专利名称：测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法
技术领域：
本发明涉及测定水中细菌总数的方法，尤其涉及一种测定工业用水中细 菌总数的方法。
背景技术：
细菌滋生是影响工业循环水质量的一个主要问题。在菌藻大量滋生、繁 殖的情况下，对冷却水系统的后果是十分严重的。其主要危害形式就是形成 生物粘泥和对系统材质的腐蚀，进而导致水质恶化、管道堵塞、设备腐蚀和 系统传热效率下降。主要应对措施就是使用多种氧化和非氧化杀菌剂进行综 合杀菌处理。而有效地进行杀菌处理的基础就是及时地掌握循环水系统细菌 滋生情况，即迅速准确地监测水系统的细菌总数。
目前，"GB/T14643.1工业循环冷却水中粘液形成菌的测定"平皿计数 法"是国标中允许的检测工业冷循环水中细菌总数的唯一标准方法。平皿计 数法的测定步骤为以无菌操作方法吸取lmL粘液制成的水样，注入盛有 9mL灭菌水的试管中，混匀成l: IO的稀释液。然后再吸取l: IO的稀释液 lmL，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1: 100的稀释液，按同法稀 释成l: 1000、 1: 10000稀释液等备用。用灭菌管吸取2 3个适宜浓度的稀 释液lmL，分别注入灭菌的培养皿中，在20分钟之内倾注10 15mL已融化 并冷却到45。C左右的营养琼脂培养基，立即旋摇培养皿；使水样与培养基 充分混合，带冷却凝固后，将培养皿翻转过来，底面向上，放入37t:恒温 箱内培养72小时，选择合适密度的平皿，操作人员手动进行菌落计数。
平皿培养法虽然比较稳定、可靠。但其需要在29± 1 "条件下培养72 小时，分析时间比较长；同时需对多个梯度进行稀释培养，工作量也比较大。 夏季细菌滋生迅速，如化工冷循环系统的硝化细菌滋生时，只需数天时间就 会将系统中的亚硝酸盐缓蚀剂转化殆尽。利用国标分析方法进行细菌监测，
分析周期滞后于现场要求的快速、基本准确的要求。
发明内容
本发明旨在解决国标方法分析工作量大、速度慢，滞后于现场要求的缺 陷，提供一种测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法。本发明的测定简便方法 能减少工作量，较快地测定细菌量，简化工作程序。
本发明是这样实现的-
一种测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法，它按照下述步骤执行
歩骤一根据GB/T 14643.1工业循环冷却水中粘液形成菌的测定的平皿计数 法，制备一系列细菌浓度的试样平皿；
歩骤二，对步骤一制备的试样平皿拍摄显微照片作为标准照片；
歩骤三，直接用无菌操作方法用灭菌刻度吸液管吸取lml被测工业水粘液制 成的水样，注入到灭菌后的培养皿中；
步骤四，在步骤三的培养皿中，倾注营养琼脂培养基，立即旋摇培养皿，使 水样与培养基充分混合，冷却；
步骤五，将步骤四中经过冷却的培养皿翻过来，底面向上，放入37。C恒温培 养箱内培养24小时，从培养箱取出培养皿，在显微镜下观察并参照步骤二获得的 标准照片比较确定细菌浓度数量级。
所述的测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法的步骤四和步骤三之间的时 间间隔小于20分钟。
所述的测定工业冷循环水中细菌总数的方法的步骤一当中所述的细菌浓度系 列为l(^个/mL、 10'个/mL、 1()2个/mL、 103个亂、1()4个/mL和1()5个/mL。
所述的测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法的步骤四所用的营养琼脂培 养基为10~15mL已融化并冷却到45'C左右的营养琼脂培养基。
所述的测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法，当被测水样的细菌浓度 〉1()S个/mL时，在步骤三之前需要对被测水样按照GB/T 14643.1工业循环冷却水 中粘液形成菌的测定的平皿计数法中的稀释方法作一次稀释。
所述的测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法，在第二次测定时候，只需 从歩骤三开始。
本发明所需培养时间由三天縮短为一天；计数方法不再是人工计数，而是通 过与预先建立的标准照片(标准照片可以是根据以往培养的平皿拍照留下来的照 片)进行比较而得出数目，虽然读数结果的精密度较国标法较低，只能得出浓度 数量级，但己满足现场控制的要求；计数方法的更改简化了分析步骤，使总菌数 《1(^个/mL的水样分析都省略了稀释浓度梯度的工作。而总菌数>106个/11^的水 样只需做一次稀释。使工作量减至原来的1/4-1/2。也就是说，用国标法分析一个 水样的总菌数需培养6-8块平皿(每个水样做双样)，而新方法分析一个水样一般 需要培养2块平皿(每个水样做双样)，浓度过高则需培养4块平皿；随着分析水 样需培养的细菌培养皿个数的减少，分析成本也同样程度的降低。
具体实施例方式
下面，给出本发明的
具体实施例方式
一种测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法，它按照下述步骤执行
歩骤一根据GB/T 14643.1工业循环冷却水中粘液形成菌的测定的平皿计数 法，按照1(^个/mL、 10'个/mL、 1()2个/mL、 103个/mL、 1()4个/mL和1()5个/mL 的细菌浓度制备一系列细菌浓度的试样平皿；
步骤二，对步骤一制备的试样平皿拍摄显微照片作为标准照片；
歩骤三，直接用无菌操作方法用灭菌刻度吸液管吸取lmL被测工业水粘液制 成的水样，注入到灭菌后的培养皿中；
步骤四，20分钟内，在步骤三的培养皿中，倾注10~15mL己融化并冷却到 45'C左右的营养琼脂培养基，立即旋摇培养皿，使水样与培养基充分混合，冷却；
歩骤五，将步骤四中经过冷却的培养皿翻过来，底面向上，放入37i:恒温培 养箱内培养24小时，从培养箱内取出培养皿，在显微镜下观察并对照步骤二获得 得标准照片比较确定细菌浓度数量级。
当被测水样的细菌浓度>106个/mL时，在步骤三之前需要对被测水样按照 GB/T 14643.1工业循环冷却水中粘液形成菌的测定的平皿计数法中的稀释方法作 一次稀释。
在第二次测定时候，只需从步骤三开始，可以直接利用第一次测定时候获得 的标准照片。
为了验证上述方法的准确性，取宽厚板连铸清循环的粘液制成的水样。按照 直接比较法，做平行样。培养后，对照标准照片，对出两块平皿总菌数均为103 个/ mL。
为检验数据的准确性，用国标法同样对水样进行分析，得出总菌数为3.6x103
个/ mL。
工业循环水细菌分析的控制指标为<105个/毫升。现场加药控制，只需要知道 循环水中的细菌个数达到哪个数量级就足够了，并不需要精确知道细菌有多少个。 可见，两种分析方法得出的数据结果相符。
权利要求
1. 一种测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法，其特征在于，它包括下述步骤步骤一根据GB/T 14643.1工业循环冷却水中粘液形成菌的测定的平皿计数法，制备一系列细菌浓度的试样平皿；步骤二，对步骤一制备的试样平皿拍摄显微照片作为标准照片；步骤三，直接用无菌操作方法用灭菌刻度吸液管吸取1ml被测工业水粘液制成的水样，注入到灭菌后的培养皿中；步骤四，在步骤三的培养皿中，倾注营养琼脂培养基，立即旋摇培养皿，使水样与培养基充分混合，冷却；步骤五，将步骤四中经过冷却的培养皿翻过来，底面向上，放入37℃恒温培养箱内培养24小时，从培养箱取出培养皿在显微镜下观察并对照步骤二获得的标准照片比较确定细菌浓度数量级。
2. 根据权利要求1所述的测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法，其特征 在于，所述的步骤四和步骤三之间的时间间隔小于20分钟。
3. 根据权利要求1或2所述的测定工业冷循环水中细菌总数的方法，其特征 在于，步骤一当中所述的细菌浓度系列为1()G个/mL、 101个/11^、 1(^个/mL、 103 个/mL 、 104个/mL和105个/mL 。
4. 根据权利要求1或2所述的测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法，其 特征在于，步骤四所用的营养琼脂培养基为10~15mL已融化的并冷却到45'C左右 的营养琼脂培养基。
5. 根据权利要求1或2所述的测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法，其 特征在于，当被测水样的细菌浓度〉l(^个/mL时，在步骤三之前需要对被测水样 按照GB/T 14643.1工业循环冷却水中粘液形成菌的测定的平皿计数法中的稀释方法作一次稀释。
6. 根据权利要求1或2所书的测定工业冷循环水中细菌总数的简便方法，其 特征在于，在第二次测定时候，只需从步骤三开始。
全文摘要
本发明涉及测定水中细菌总数的方法，尤其涉及一种测定工业用水中细菌总数的方法。测定步骤为无需稀释浓度梯度，直接用无菌操作方法用灭菌刻度吸液管吸取1mL粘液制成的水样，注入到灭菌后的培养皿中，在20分钟之内倾注10～15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，立即旋摇培养皿；使水样与培养基充分混合，待冷却凝固后，将培养皿翻过来，底面向上，放入37℃恒温培养箱内培养24小时，取出皿观察并对照标准照片比较确定细菌浓度数量级。本发明的测定简便方法能减少工作量，较快地测定细菌量，简化工作程序。
文档编号C12Q1/06GK101205554SQ200610147720
公开日2008年6月25日 申请日期2006年12月21日 优先权日2006年12月21日
发明者刘亭伶 申请人:上海宝钢工业检测公司