NAA0 · 5mg/ L、蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L，pH5.8;所述生根壮苗培养基配方包括有：1/2MS、NAA0.4mg/L、 IBAO · 6mg/L、活性炭 1 · Og/L、鹿糖 30g/L、琼脂 5 · 5g/L，pH5 · 8。2. 如权利要求1所述的采用白及种子进行组培育种的技术，其特征在于：包括如下步 骤： 1) 引种:选取健壮、无病虫害危害的野生白及蒴果，先用75%的酒精表面消毒lmin，再 用0.1 %的升汞消毒12min，之后用无菌水冲洗4-5次，再用无菌滤纸吸干果荚表皮水分，在 超净工作台上用已经灭菌的手术刀把果荚从中切开，取出种子，备用； 2) 白及种子萌发培养:用无菌镊子将取出的种子均匀抖落在诱导培养基上，盖上瓶盖， 做好标记后，放在培养室中光照培养，培养温度25°C，光照度25001x，光照12h/d; 3) 增殖培养：将步骤2)诱导出的幼苗接种到增殖培养基中，培养温度25 °C，光照度 25001x，光照 12h/d; 4) 生根培养:将步骤3)得到的高度达到2cm的白及增殖苗分为单株，接种到生根壮苗培 养基中，放在培养室中光照培养，培养温度25°C，光照度25001x，光照12h/d; 5) 炼苗:生根培养35-40天，待每株有须根8根以上时转移至自然环境中炼苗5-10天。 6) 移栽:将炼苗后的白及移栽到大田，大田的土壤条件为：有机质含量在20%以上，湿 度为20-25 % ;交通便利，灌溉方便;移栽要求:带土移栽，移栽后盖黑色地膜； 7) 田间管理:及时追肥，中耕除草，使用杀虫杀菌剂防治地下害虫和土传病害;所述杀 虫剂为0.06 %噻虫胺颗粒剂，亩用量20-25kg;所述杀菌剂为15 %恶霉灵水剂，亩用量300-500ml，滴管施药。
【文档编号】A01H4/00GK105993964SQ201610620391
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月29日
【发明人】徐志明
【申请人】衢州康源生物科技有限公司