专利名称：一种葛仙米藻种的制备方法
技术领域：
本发明涉及微型藻类，更具体涉及葛仙米藻种的制备方法。
背景技术：
念珠藻是属于蓝藻门Cyanophyta蓝藻纲Cyanophyceae段殖藻目Hormogonales念珠藻科Nostocaceae的一类分布地域广、生态环境复杂、形态结构多样的藻类类群，其植物体胶状或革状，成熟植物体有球形、叶状、丝状、泡状等多种形状，中空或实心，营漂浮或着生生长。其原植体由许多直径数微米的纤细藻丝集结成群体，群体形状因“种”而异，如发菜(Nostoc flageliformeKütz.)、地木耳(Nostoc commune)、葛仙米(Nostoc sphaeroides)在新鲜状态下分别呈头发状、扁平耳状或小球状，干燥后程度不等地有所缩变，均具有丰富的营养价值，在《本草纲目》、《本草纲目拾遗》、《陕西中草药》、《梧州府志》、《全国中草药汇编》等医书中已有记载。念珠藻不仅在自然界普遍发生，而且自古以来都是我国民间的传统食物；其中葛仙米，学名拟球状念珠藻，具有食疗、保健、滋补等功效，营养价值高，是典型的高蛋白、低脂肪、低热值的绿色保健食品；同时又具有药性，常食用能清热解毒，凉血明目，促进新陈代谢；葛仙米的天然生产状况已经衰落，需求和生产产量的矛盾不可回避。随着人类活动的加剧、旅游业的发展、以及过度的采集给生态和环境造成的破坏，使得自然资源日趋萎缩，葛仙米的现天然年产量不足一吨，由于其生长地逐渐缩小，产量在日趋减少。葛仙米在国内外市场很受欢迎，而现有的产量远远满足不了需求，有必要人工养殖葛仙米，以提高其产量，满足人们物质生活水平提高的需求。
中国专利文献一种培养葛仙米的方法，申请号99120005.5。该发明是一种培养葛仙米的方法，具体藻种制备中采用的方法是用氨苄青霉素除菌，然后纯培养并诱导藻殖段，最后对藻殖段进行培养，获得藻种。该方法操作复杂，需抗生素进行无菌纯化，藻种制备周期长，形成藻丝的数量相对较少，难以适应大规模培养藻种的需要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种葛仙米藻种的制备方法，该方法通过选取藻种、清洗杀菌、匀浆、接种培养，得到大量的葛仙米藻种，本发明操作简单，效率高，周期短，适合葛仙米规大规模培养藻种的需要。
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案一种葛仙米藻种的制备方法按下列步骤顺序进行1、将葛仙米球形群体用水洗净，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去杂藻，然后在无菌水或培养液中清洗1-3次；2、将葛仙米球形群体放入匀浆器中，加入葛仙米球形群体重量0.1-1.0倍的培养液，匀浆，成丝状藻浆；3、培养液的配方为磷酸氢二钾20-60mg/L、硫酸镁40-80mg/L、氯化钙20-40mg/L、柠檬酸4-8mg/L、柠檬酸铁铵5-9mg/L、乙二胺四乙酸二钠盐1-2mg/L、碳酸钠5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者为水；其中微量元素为每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化锰1-2g、硫酸锌0.1-0.25g、镍酸钠0.2-0.4g、硫酸铜0.02-0.1g、硝酸钴0.03-0.05g、余者为水；在培养液中加入其重量0.8-1.5％的琼脂，在灭菌锅灭菌10-20分钟，成固体培养基；
4、将丝状藻浆接种于固体培养基中，培养条件为18-33℃，光照强度为10-200μE·m-2·s-1，培养8-20天；5、然后再接种在培养液中，培养条件条件为18-33℃，光照强度为10-200μE·m-2·s-1，经10-15天培养，藻丝便可形成微球体即成藻种；6、制备大规格藻种时，将原培养液去掉，更换成新鲜的培养液，在光照强度为10-400μE·m-2·s-1中，通气培养。
一种葛仙米藻种的制备方法按下列步骤顺序进行1、将葛仙米球形群体用水洗净，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去杂藻，然后在无菌水或培养液中清洗1-3次；2、将葛仙米球形群体放入匀浆器中，加入葛仙米球形群体重量0.1-1.0倍的培养液，匀浆，成丝状藻浆；3、培养液的配方为磷酸氢二钾20-60mg/L、硫酸镁40-80mg/L、氯化钙20-40mg/L、柠檬酸4-8mg/L、柠檬酸铁铵5-9mg/L、乙二胺四乙酸二钠盐1-2mg/L、碳酸钠5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者为水；其中微量元素为每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化锰1-2g、硫酸锌0.1-0.25g、镍酸钠0.2-0.4g、硫酸铜0.02-0.1g、硝酸钴0.03-0.05g、余者为水；
4、将接种在培养液中，培养条件条件为18-33℃，光照强度为10-200μE·m-2·s-1，经15-25天培养，藻丝便可形成微球体即成藻种；5、制备大规格藻种时，将原培养液去掉，更换成新鲜的培养液，在光照强度为10-400μE·m-2·s-1中，通气培养。
本发明与现有技术相比具有以下优点(1)操作过程简单，(2)不需要抗生素进行无菌纯化，(3)藻种制备周期短，(4)种藻群体全部转化为藻丝，因此形成的藻种数量多，适合大规模藻种制备的需要。
具体实施例方式一种葛仙米藻种的制备方法按下列步骤顺序进行1、采集种藻种藻的获得有两种方式，(1)野生葛仙米群体，(2)人工培养的葛仙米群体；对于野生的葛仙米，如果采集时间距制种时间在2天以上，可先将其晾干，长期保存，在制种之前用培养液充分浸泡使其复水成球状；对于人工培养的葛仙米群体，可在制种前采集，采集时最好处于葛仙米群体生长的对数期，选用表面光泽好、颜色墨黑、生长速度快、群体韧性好的藻体。
2、将葛仙米球形群体用水洗净，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去杂藻，然后在无菌水或培养液中清洗1-3次。
3、将葛仙米球形群体放入匀浆器中，加入葛仙米球形群体重量0.1-1.0倍的培养液，匀浆，成丝状藻浆。
4、培养液的配方为磷酸氢二钾20-60mg/L、硫酸镁40-80mg/L、氯化钙20-40mg/L、柠檬酸4-8mg/L、柠檬酸铁铵5-9mg/L、乙二胺四乙酸二钠盐1-2mg/L、碳酸钠5-30mg/L、
微量元素0.5-3ml/L、余者为水；其中微量元素为每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化锰1-2g、硫酸锌0.1-0.25g、镍酸钠0.2-0.4g、硫酸铜0.02-0.1g、硝酸钴0.03-0.05g、余者为水；在培养液中加入其重量0.8-1.5％的琼脂，在灭菌锅灭菌10-20分钟，成固体培养基。
5、将丝状藻浆接种于固体培养基中，培养条件为18-33℃，光照强度为10-200μE·m-2·s-1，培养8-20天。
6、然后再接种在培养液中，培养条件条件为18-33℃，光照强度为10-200μE·m-2·s-1，经10-15天培养，藻丝便可形成微球体即成藻种。
或者将步骤5和6合并为将丝状藻浆直接接种在培养液中，培养条件条件为18-33℃，光照强度为10-200μE·m-2·s-1，经15-25天培养，藻丝便可形成微球体即成藻种。
7、制备大规格藻种时，将原培养液去掉，更换成新鲜的培养液，在光照强度为10-400μE·m-2·s-1中，通气培养。
权利要求
1.一种葛仙米藻种的制备方法，其特征在于，该方法按下列步骤顺序进行(1)、将葛仙米球形群体用水洗净，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去杂藻，然后在无菌水或培养液中清洗1-3次；(2)、将葛仙米球形群体放入匀浆器中，加入葛仙米球形群体重量0.1-1.0倍的培养液，匀浆，成丝状藻浆；(3)、培养液的配方为磷酸氢二钾20-60mg/L、硫酸镁40-80mg/L、氯化钙20-40mg/L、柠檬酸4-8mg/L、柠檬酸铁铵5-9mg/L、乙二胺四乙酸二钠盐1-2mg/L、碳酸钠5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者为水；其中微量元素为每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化锰1-2g、硫酸锌0.1-0.25g、镍酸钠0.2-0.4g、硫酸铜0.02-0.1g、硝酸钴0.03-0.05g、余者为水；在培养液中加入其重量0.8-1.5％的琼脂，在灭菌锅灭菌10-20分钟，成固体培养基；(4)、将丝状藻浆接种于固体培养基中，培养条件为18-33℃，光照强度为10-200μE·m-2·s-1，培养8-20天；(5)、然后再接种在培养液中，培养条件条件为18-33℃，光照强度为10-200μE·m-2·s-1，经10-15天培养，藻丝便可形成微球体即成藻种；(6)、制备大规格藻种时，将原培养液去掉，更换成新鲜的培养液，在光照强度为10-400μE·m-2·s-1中，通气培养。
2.根据权利要求1所述的一种葛仙米藻种的制备方法，其特征在于，该方法按下列步骤顺序进行(1)、将葛仙米球形群体用水洗净，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去杂藻，然后在无菌水或培养液中清洗1-3次；(2)、将葛仙米球形群体放入匀浆器中，加入葛仙米球形群体重量0.1-1.0倍的培养液，匀浆，成丝状藻浆；(3)、培养液的配方为磷酸氢二钾20-60mg/L、硫酸镁40-80mg/L、氯化钙20-40mg/L、柠檬酸4-8mg/L、柠檬酸铁铵5-9mg/L、乙二胺四乙酸二钠盐1-2mg/L、碳酸钠5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者为水；其中微量元素为每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化锰1-2g、硫酸锌0.1-0.25g、镍酸钠0.2-0.4g、硫酸铜0.02-0.1g、硝酸钴0.03-0.05g、余者为水；(4)、将接种在培养液中，培养条件条件为18-33℃，光照强度为10-200μE·m-2·s-1，经15-25天培养，藻丝便可形成微球体即成藻种；(5)、制备大规格藻种时，将原培养液去掉，更换成新鲜的培养液，在光照强度为10-400μE·m-2·s-1中，通气培养。
全文摘要
本发明公开了一种葛仙米藻种的制备方法，该方法通过选取藻种、清洗杀菌、匀浆、接种培养，得到大量的葛仙米藻种。本发明与现有技术相比具有以下优点操作简单、不需要抗生素进行无菌纯化、藻种制备周期短、效率高、因此形成的藻种数量多，适合大规模藻种制备的需要。
文档编号C12N1/12GK1544611SQ200310111369
公开日2004年11月10日 申请日期2003年11月11日 优先权日2003年11月11日
发明者邓中洋, 胡征宇, 胡强 申请人:中国科学院水生生物研究所