一种植物种子发芽盒杀菌涂层剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种植物种子发芽盒杀菌涂层剂，包括盐酸多巴胺10?20份、普鲁兰多糖20?30份、95％乙醇50?60份、石香葇提取物20?30份、黑果腺肋花楸提取物20?30份。该涂层剂涂于发芽盒盒体内壁:先将盐酸多巴胺和普鲁兰多糖溶于适量无菌水，配成溶液刷涂或浸涂在发芽盒内壁得到底层涂层。然后将石香葇提取物、黑果腺肋花楸提取物溶于95％乙醇中，刷涂或浸涂在发芽盒内壁得到中间涂层，干燥后再次刷涂或浸涂获得表层涂层。本发明涂层剂对植物种子无害，可向发芽盒内释放杀菌剂，维持发芽盒内洁净无菌，有效预防种子霉变。
【专利说明】
一种植物种子发芽盒杀菌涂层剂
技术领域
[0001] 本发明涉及一种植物种子发芽盒杀菌涂层剂，属于农业生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 种子发芽试验是种子室内检验的一项重要内容，对种子质量控制和农业生产播种 具有极其重要意义。种子发芽试验也是种子科学研究中经常使用的一种方法，如抗逆试验， 引发试验等均需要通过发芽和幼苗成长状况来判断效果。在以往常规的纸床发芽试验中， 是将湿润的发芽纸铺于发芽盒底部，再将种子摆放在纸上发芽。
[0003] 由于室内种子发芽试验中常出现种子易发霉并传染的问题。因此需要对种子及发 芽盒等器皿进行消毒处理。一般常用的灭菌剂有：75%酒精30 S、0.1%升汞2-15min、l%-4%次氯酸钠10-20min等，或者用75%的酒精30s+l%次氯酸钠10min组合方法。100%或 95%的酒精比70%或75%的酒精穿透细菌孢子的能力弱，而不易杀死他们，故灭菌最好选 择70 %或75 %的酒精。升汞杀菌力强，刺激性和腐蚀性大，毒性也大，对细菌的渗透性小，对 金属器皿有腐蚀作用，对人畜有剧毒。次氯酸钠灭菌的原理是水解形成次氯酸，次氯酸再进 一步分解形成新生态氧，新生态氧的极强氧化性使菌体和病毒上的蛋白质等物质变性，从 而使病源微生物致死。
[0004]将经过消毒灭菌、浸种的种子安放到发芽床上，然后将发芽盒盖好放入发芽箱内 进行发芽。虽然经过消毒处理，在发芽的过程中由于种子接触空气，也会产生霉变，一般轻 微发霉的种粒可以拣出用清水冲洗后放回原发芽床。发霉种粒较多的就要及时更换发芽床 或发芽容器。这给实际研究带来不便。而且现有的杀菌剂大多为化学杀菌剂，长期大量使用 存在潜在的毒副作用和残留以及对环境污染等问题。
【发明内容】
[0005] 为此，本发明提供一种植物种子发芽盒杀菌涂层剂，涂于发芽盒盒体内壁，对植物 种子无害，可向发芽盒内释放杀菌剂，维持发芽盒内洁净无菌，有效预防种子霉变。
[0006] 为此，本发明采用技术方案如下，一种植物种子发芽盒杀菌涂层剂，包括盐酸多巴 胺10-20份、普鲁兰多糖20-30份、95%乙醇50-60份、石香菓提取物20-30份、黑果腺肋花楸 提取物20-30份。
[0007] 所述石香菓提取物提取方法是:石香菓干燥粉碎过100目筛，用无水甲醇65°C下热 回流提取3次，每次2h，料液比为1:15,合并提取液减压浓缩成浸膏状至恒重，用丙酮水1:1 完全溶解后，再依次用等体积石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，将萃取液减压浓缩 成浸膏至恒重，干燥粉碎成提取物粉末。
[0008] 所述黑果腺肋花楸提取物提取方法是：黑果腺肋花楸果实和/或叶片干燥粉碎过 100目筛，用无70%乙醇65°C下热回流提取3次，每次2h，料液比为1:10,合并提取液减压浓 缩成浸膏状至恒重，用丙酮水1:1完全溶解后，再依次用等体积石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正 丁醇进行萃取，将萃取液减压浓缩成浸膏至恒重，干燥粉碎成提取物粉末。
[0009]先将盐酸多巴胺和普鲁兰多糖溶于适量无菌水，配成溶液刷涂或浸涂在发芽盒内 壁得到底层涂层。然后将石香菓提取物、黑果腺肋花楸提取物溶于95%乙醇中，刷涂或浸涂 在发芽盒内壁得到中间涂层，干燥后再次刷涂或浸涂获得表层涂层。
[0010]石香菓为一种中药材，其辛苦，温;功能主治:祛暑，活血，理气，化湿。治夏月感冒， 中暑呕恶，腹痛泄泻，跌打瘀痛，湿疹，疖肿。研究表明石香菓含挥发油约0.7%，香荆芥酚 65%、香荆芥酚乙酸酯6%，尚有对-聚伞花素、α-侧柏烯、芳樟醇、龙脑、α-石竹烯等。
[0011] 黑果腺肋花楸又名野樱莓、不老莓，蔷薇科，腺肋花楸属、多年生落叶灌木。其果实 及其提取物对心脏病、高血压等心脑血管疾病具有特殊的疗效，在欧美地区广泛应用于医 药和功能食品工业。果实中花青素、黄酮(鲜果含量高达〇.25%-〇. 35%)、多酚是已知植物 中含量最高的。果实还含有多种维生素和矿质元素等物质。多黑果腺肋花楸果实富含Vc和 抗氧化剂(Beta Carotene(胡萝卜素））。果实提取物对治疗福射病和重金属中毒症有很好的 疗效。
[0012] 本发明研究发现石香菓提取物具有很好的抑制及杀灭霉菌的作用。和黑果腺肋花 楸提取物一起使用具有良好的杀菌抑菌抗氧化功效。本发明涂层剂涂于发芽盒内壁时，采 用分层涂刷方式，将盐酸多巴胺和普鲁兰多糖作为底层涂刷，可使杀菌涂层剂很好的附着 在发芽盒内壁上，石香菓提取物、黑果腺肋花楸提取物分两次涂刷使其具有持续的良好的 杀菌抑菌效果。
[0013] 本发明具有如下有益效果：
[0014] (1)现有的杀菌剂大多为化学杀菌剂，但其自身存在潜在的毒副作用和残留以及 对环境污染问题。而本发明杀菌剂为生物杀菌剂，具有优异的杀菌、抗氧化性能，更安全、有 效。对植物种子安全无害，不影响发芽。
[0015] (2)采用本发明杀菌涂层剂的发芽盒，可以减少前期种子消毒处理的时间，加快试 验进程。实验证明，种子不经过长时间的消毒处理，简单处理后放入涂有杀菌涂层剂的发芽 盒内，即可很好的防止种子发霉，提高试验准确率和效率。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合具体实施方法对本发明的技术方案及其所产生的技术效果做进一步的 阐述，下述说明仅是为了解释本发明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导 所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。本发明中所使用的方法如无特殊说明， 均为本领域常规方法。下述实施例中所用的试验材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业 途径得到。
[0017] 实施例1. 一种植物种子发芽盒杀菌涂层剂，包括盐酸多巴胺15份、普鲁兰多糖25 份，95%乙醇55份、石香菓提取物25份、黑果腺肋花楸提取物25份。
[0018] 石香菓提取物提取方法是:石香菓干燥粉碎过1〇〇目筛，用无水甲醇65°c下热回流 提取3次，每次2h，料液比为1:15,合并提取液减压浓缩成浸膏状至恒重，用丙酮水1:1完全 溶解后，再依次用等体积石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，将萃取液减压浓缩成浸 膏至恒重，干燥粉碎成提取物粉末。
[0019] 黑果腺肋花楸提取物提取方法是:黑果腺肋花楸果实和/或叶片干燥粉碎过100目 筛，用无70%乙醇65°C下热回流提取3次，每次2h，料液比为1:10,合并提取液减压浓缩成浸 膏状至恒重，用丙酮水1:1完全溶解后，再依次用等体积石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进 行萃取，将萃取液减压浓缩成浸膏至恒重，干燥粉碎成提取物粉末。
[0020] 本发明涂层剂用于发芽盒中：先将盐酸多巴胺和普鲁兰多糖溶于适量无菌水，配 成溶液刷涂或浸涂在发芽盒内壁得到底层涂层。然后将石香菓提取物、黑果腺肋花楸提取 物溶于95%乙醇中，刷涂或浸涂在发芽盒内壁得到中间涂层，干燥后再次刷涂或浸涂获得 表层涂层。
[0021] 实施例2.-种植物种子发芽盒杀菌涂层剂，包括盐酸多巴胺25份、普鲁兰多糖20 份，95%乙醇50份、石香菓提取物20份、黑果腺肋花楸提取物20份。
[0022]制备及使用方法同实施例1。
[0023]实施例3.-种植物种子发芽盒杀菌涂层剂，包括盐酸多巴胺20份、普鲁兰多糖30 份，95%乙醇60份、石香菓提取物30份、黑果腺肋花楸提取物30份。
[0024]制备及使用方法同实施例1。
[0025]实施例4. 一种植物种子发芽盒杀菌涂层剂，包括盐酸多巴胺16份、普鲁兰多糖28 份，95%乙醇56份、石香菓提取物27份、黑果腺肋花楸提取物22份。
[0026]制备及使用方法同实施例1。
[0027]试验例1.石香菓提取物对霉菌的杀灭作用研究
[0028] -、方法
[0029] 1、石香菓提取液准备
[0030] 石香菓经干燥、粉碎，充分研磨后取5克，用无水甲醇65°C下热回流提取3次，每次 2h，料液比为1:15,合并提取液减压浓缩成浸膏状至恒重，用丙酮水1:1完全溶解后，再依次 用等体积石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，将萃取液减压浓缩至提取液体积为 50ml 〇
[0031] 2、石香菓提取液的梯度稀释
[0032]用无菌水依此稀释5个浓度梯度，即浓度分别为100、50、25、12.5、6.25mg/ml
[0033] 3、霉菌孢子悬液的制备
[0034] 分别将根霉、毛霉、青霉、曲霉的霉菌丝接种于培养基上，培养72h。待铺满整个培 养皿后，用roS冲洗3次，经纱布过滤，加入Ml 99细胞培养液，经细胞计数，分别调整孢子浓度 1X104、1X106、1X10 8 个/ml
[0035] 4、霉菌孢子抑制试验
[0036]不同浓度的石香菓提取液2ml加至10ml经溶化的PAD培养基，摇匀，迅速倾倒于培 养皿中待用。PAD平板浓度为原试验液浓度的1 /10。
[0037]多点接种法将lul孢子菌液于凝固的培养基上，25°C下培养5d。孵育期内每24h观 察1次。每个浓度设两个平行对照，同时设加无菌水的空白PAD平板做空白对照。
[0038] 5、霉菌菌丝杀灭试验
[0039]将经过PAD培养基25°C培养72h后，铺满平板的霉菌用无菌刀片切成约lcm2的小 块，将切好的小块放入盛有以上各种不同浓度梯度的石香菓提取液的试管中浸泡〇.5h、lh、 2h，用无菌镊子取出浸泡过的小块置于培养上，25°C培养观察5d，孵育期内每24h观察一次， 肉眼判定没有无霉菌落生长的，表示提取液在该浓度该作用时间下对霉菌具有杀灭作用。 每个浓度设2个平行对照，同时设经无菌水浸泡过的小块做空白对照。
[0040] 二、结果
[0041] 1、石香菓提取液对霉菌孢子的抑制
[0042]石香菓提取液在受试浓度范围内对四种霉菌孢子具有较好的抑制作用，且在试验 孢子悬液范围内抑菌效果无差别。结果见表1。
[0043] 表1.石香菓提取液对不同霉菌孢子的MIC
[0044]
[0045] 2、石香菓提取液对霉菌菌丝的杀灭作用
[0046] 在本试验浓度范围内石香菓提取液对霉菌菌丝具有良好的杀灭作用。结果如表2 所示。
[0047] 表2.石香菓提取液对四种霉菌丝的杀灭浓度及作用时间
[0048]
[0050] 注:+表示霉菌生长;-表示霉菌没有生长 [0051 ] 三、讨论
[0052] 种子发霉主要是由根霉、毛霉、曲霉、青霉等霉菌引起的，本试验证明石香菓提取 液对上述四种霉菌均有良好的抑制和杀灭作用。说明石香菓提取液可以有效预防种子发霉 及腐烂。
[0053]试验例二、不同消毒处理对种子消毒效果及萌发的影响 [0054] 一、方法
[0055] 1、以郑单958种子为实验材料，采用BP纸间法:按照《农作物种子检验规程》标准发 芽试验方法进行。（1)将两层滤纸平铺于发芽盒中，用20ml灭菌水完全浸湿。（2)均匀播种50 粒种子。（3)盖上一张等大的滤纸。（4)放入培养箱中培养。每隔一天补充20ml灭菌水。
[0056] 2、分组
[0057] 共四组，每组2个重复。
[0058] I组:种子用30%次氯酸钠消毒30分钟，普通发芽盒；
[0059] II组:种子用30%次氯酸钠消毒30分钟，涂有本发明杀菌涂层剂的发芽盒；
[0060] III组:种子用30%次氯酸钠消毒5分钟，普通发芽盒；
[0061] IV组:种子用30%次氯酸钠消毒5分钟;涂有本发明杀菌涂层剂的发芽盒。
[0062] 其他处理均相同。
[0063] 3、计数统计
[0064]根据《农作物种子检验规程》规定的计数方法，7天后，对正常幼苗、畸形幼苗、发霉 种子、腐烂种子和不发芽种子分别计数，试验结果以种子总粒数的百分率表示。
[0065]二、结果
[0066] 1、种子发芽率情况，见表3
[0067] 表3,不同处理对种子发芽率的影响
[0068]
[0069] 从上述结果可以看出，I组和II组，III组和IV组两两对比，用带有本发明涂层剂的 发芽盒的试验组，发霉及霉烂种子最少，发芽率最高。I组和III组相比，说明用30%次氯酸 钠消毒时间减少，种子发霉及霉烂数量增多。而II组和IV组相比，虽然用30%次氯酸钠消毒 时间减少，但是并未影响到种子发芽率。I组和IV组相比，IV组用次氯酸钠消毒时间减少，但 因为采用了本发明杀菌涂层的试剂盒，能够在种子发芽期间持续释放杀菌物质，所以保证 了发芽盒内洁净环境，种子发霉或霉烂数量少，整体发芽率与组I差不多。
[0070] 上述研究表明本发明涂层剂用于发芽盒中，既可以有效防治种子发霉和霉烂，还 可以大大减少种子消毒时间，节约时间，提高试验效率。
【主权项】
1. 一种植物种子发芽盒杀菌涂层剂，其特征是，包括盐酸多巴胺10-20份、普鲁兰多糖 20-30份、95 %乙醇50-60份、石香菓提取物20-30份、黑果腺肋花楸提取物20-30份。2. 如权利要求1所述植物种子发芽盒杀菌涂层剂，其特征是，所述石香菓提取物提取方 法是:石香菓干燥粉碎过100目筛，用无水甲醇65°C下热回流提取3次，每次2h，料液比为1: 15，合并提取液减压浓缩成浸膏状至恒重，用丙酮水1:1完全溶解后，再依次用等体积石油 醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，将萃取液减压浓缩成浸膏至恒重，干燥粉碎成提取物 粉末。3. 如权利要求1所述植物种子发芽盒杀菌涂层剂，其特征是，所述黑果腺肋花楸提取物 提取方法是：黑果腺肋花楸果实和/或叶片干燥粉碎过100目筛，用无70 %乙醇65 °C下热回 流提取3次，每次2h，料液比为1:10,合并提取液减压浓缩成浸膏状至恒重，用丙酮水1:1完 全溶解后，再依次用等体积石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，将萃取液减压浓缩成 浸膏至恒重，干燥粉碎成提取物粉末。4. 将权利要求1所述植物种子发芽盒杀菌涂层剂应用于发芽盒中，其特征是，步骤如 下：先将盐酸多巴胺和普鲁兰多糖溶于适量无菌水，配成溶液刷涂或浸涂在发芽盒内壁得 到底层涂层;然后将石香菓提取物、黑果腺肋花楸提取物溶于95 %乙醇中，刷涂或浸涂在发 芽盒内壁得到中间涂层，干燥后再次刷涂或浸涂获得表层涂层。
【文档编号】A01P3/00GK106070359SQ201610525112
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年7月5日
【发明人】丁汉凤, 田茜, 张文兰, 李娜娜, 李群, 蒲艳艳, 王栋
【申请人】山东省农作物种质资源中心