用于调节血流的物质和方法

专利名称：用于调节血流的物质和方法
用于调节血流的物质和方法 政府支持本申请的主题已经得到国家健康研究所(National Institutes of Health (National Heart, Lung and Blood Institute))的研究津贴，津贴号1R01 HL67886和1R01 HL68666和Department of Veterans Affairs, Grant No. 0001 (MeritReview)的支持。因此，政府可以享有本发明中的某些权利。相关申请的交互参考 本申请要求2005年5月12日提交的美国临时专利申请序号60/680，217 的优先权，将该临时申请完整引入本文作为参考。发明背景身体中多种組织中血流的调节是涉及许多因素的复杂过程。通过心脏 输出的调节和小动脉、后毛细管小静脉和心脏处的外周阻力保持血压。肾 脏通过调节血液体积促进血压的保持。血压的中心控制是整体的并且受到 不严格地称作血管运动中心的延髓区域内发散的神经元调节。缺氧或者二 氧化碳直接刺激血管运动中心。它还接受来自大动脉壁内感受器的输入。 从血管运动中心的输出改变心率和血管紧张度以将血压返回到可接受的水平。组织可以通过自身调节调节它们自己的血流。局部因素如降低的氧气、 升高的二氧化碳或者升高的摩尔渗透压浓度舒张小动脉和前毛细血管括约 肌。乳酸盐和钾离子浓度也导致局部血管舒张。损伤引起动脉和小动脉收 缩以限制失血。温度降低也引起局部区域中的血管收缩。循环或者局部激素因子可以改变小动脉的口径。组胺、心房钠尿肽、 肾上腺素、激肽、硝酸和腺苷都是血管扩张剂。血管收缩剂包括加压素、
去甲肾上腺素、血管紧张肽II和5-羟色胺。许多这些物质的任一种的作用 依赖于组织和那里细胞的受体补充。血流的精确控制对于身体全身的器官和组织的适当功能是关键的并且 在行为、学习和记忆中也起作用。通过肺循环的血流受到高度调节。例如， 肺内皮通过释放控制血管紧张度、血管开放性和正常血管壁结构的血管活 性物质调节肺血流并且保持低血管阻力。肺动脉高压(PH)是一种增加的肺血管阻力和肺动脉压力的状况，其 干扰通气-灌注关系。PH通常的特征是肺循环内升高的血压(收缩压高 于30mmHg，舒张压高于12mmHg)。肺动脉高压有两个亚类原发性(自发性的或者"未解释的")和继发 性的。继发形式更普遍。继发性肺动脉高压的最常见的原因是心脏病和肺病o不管肺动脉高压的根本原因如何，肺的血管经历解剖学上的改变，其 促进肺动脉高压的发展。一氧化氮是在调节肺血流中起重要作用的一种物质。然而，它是一种 没有已知的储存机制的气体，其在膜之间自由扩散并且非常不稳定。 一氧 化氮的生物学半寿期为数秒的数量级，并且它的产生受到严格调节。一氧化氮通过两类一氧化氮合酶(NOS)产生。组成型表达的一氧化 氮合酶作为两种同工型存在内皮一氧化氮合酶(eNOS)和神经元一氧化氮 合酶(nNOS)。这些同工型在血管内皮细胞、血小板和神经组织如脑中表达。在血管中，eNOS介导对多种介质应答的内皮依赖性血管舒张。 一氧 化氮水平应答切应力(即，在血流方向中作用于血管上的力)而升高，并 且是炎症的介质。在神经系统中，神经元NOS同工型局部化成小脑、嗅球、海马、紋状 体、基底前脑和脑干中神经元的离散群体。第二类一氧化氮合酶包括诱导型一氧化氮合酶(iNOS)，在巨噬细胞、 肝细胞和肿瘤细胞中表达。Steuhr et al.， Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. 65:287-346 (1992); Lowenstein et al" Proc. Natl. Acad. Sci. (USA)
89:6711-6715(1992)。该形式的NOS作为细胞毒性剂发挥功能，并且通过 诱导型NOS产生的NO靶定肺瘤细胞和病原体。NOS的所有同工型都催化L-精氨酸向L-瓜氨酸的转化，并产生NO。 在血管平滑肌细胞和血小板中，NO激活可溶性鸟苷酸环化酶，其增加细 胞内3',5，-环一磷酸鸟苷(cGMP),从而诱导血管舒张和抑制血小板聚集。 后天性心脏病继发的肺动脉高压以左心室的病症开始，其导致肺静脉高压， 接着导致肺动脉高压。PAH的病理学是复杂的。血管内皮细胞功能障碍似 乎是PAH发展中的一个因素，因为包括一氧化氮(NO)在内的血管内皮来 源的介质通过肺循环中NO/cGMP-介导的血管舒张在血管功能的调节中起 作用。已经观察到在肺动脉高压患者的肺中eNOS的表达减少和/或NO产 生减少(Giaid A， and D. Saleh (1995) "Reduced expression of endothelial nitric oxide synthase in the lungs of patients with pulmonary hypertension" N. Engl. J. Med. 333:214-221)。血管内皮细胞通过eNOS介导的氧化性分 解代谢反应从L-精氨酸的代谢产生NO(Michel T. and O. Feron (1997) "Nitric oxide synthases: Which, where, how, and why " J. Clin. Invest. 100:2146-2152; Garcia-Cardena G， R. Fan, D.F. Stern, J. Liu， and W.C. Sessa (1996) "Endothelial cell nitric oxide synthase is regulated by tyrosinee phosphorylation and interacts with caveolin-l" J. Biol. Chem. 271:27237-27240)，其激活可溶性鸟苷酸环化酶，导致cGMP的产生增加。 从而，NO的生理作用通过cGMP的形成或者NO/cGMP信号传递介导 (Chen S， J.M. Patel and E.R. Block (2000) "Angiotensin IV画mediated pulmonary artery vasorelaxation is due to endothelial intracellular calcium release" Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 279: L849-L856; Marietta, M.A. (1993) "Nitric oxide synthase structure and mechanism" J. Biol. Chem. 268:12231-12234)。许多受体介导的激动剂，包括緩激肽、乙酰胆碱、 组胺、血管紧张肽IV和5-羟色胺通过eNOS的信号转导介导的激活增强 NO的内皮细胞释放(Chen， S.， J.M. Patel and E.R. Block (2000) "Angiotensin IV-mediated pulmonary artery vasorelaxation is due to
endothelial intracellular calcium release" Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 279: L849-L856; and Davis MG， G.J. Fulton and P.O. Hagen (1995) "Clinical biology of nitric oxide" Br. J. Surg. 82:1598-1610.)。 eNOS 的催化活性受到多种转录后机制的调节，所述机制涉及多种因素，包括磷 酸化状态、钓动员和蛋白质蛋白质相互作用(Patel， J.M. et al. (1999) "Increased expression of calreticulin is linked to Ang画IV-mediated activation of lung endothelial NOS" Am. J. Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 277:L794誦L801 and Garcia-Cardena G. et al. (1998) "Dynamic activation of endothelial nitric oxide synthase by HSP 90" Nature 392:821-824)。cGMP的细胞水平对于包括血管舒张的多种功能的调节是关键的。已 知称作磷酸二酯酶(PDE)的酶家族通过水解活性的调节控制细胞cGMP 水平的暂时和持续升高。PDE-5是肺脉管系统中主要的cGMP催化性PDE 同工型。苯氮噪呤酮(Zaprinast)是一种cGMP特异性PDE抑制剂，可 以增强肺循环中的血管舒张(Schutte, H.， M. Witzenrath， K, Mayer, N. Weissmann, A. Schell， S. Rosseau， W. Seeger， and F. Grimminger (2000) "The PDE inhibitor Zaprinast enhances NO-mediated protection against vascular leakage in reperfused lungs" Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 279:L496隱L502)。关于PDE抑制剂，有几种非肽治疗剂，其对于PDE的选择性同工型 的抑制是特异的，一种在美国被批准或用于人类研究中以调节肺血管功能。 尽管苯氮嘌呤酮是PDE 5的选择性抑制剂——肺脉管系统内皮中的主要同 工型，但是仅仅在动物模型中测试了它的药理学作用。此外，这些治疗剂 中没有一种已知通过eNOS激活和NO产生来调节cGMP的细胞水平。它 们的生理作用仅仅基于cGMP的水解降低。肺动脉高血压(PAH)的特征是血管阻塞和肺动脉压的持续升高或者血 管收缩。将PAH分类为原发性的(特发性)或者继发性的，与胶原血管 疾病有关。尽管PAH的病理学不很清楚，但是许多内在和外在的因子在循环中
血管扩张剂和血管收缩剂的产生中引起不平衡。这可以导致发生组织损害，包括肺小动脉阻塞(Farber， H.W. and J. Loscalzo (2004) "Mechanism of Disease: Pulmonary arterial hypertension" N. Engl. J. Med. 351:1655-1665， 2004 and Newman, J.H.， B丄.Fanburg， S丄.Archer et al. (2004) "Pulmonary arterial hypertension: future directions" Circulation 109:2947-2952)。当前，治疗PAH的治疗方法包括多种前列环素制剂(伊落前列素、 treprostinil、贝拉普罗)，补充供氧，抗凝血剂(华法林)，钩通道阻断 剂，内皮素拮抗剂(sitaxsentan)，补充的一氧化氮(NO)，和磷酸二酯 酶抑制剂(苯氮嘌呤酮，西地那非)，取得了有限的成功(Galie， N.， A. Manes, and A. Branzi (2003) "Prostanoids for pulmonary arterial hypertension" Am. J. Respir. Med. 2:123-137; and Mehta， S. (2004) "Drug therapy for pulmonary arterial hypertension: what's on the menu today " Chest 124:2045-2049)。本领域需要帮助调节血流的新的组合物和方法，以便处理多种病理状 况以及改善认知功能。简述本发明提供了用于增强一氧化氮(NO)活性和/或升高细胞一磷酸鸟苷 (cGMP)的物质和方法。通过这些机制，本发明可以有利地用于实现例如 血管舒张。在特定实施方案中，本发明提供了三种肽，在本文中称作P3、 P4和 P6，已经发现它们增强内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的活性。还已经发现 这些肽降低cGMP特异性磷酸二酯酶的活性。这些肽还可以用于抑制环腺苷酸(cAMP)依赖性PDE同工型和相关的 功能。因为它们有利的生理学性质，本发明的肽可以如本文描述的用于调 节血流和治疗多种状况，包括例如，肺动脉高压、性功能障碍、脑缺血、 减小血小板聚集，和增强记忆和学习。本文特别示例的是本发明的肽用于
治疗肺动脉高压的用途。本发明的另 一方面涉及包含本发明的肽的药物组合物和它们的递送方法。附图简述 本专利的文件含有至少一副彩图。图l描绘了本发明的肽借以发挥它们活性的机理。图2显示了本发明的肽增强eNOS活性的能力。图3显示了用本发明的肽抑制cGMP依赖性活性。图4显示了使用或不使用一氧化氮合酶抑制剂L-NAME，低氧小鼠肺 的肽和苯氮嘌呤酮i秀导的血管舒张。图5显示了通过肽(P3,P4，P6)和苯氮嘌呤酮对cGMP-磷酸二酯酶 (PDE)活性的抑制。图6显示了与含氧量正常的肺中基线PAP相比，低氧诱导的血管收缩 或者肺动脉压(PAP)的显著增加。图7表明在来自含氧量正常的和低氧肺的灌注液中，P3增加NO释放。图8表明与含氧量正常的肺中PAP相比，接触低氧2、3和6周引起PAP 显著增加。图9显示分别由于低氧诱导的肺和心脏水肿引起的增加的LW/BW和 RV/HW比。

图10显示了分别由于低氧诱导的肺和心脏水肿引起的增加的LW/BW 和RV/HW比。图11显示了通过施用P3减弱低氧诱导的PAP压力。 图12显示了通过施用P3降低低氧诱导的RV/HW比。序列简述SEQ ID NO:l是在本文中称作P3的合成肽KRFNSISCSSWRRKR， 已经发现其增强内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的活性。
SEQ ID NO:2 是在本文中称作 P4 的合成肽 KKRFNSISCSSWRRKRKKR,已经发现其增强内皮细胞一氧化氮合酶 (eNOS)的活性。SEQ ID NO:3是在本文中称作P6的合成肽WRRKRKES，已经发 现其增强内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的活性。发明详述本发明提供了用于调节血流的物质和方法。在优选实施方案中，本发 明提供了能够增强一氧化氮(NO )活性和/或升高细胞一磷酸鸟苷(cGMP) 的肽。本发明的肽还可以用作磷酸二酯酶(PDE)的抑制剂。通过这些机 制，本发明可以通过例如，实现血管舒张有利地用于调节多种组织中的血 液，从而在多种背景中提供治疗益处。在特定实施方案中，本发明提供了称作P3、 P4和P6的三种肽，已经 发现它们增强内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的活性。还已经发现这些肽降 低cGMP特异性磷酸二酯酶活性。因为它们的有利的生理学性质，本发明的肽可以如本文所述的用于治 疗多种疾病，包括例如，肺动脉高压、性功能障碍、脑缺血，并且可以减 小血小板聚集，和增强记忆和学习。本文特别示例了本发明的肽用于治疗 肺动脉高压的用途。此外，通过抑制PDE的特定同工型，本发明的肽可以用于多种治疗方 法中。本发明的PDE抑制剂的特定治疗用途包括下面的PDE5 =血管舒张PDE3/4 =支气管扩张和抗炎PDE4=抗炎PDE3=心脏作用在特定实施方案中，本发明的肽可以用于调节心脏、脑、肾、肺和/ 或其他器官中的血流。本发明的另 一方面涉及包含本发明的肽的治疗组合物。
本文特别示例的肽如下 P3: KRFNSISCSSWRRKR (SEQ ID NO:l); P4: KKRFNSISCSSWRRKRKKR (SEQ ID NO:2);和 P6: WRRKRKES (SEQ ID NO:3)。本发明的肽可以用作治疗剂以调节eNOS活性，NO产生，和 NO/cGMP-介导的血管舒张以及抑制PDE活性，导致cGMP水解降低。 这些活性的净结果是保持cGMP的持续的细胞水平和cGMP介导的功能。本发明的肽是尤其有利的，因为它们可以以图1中所示的两种不同的 机制的至少一种调节细胞cGMP水平，即i)eNOS的活化，产生NO和增 加产生cGMP和ii)抑制PDE活性，导致cGMP水解降低，净结果是细 胞cGMP水平的持续升高。可以通过本发明治疗的受试者包括希望调节其血流的任何受试者人 或者动物。尽管本发明治疗的受试者主要是人类受试者，但是本发明也可 以用动物受试者如狗、猫、马等等为了兽医的目的进行。如下面更详细讨论的，用于实现前述疗法的活性化合物可以通过任何 合适的方式施用，所述方式包括经口、腹膜内、皮下、动脉内、静脉内、 肌内和鞘内注射。注射可以通过注射器、通过插管或者导管注射到希望的 血管或者器官等等。可以通过吸入将化合物施用到呼吸道，尤其肺泡，如 通过吸入包含活性化合物的可吸入的气雾剂颗粒(例如，1到5微米直径 颗粒)。由于多种原因，如肺病的局部治疗、注射治疗的替代和快速开始作用， 将药物施用到患者的肺是有利的。已经开发了多种不同的装置以将药物递 送到肺，例如，加压的气雾剂(pMDI)、喷雾器和干粉吸入器(DPI)。尽管为了局部治疗肺病已经充分建立了药物的吸入，但是肺对于药物 的全身递送也是吸引人的部位，因为它对于分子穿过薄的上皮组织吸收提 供了大的表面积(约100m2)，从而得到快速药物吸收潜力。在下文更详细讨论的本发明的药物制剂通常包含活性化合物和可药用 载体。可以使用任何可药用载体，如无菌盐水溶液、无菌水，等等。活性 化合物以任何合适的量，如按重量计约百分之0.001、 0.005或0.01到按重 量计约百分之IO、 20或50的量包括在可药用载体中。活性化合物的剂量将取决于具体肽、施用途径、所治疗的具体病症、 受试者的年龄、体重和状况等等。加入到肽制剂以增加它们的稳定性的赋 形剂包括緩冲剂、糖、表面活性剂、氮基酸、聚乙二醇，和聚合物。肽可以如上述的直接施用或者通过在受试者中表达所述肽的中间载体 施用。从而，用于实施本发明的载体通常是RNA病毒或者DNA病毒载体， 如慢病毒载体、乳多空病毒载体(例如，SV40载体和多瘤载体)、腺病毒 载体和腺伴随病毒载体。 一般见T. Friedmann， Science 244， 1275 16 (1989 年6月)。可以用于实施本发明的慢病毒载体的实例包括莫洛尼鼠白血病病 毒载体，如Kohn的美国专利号5,707,865中描述的那些。任何腺病毒载体 都可以用于实施本发明。见例如，美国专利号5,518,913，美国专利号 5,670,488,美国专利号5,589,377;美国专利号5,616,326;美国专利号 5，436,146;和美国专利号5，585，362。可以修饰腺病毒以改变或者加宽其天然 向'性,ft口 S. Woo， Adenovirus redirected, Nature Biotechnology 14， 1538 (1"6年11月)中所述。可以用任何腺伴随病毒载体(或者AAV载体)实 施本发明。见例如美国专利号5，681，731;美国专利号5，677，158;美国专利 号5,658,776;美国专利号5,658,776;美国专利号5，622，856;美国专利号 5,604,090;美国专利号5,589,377;美国专利号5,587,308;美国专利号 5,474,935;美国专利号5,436,146;美国专利号5,354,678;美国专利号 5,252,479;美国专利号5,173,414;美国专利号5，139,941;和美国专利号 4,797,368。载体中的调节序列或者转录和翻译控制序列可以是任何合适的 来源，只要它们实现异源核酸在耙细胞中的表达。例如，通常使用的启动 子是LacZ启动子，和来自多瘤、腺病毒2和猿猴病毒40 (SV40)的启动 子。见例如美国专利号4,599,308。 一旦制备，就可以通过如下步骤增殖重 组载体(a)在细胞培养物中增殖载体，细胞培养物包含允许其中的载体 生长和繁殖的细胞；然后(b)从细胞培养物收集重组载体，都根据已知的 技术进行。可以根据已知的技术分离从培养物收集的病毒载体与培养基，
将病毒载体与合适的药物载体组合以施用于受试者。此类药物载体包括， 但不限于，无菌的无致热原水或者无菌的无致热原盐水溶液。如果希望， 可以根据已知的技术将载体包装在脂质体中用于施用。见例如，美国专利号6,875,749。制剂和施用本发明的药物组合物包含液体组合物和其干燥形式。为了本发明的目 的，关于药物组合物或者制剂的术语"液体"包括术语"水性的"，并且包括 冷冻的液体制剂。"干燥形式"意指将液体药物组合物或者制剂通过冷冻干 燥(即，冻干；见例如，Williams和Polli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38:48-59),喷雾干燥(见Masters (1991)在Spray-Drying Handbook (5th ed; Longman Scientific and Technical, Essez， U.K.), pp. 491-676; Broadhead et al. (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206;和Mumenthaler et al. (1994) Pharm. Res. 11:12画20)，或者风千(Carpenter and Crowe (1988) Cryobiology 25:459-470; and Roser (1991) Biopharm. 4:47-53)干燥。术语 "冻干"指在减压下快速冷冻干燥多个小瓶，每瓶含有单位剂量的本发明的 肽制剂。进行上述冻干的冷冻干燥器可以通过商业途径获得并且可以由本 领域技术人员容易地操作。在本发明的一个实施方案中，将液体组合物制 备为冻干的组合物。在本发明的一个实施方案中，可以以适于经肺递送的形式制备药物组 合物并通过经肺吸入将制剂施用于受试者。"经肺吸入"意指通过将药物组 合物以气雾剂或者其他合适的制剂从递送装置递送到受试者的口腔并随着 受试者通过口腔吸入直接施用到肺部。"气雾剂"意指流动空气或者其他生 理学上可接受的气流中的固体或者液体颗粒悬浮物。其他合适的制剂包括， 但不限于，雾、蒸汽或者喷雾制剂，只要包含肽组合物的颗粒在与关于如 下述的药物组合物的干粉形式所述一致的大小范围内递送。通过本领域技 术人员已知的其他合适的方法也可以完成经肺吸入。这些方法包括使用合 适的装置或者其^f也此类方法进行液体滴注。经肺吸入导致吸入的蛋白质组
合物沉积在受试者肺的肺泡中。 一旦沉积，蛋白质就可以通过肺泡上皮和 毛细管上皮层^f皮动或主动吸收到血流中。肽的经肺施用需要在吸入期间将生物活性物质从递送装置分配到受试 者的口腔中。为了本发明的目的，可以通过吸入从水性或者非水性溶液或 者悬浮液形式得到的气雾剂或者其他合适的制剂，或者药物组合物的固体 或者干粉形式来施用包含所述肽的药物组合物，这取决于使用的递送装置。 此类递送装置是本领域中公知的并且包括，但不限于，喷雾器、定量吸入 器，和干粉吸入器，或者任何其他合适的递送机制，其允许药物组合物作 为水性或者非水性溶液或者悬浮液或者作为固体或者干粉形式分配。当在 适于经肺递送的药物组合物背景中使用时，这些术语具有下面预期的含义。 "水性的"意指用水制备、含水或者溶解在水中的组合物，包括混合物，其 中水是混合物中的主要物质。"非水性的，，意指用不同于水的物质制备、含 有所述物质或者溶解在所述物质中的组合物或者混合物，其中水不是该混 合物中的主要物质。"溶液"意指两种或多种物质的均匀制剂，所述物质可 以是固体、液体、气体或者其相互组合。"悬浮液，，意指物质的混合物，使 得一种或多种不溶性物质均勻分散在另 一种主要物质中。为了本发明的目的，术语"固体"和"干粉"关于药物组合物可互换使用。 药物组合物的"固体"或者"干粉"形式意指已经将组合物干燥成细分的粉末，其具有按重量计低于约10%,通常按重量计低于约5%，优选按重量 计低于约3%的含湿量。组合物的该干粉形式由包含本发明的肽的颗粒组 成。优选的颗粒大小小于约10.0jim平均直径，更优选小于约7.0nm，甚 至更优选约小于约6.0nm，甚至更优选在0.1到5.0jim的范围内，最优选 约1.0到约5.0 jim范围内的平均直径。从而，意在用于经肺递送的包含肽或者其变体的液体药物组合物可以 用作递送装置中的液体溶液剂或者混悬剂或者使用本领域中公知的冻干或 者喷雾干燥技术首先加工成干粉形式。当在递送装置中使用液体溶液剂或 者混悬剂时，喷雾器、定量吸入器或者其他合适的递送装置，以单次或者 多次部分剂量，通过经肺吸入将药学有效量的组合物作为小滴递送到受试
者的肺，所述小滴具有上面关于干粉形式提到的相同的颗粒大小范围。"药 学有效量"意指用于治疗或者预防对本发明肽应答的疾病或状况的量。组合 物的液体溶液剂或者混悬剂可以与本领域技术人员已知的生理学上合适的 稳定剂、赋形剂、粘性改进剂、填充剂、表面活性剂或者其组合一起使用， 只要它们不损害本发明的肽组合物的显著特征。当液体药物组合物在以经肺递送使用前冻干时，将冻干的组合物碾磨 以得到细分的干粉，其由上面提到的所希望的大小范围内的颗粒组成。当 使用喷雾干燥以得到液体药物组合物的干粉形式时，在导致由具有上述希 望的大小范围的颗粒组成的基本上无定形细分干粉的条件下进行该方法。 关于制备药物组合物的干粉形式的方法，见例如，引入本文作为参考的WO 96/32149; WO 97/41833; WO 98/2卯96;和美国专利号5,976,574; 5，985，248; 6，001，336;和6,875,749。当将制备药物组合物的干粉形式并作为水性或者非水性溶液剂或者混 悬剂分配时， -使用定量吸入器或者其他合适的递送装置。以气雾剂或者适于经肺吸入的其他合适的制剂施用药学有效量的干粉 形式的组合物。置于递送装置中的干粉形式的组合物的量足够允许通过吸 入向受试者递送药学有效量的组合物。递送装置在单个或者多个部分剂量 中，通过经肺吸入向受试者的肺递送药学有效量的组合物。气雾剂喷射剂 可以是用于该目的的任何常规的物质。可以向药物组合物中加入表面活性 剂以减小含有蛋白质的干粉粘附到用以分配气雾剂的递送装置的壁上。用 于该预期用途的合适的表面活性剂包括，但不限于，去水山梨糖醇三油酸 酯、大豆卵磷脂和油酸。适于作为非水性混悬剂经肺递送干粉形式的蛋白 质组合物的装置可通过商业途径获得。此类装置的实例包括Ventolin定量 吸入器(Glaxo Inc.， Research Triangle Park, N.C.)和Intal Inhaler (Fisons， Corp" Bedford, Mass.)。也见引入本文作为参考的美国专利号5,522,378; 5，775，320; 5,934,272;和5,960,792中描述的气雾剂递送装置。当固体或者干粉形式的药物组合物将作为干粉形式递送时，优选使用 千粉吸入器或者其他合适的递送装置。适于根据本文方法使用的可商购的
千粉吸入器的实例包括Spinhaler干粉吸入器(Fisons Corp., Bedford, Mass.)和Ventolin Rotahaler (Glaxo, Inc., Research Triangle Park, N.C.)。 也见本文引入作为参考的WO 93/00951， WO 96/09085， WO 96/32152，和 美国专利号5,458,135， 5,785,049，和5,993,783中描述的干粉递送装置。包含肽或者其活性变体的干粉形式的药物组合物可以被重构成水性溶 液以使用喷雾器、定量吸入器或者其他合适的递送装置随后作为水性溶液 气雾剂递送。喷雾器可以通过商业途径获得并且包括例如，Ultravent喷雾 器(Mallinckrodt Inc., St. Louis, Mo.)和Acorn II喷雾器(Marquest Medical Products, Englewood， Colo.)。也见WO 93/00951中描述的喷雾器， 和美国专利号5，544，646中描述的用于递送气雾化水性制剂的装置；将这些 文献引入本文作为参考。本发明的药物组合物可以是"稳定化"的组合物。药物组合物或制剂一 旦制备，并不立即施用于受试者。相反，制备后，将其以液体形式、冷冻 形式或者干燥形式包装保存用于以后重构成适于施用于受试者的液体形式 或者其他形式。本发明的稳定化的药物制剂包含示例的肽和其变体。变体具有与SEQ IDNOs:l-3中显示的序列相同、相似或者基本上相似的^t^酸序列。还包 括保留其活性的片段或者截短形式。本发明还包括具有一个或多个突变的变体，所示突变例如提高它们的 药学效用。技术人员将明白通过突变可以向编码肽的核苷M列中引入改变，从 而导致氨基酸序列改变，而不改变干扰素的生物学活性。从而，通过向对 应的核苷酸序列中引入一个或多个核苷酸替代、添加或者缺失，从而向所 编码的肽中引入一个或多个M酸替代、添加或者缺失，可以产生编码变 体的分离的核酸分子，所述变体具有与所述肽的氨基酸序列不同的序列。 可以通过标准技术引入突变。本发明包括此类变体。例如，可以在一个或多个非必需氨基酸残基处进行保守氨基酸替代。 "非必需"氨基酸残基是可以从所述序列改变而不改变其生物活性的残基， 而"必需"氨基酸残基是生物活性所需的。"保守氨基酸替代"是将氛基酸残 基用具有相似侧链的氨基酸参加替代的替代。本领域中已经定义了具有相 似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如， 赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、 不带电的极性侧链氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、 苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、 亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、p链侧链氨 基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)，和芳族侧链氨基酸(例如，酪 氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。生物活性变体将与作为比i^础的^J^酸序列通常有至少80%，更优 选约卯％到约95%或以上，最优选约96%到约99%或以上的^^酸序列 同一性。"序列同一性"意指将变体多肽的氨基酸分子的特定的连续区段与 作为参考的多肽分子的M酸序列比对和比较时，在该变体多肽和参考分 子之间相同的氨基酸残基。从而，使用数学算法可以完成任何两个序列之间百分数同一性的确定。 用于序列比较的数学算法的一个优选的非限制性实例是Myers和Miller (1988) Comput. Appl. Biosci. 4:11-7的算法。本发明包括的生物活性变体还包括共价连接例如聚乙二醇(PEG)或 者白蛋白的肽。这些共价杂种分子具有一定的所希望的药学性质，如施用 于患者后延长的血清半寿期。产生PEG加合物的方法包括化学修饰单甲氧 基聚乙二醇以产生活化的化合物，其将与肽反应。制备和使用PEG连接的 多肽的方法例如在Delgado et al. (1992) Crit. Rev. Ther. Drug, Carrier Syst. 9:249-304中描述。产生白蛋白融合多肽的方法涉及目的多肽与白蛋 白的编码序列的融合并且在引入本文作为参考的美国专利号5，876，969中 描述。本发明包括的肽的生物活性变体应该保留相关的活性，尤其增强 eNOS活性的能力。在一些实施方案中，变体保留M酸序列在SEQ ID NOs: 1-3中给出的多肽的生物活性的至少约25%,约50%，约75%，约
85 % ，约卯％ ，约95 % ，约98 % ，约99 %或以上。还包括与SEQ ID NOs: 1-3中显示的多肽的活性相比活性增加的变体。可以将本发明的制剂施用于任何动物物种，包括但不限于，鸟、犬、 牛、猪、马、和人。优选地，受试者是哺乳动物物种。在本发明的一些实施方案中，重组产生肽。通过培养用包含编码肽的 核苷酸序列的表达载体转化的宿主细胞，可以产生肽。宿主细胞是可以转 录所述核苷酸序列并且产生所希望的蛋白质的细胞，并且可以是原核的(例 如，大肠杆菌(E. coli))或者真核的(例如，酵母、昆虫或哺乳动物细 胞)。重组产生的实例在Mantei et al. (1982) Nature 297:128; Ohno et al. (1982) Nucleic Acids Res. 10:967; Smith et al. (1983) Mol. Cell. Biol. 3:2156， 和美国专利号4,462,940， 5,702,699,和5,814,485中给出，将这些文献引入 本文作为参考。备选地，通过转基因动物或者植物可以产生肽，所述转基 因动物或者植物已经根据本领域中公知的方法遗传工程化以表达目的蛋白 质。备选地，通过肽领域技术人员已知的几种技术的任一种可以化学合成 肽。见例如，Li et al. (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:2216-2220， Steward和Young (1984) Solid Phase Peptide Synthesis (Pierce Chemical Company, Rockford, 111.),和Ba醒ey和Merrifield (1980) The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, ed. Gross和Meinhofer, Vol. 2 (Academic Press, New York, 1980)， pp. 3-254,讨论固相肽合成4支术；和Bodansky (1984) Principles of Peptide Synthesis (Springer-Verlag， Berlin)和Gross 和Meinhofer, eds. (1980) The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 1 (Academic Press, New York),讨论经典溶液合成。使用本领域技术人员已知的任一种方法可以回收和纯化用于制备本发 明的药物组合物的重组产生的肽。此类方法包括引入本文作为参考的美国 专利号4，462，940和5,702,699中公开的那些方法。本发明包括的组合物可以具有少至约0.01 mg/ml肽和多达约20.0 mg/ml肽(重量/体积)。在多种实施方案中，肽以约0.01 mg/ml到约20.0mg/ml，约0.015 mg/ml到约12.5 mg/ml，约0.025 mg/ml到约10.0 mg/ml， 约0.05 mg/ml到约8.0 mg/ml，约0.075 mg/ml到约6.0 mg/ml，约0.1 mg/ml 到约4.0 mg/ml，约0.125 mg/ml到约2.0 mg/ml,约0.175 mg/ml到约1.0 mg/ml，约0.2 mg/ml到约0.5 mg/ml，约0.225 mg/ml到约0.3 mg/ml，和约 0.25 mg/ml的浓度存在。在一些实施方案中，本发明的制剂包含可药用载体。"可药用载体"意 指惯用于本领域中以方便治疗成分的保存、施用和/或治疗效果的载体。载 体还可以降低肽的任何不需要的副作用。合适的载体将是稳定的，即，不 能与制剂中的其他成分反应。在用于治疗的剂量和浓度下，它将不在受者 中产生显著的局部或者全身的不利作用。此类载体是本领域中公知的。本 发明的合适载体是那些惯用的大的稳定的大分子，如明胶、胶原、多糖、 单糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨基酸、不挥发油、油酸 乙酯、脂质体、葡萄糖、乳糖、甘露糖、葡萄糖、葡聚糖、纤维素、山梨 糖醇、聚乙二醇(PEG)，等等。緩释载体如透明质酸也是合适的。尤其 见Prisell et al. (1992) Int. J. Pharmaceu. 85:51-56，和美国专利号 5,166,331。药物组合物可以额外包含促进肽的溶解度的增溶剂或者溶解度增强 剂。此类溶解度增强剂的实例包括^J^酸精氨酸，以及精氨酸的能够增强 溶解度的氣基酸类似物。此类类似物包括，但不限于，含有精氨酸的二肽 和三肽。额外的稳定增溶剂在美国专利号4,816,440; 4,894,330; 5，004，605; 5,183,746; 5,643,566;和Wang et al. (1980) J. Parenteral Drug Assoc. 34:452-462中讨论，将这些文献引入本文作为参考。可以加入其他稳定剂，如乙二胺四乙酸(EDTA)或者其一种盐，如 EDTA二钠，以进一步增强液体药物组合物的稳定性。其他合适的稳定剂 包括非离子表面活性剂，包括聚氧乙烯山梨醇酯，如聚山梨酯80(Tween 80) 和聚山梨酉旨20(Tween 20);聚氧丙烯-聚氧乙烯酯，如Pluronic F68和 Pluronic F127;聚氧乙烯醇如Brij 35; 二甲基珪油；聚乙二醇如PEG400; 溶血磷脂胆碱；和聚氧乙烯-对-叔辛基酚，如Triton X-100。通过表面活性剂对药物的典型的稳、定描述于例如Levine et al.(1991) J. Parenteral Sci. Technol. 45(3):160-165,将其引入本文作为参考。"药学有效量，，意指用于治疗或预防疾病或状况的量。典型的施用途径 包括，但不限于，经口施用、经鼻递送、经肺递送、和肠胃外施用，包括 经皮、静脉内、肌内、皮下、动脉内和腹膜内注射或者输注。在一个这种 实施方案中，通过注射，优选皮下注射施用。本发明组合物的可注射形式 包括，但不限于，溶液剂、混悬剂和乳剂。通常，肽的治疗有效量包含约 0.01 ng/kg到约5 mg/kg组合物，优选约0.05 ng/kg到约1000 ng/kg，更优 选约0.1 fig/kg到约500 jig/kg,甚至更优选约0.5 ng/kg到约30 fig/kg。稳定化的药物组合物可以通过膜过滤消毒并且保存在单位剂量或者多 剂量容器如密封的小瓶或者安瓿中。本领域中公知的配制药物组合物的其 他方法可以用于进一步增强本领域中公开的药物组合物的保存稳定性，只 要它们不会不利地影响如本文公开的稳定剂的有益效果。制剂和可药用载 体、稳定剂等等的选择的完整讨论可以见Remington's Pharmaceutical Sciences (19卯)(18th ed.， Mack Publishing Company, Eaton， Pa.)，将其引 入本文作为参考。下面是实施例，其阐明了实施本发明的步骤。不应将这些实施例理解 为限定。除非另外指出，所有百分数都是按重量计并且所有溶剂混合物比 例都是按体积计。实施例i —肽对eNOS的影响用培养的肺动脉内皮细胞(PAEC)模型检查了本发明的合成肽(P3， P4， 和P6)对eNOS的催化活性的影响。在存在或不存在不同浓度的P3, P4，或P6下，在RPMI1640培养基中 37。C下培养PAEC单层1小时。培养后，如以前描述的通过监测从[311丄-精氨酸形成[3H-瓜氨酸来测定eNOS的催化活性(Chen， S.， J.M. Patel and E.R. Block ER (2000) "Angiotensin IV-mediated pulmonary artery vasorelaxation is due to endothelial intracellular calcium release" Am. J.Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 279:L849-L856; and Patel, J.M.， Y.D. Li， J丄.Zhang et al. (1999) "Increased expression of calreticulin is linked to Ang誦IV-mediated activation of lung endothelial NOS" Am. J. Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 277:L794國L801)。如图2中所示，与对照相比，P3，P4和P6刺激的细胞中eNOS的催化 活性以剂量依赖性方式显著增强。实施例2 —cGMP-特异性PDE活性的调节评价合成肽以评估与PAEC中cGMP-特异性PDE活性调节的任何关联。在10 jiM每种P3， P4， P6或苯氮嘌呤酮(Zaprinast)存在下或不存在 (对照)下，在RPMI1640培养基中37。C培养细胞单层l小时。培养后， 将细胞洗涤、匀浆，并通过在4。C以15,000 x g离心15分钟收集上清液。 通过如以前描述的(16 )监测3H-cGMP的水解来测量上清液中PDE活性。如图3中所示，与对照相比，P3， P4和P6显著降低PDE的cGMP特 异性催化活性。P3，P4，和P6对PDE活性的降低与已知的PDE抑制剂苯 氮嘌呤酮的相当。结果表明抑制PDE活性可以导致cGMP的水解降低，导致cGMP的 细胞水平升高。此外，这些数据与这些肽对eNOS活性的影响一起表明， 通过活化eNOS增强NO的产生以及通过这些新肽抑制PDE来降低cGMP 的水解，可以实现细胞cGMP的持续水平。实施例3一低氧肺中血管舒张作用将特定无病原体的雌性C57BL/6J小鼠(30-35 g体重)用戊巴比妥(60 mg/kg， ip)麻醉，并从胸腔切除肺，用空气通气(对照)或者用SAR-830 系列小动物通气机用0%氧气以60次呼吸/分钟和0.6-0.8 ml/100 g体重的 潮气量通气。发生低氧血管收缩后，通过加入15pM每种P3，P4，P6或者 苯氮嘌呤酮在一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME， 100 jiM)的存在下或不存在
下监测血管舒张剂应答。如以前描述的连续监测血管舒张应答(Hu et al. (2004) Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 286:L1066國L1074)。结果在图4中显示。而且，图5显示了在肺内皮细胞中FITC-标记的 P3的内4匕。实施例4—低氧肺/原位肺灌注下面的实验证据证实了 P3介导的应答，使用低氧肺动脉高压的原位 大鼠模型。将特定无病原体的Sprague Dawley大鼠(200-250 g体重)用戊巴比妥 (60 mg/kg， ip)麻醉。证实深M醉后，将气管用18-G平头导管插管并以 2.5 ml/分钟的潮气量，21% 02/5% CO/74% N2温湿和60次呼吸/分钟通 气(SAR-830/p小动物通气机，CWE, Ardmoore， PA)，峰吸气和呼气压分别 为9 cm和3 cm 1120。进行胸廓切开术并将100单位肝素注射到右心室(RV)Care， Bloomington， IN)的PE-90聚乙烯管通过左心室置于左心房中并固 定。放置连接到主肺动脉(PA)的双腔导管的另一PE-90聚乙烯管后，将 肺用21% 02/5% CO/74% N2 (含氧量正常的)以20 cm H20的恒定呼气 末期压通气，并用没有pH指示剂的含有4% Ficoll的RPMI1640以2 ml/ 分钟的恒定流速在开放的胸腔中原位灌注。30分钟后，将通气混合物改变 成2% 02/5% C02/93% N2 (含氧量低的)30分钟并用PO-NE-MAH-P3P Lung Perfusion System软件(Gould Instrument System)连续i己录PA压力 的改变并收集灌注液样品以如以前报导的测定NO释放水平(Hu et al. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 286: L1066-L1074, 2004)。通气气体(含 氧量低的)返回到含氧量正常的气体，并用RPMI 1640中的P3 (20和40 jiM)或者RPMI 1640灌注肺10分钟，之后用2% 02重复低氧攻击，并记 录PA压力应答。如图6中所示，与含氧量正常的肺中基线PAP相比，低氧诱导血管收 缩或者肺动脉压(PAP)的显著升高。输注20nMP3显著减弱含氧量正常
的和含氧量低的肺中的PAP并且与用升高浓度的(40 jiM)P3观察到的相 当。此外，含氧量低的肺中PAP的P3介导的减少的幅度比含氧量正常的 肺中的减少大得多。图7中的结果表明P3增加来自含氧量正常的和含氧量低的肺的灌注 液中NO释方文。实施例5—P3在含氣量低的肺中的体内血管舒张作用 在装备自动清洁、气塞和自动化活的动物过滤和除湿系统的Coy Laboratory低氧室中将特定无致热原的Dawley大鼠(200-250 g体重)暴露 于低氧(10%吸气02)2到6周。在相似的湿度和温度环境中保持对照(含 氧量正常)动物。低氧暴露为24小时/天，只是此时将每周将室打开两次， 每次10 - 15分钟以清洁笼子和补充食物和水。所有大鼠都暴露于12:12小 时光/暗周期并允许自由获得标准大鼠食物和水。对一些大鼠施用盐水中的 P3 (+P3) (10 mg/kg或20 mg/kg， ip )或者仅仅盐水(-P3 )，每天一次，在暴 露于低氧启动前24小时开始。2、 3和6周暴露后，用动物测量多种参数， 包括肺动脉压的改变、肺重量/体重(LW/BW)比，和右心室/心脏重量 (RV/HW)比。如图8中所示，与含氧量正常的肺中PAP相比，暴露于低氧2、 2和 6周引起PAP的显著增加。图9和10显示出由于低氧^"导的肺和心脏水 肿引起的增加的LW/BW和RV/HW比。通过施用P3减弱低氧诱导的PAP 压力(图11)和RV/HW比。实施例6—性功能障碍的治疗性功能障碍(SD)是重要的临床问题，其可以影响男性和女性。SD 的病因可以是器质性的和心理性的。SD的器质性方面通常由潜在的血管疾 病引起。在一些临床中，已经将SD病症分成女性性功能障碍(FSD)病 症和男性性功能障碍(MSD)病症。将FSD最佳地定义为女性在性表达 中难以或者不能找到满足。男性性功能障碍(MSD)通常与勃起机能障碍有关，也称作男性勃起机能障碍(MED)。见例如美国专利号6,878,529。 本发明的化合物可以用于治疗男性中的性功能障碍(例如，男性勃起 机能障碍一MED)和女性中的性功能障碍一女性性功能障碍(FSD)，例 如，女性性唤起障碍(FSAD)。A. 女性性功能障碍(FSD)将FSD的类别通过将它们与正常的女性性反应阶段性欲、唤起和高 潮相比较而最好地定义。唤起是对性刺激的血管反应，其一种重要的组分 是生殖器充血并且包括阴道润滑增加。所以，当女性在这些阶段的任一个中具有不足或者不满意的反应时， 发生FSD。 FSD类别包括机能减退的性欲障碍、性唤起障碍、高潮障碍和 性交疼痛障碍。本发明的肽可以用于提高对性刺激的生殖器反应(如在女 性性唤起障碍中)和这样改善与性交有关的疼痛、痛苦和不适和这样治疗 其他女性性功能障碍。最近已经假定至少 一部分具有FSAD症状的患者是由于血管的原因。 从而，根据本发明的一方面，提供了本发明的肽用于治疗或预防性唤起障 碍、高潮障碍和性交疼痛障碍，更优选治疗或预防性p奐起障碍、高潮障碍 和性交疼痛障碍，最优选用于治疗或预防性唤起障碍的用途。正在研究其 功效的用于治疗FSAD的候选药物主要是勃起机能障碍疗法，其促进向男 性外生殖器的循环。它们由两种类型的制剂组成口Ji良或者舌下药物(阿 朴吗啡、酚妥拉明、磷酸二酯酶5型抑制剂，例如西地那非)，和在男人 中注射或者经尿道施用和在女性中局部施用于外生殖器的前列腺素。然而， 这些疗法中没有 一种显示出在FSAD的治疗中有效。本发明的肽加强在唤起过程中发生的内源的血管舒张作用。这导致 FSAD的预防和/或治疗，如通过增强的生殖器血流和因此增强的生殖器充 血。B. 男性勃起机能障碍(MED)
男性勃起机能障碍(MED)定义为"...不能实现和/或保持阴茎勃起以 进行满意的性行为(NIH Consensus Development Panel on Impotence, 1993)..."已经估计所有程度(轻微、中度和完全性无能)的勃起机能障碍(ED) 的患病率在40到70岁男性中为52%,在大于70岁的那些男性中更高。 这些状况对患者和他们的配偶的生活质量具有严重的负面影响，通常导致 焦虑和压力增加，其导致抑郁和自卑。而二十年前，主要认为MED是心 理疾病，现在已知对于多数患者，存在潜在的器质性病因。阴茎勃起是一种血液动力学事件，其依赖于阴茎的海绵体平滑肌和脉 管系统的收缩和舒张的平衡(Lerner et al 1993)。海绵体平滑肌的舒张导致 向海绵体的小梁间隙的血流增加，导致它们对周围的被膜膨胀并且压缩引 流静脉。这产生血压的很大升高，其导致勃起(Naylor， 1998)。在男性的性p^中，NO在内皮中释放并结合并活化平滑肌和内皮中 的可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)，导致细胞内环鸟苦3'，5，-一磷酸(cGMP)水平 升高。Pfizer最近已经研发了柠檬酸西地那非(也称作Viagra⑧)作为MED 的第一种口服药物治疗。西地那非通过选择性抑制磷酸二酯酶5(PDE5)， 抑制cGMP向5'GMP的水解，从而抑制海绵体中的cGMP分解(Boolel et al" 1996; Jeremy et al.， 1997)并从而增加cGMP的细胞内浓度和促进海绵 体平滑肌舒张。本发明是有利的，因为它提供了恢复正常的性唤起应答的手段-即增 加的阴茎血流，导致男性阴茎勃起和女性中生殖器充血。所以，本发明提 供了恢复或者加强正常的性唤M应的手段。实施例7—脑缺血的治疗经历脑缺血的患者通常遭受残疾的痛苦，所述残疾从暂时的神经不足 到不可逆的损伤(中风)或者死亡。脑缺血，即向中枢神经系统的血流减 少或者停止可以表征为总体的和局部的。
局部脑缺血指脑脉管系统内血流的停止或者减少，其由颅内或者颅外 脑动脉中部分或完全闭塞引起。此类闭塞通常引起中风，其是一种综合征，特征是神经不足的急性发作，其持续至少24小时，反映中枢神经系统的局 部参与并且是脑循环紊乱的结果。局部脑出血的其他原因包括由于蛛网膜下腔出血或者医源性介入引起的血管痉挛。总体脑缺血指脑脉管系统内血流的减少，其由全身性循环衰竭引起。 循环系统不能保持足够的细胞灌注导致为组织提供的氧气和营养物减少。 从而，总体脑缺血由心功效的严重降低引起。其他原因包括介入程序，如 颈动脉血管成形术、支架术或者动脉内膜切除术，其可以导致局部脑缺血， 以及心脏程序，其可以导致总体脑出血，如心导管检查、电生理学研究和 血管成形术。本领域技术人员将能够容易地鉴定患有中风或者有患中风、脑出血、 头部创伤或者癫痫风险的患者。例如，具有患中风风险的患者包括但不限 于，患有高血压或者经历大外科的患者。通常，急性缺血性中风的紧急治疗主要由一般的支持性医护，如7JC合(hydration)、监测神经学状态、血压控制和/或抗血小板或者抗凝血疗法 组成。已经对中风患者施用肝素，取得了有限的和不一致的有效性。用全 身t-PA治疗与大脑内出血和其他出血性并发症的风险增加有关。除了施用 溶血栓剂和肝素外，对于患有阻塞性局部脑缺血的患者，当前在市场上还 没有治疗性选择。见，例如美国专利号6,858,383。在一个实施方案中，本发明的肽可以用于治疗缺血。 本文引用的所有专利、专利申请、临时申请和出版物都完整引入作为 参考，包括附图和表格，直到它们与本说明书的明确教导不一致的程度。 将理解本文描述的实施例和实施方案仅仅用于阐明目的并且将对本领精神和范围内。
权利要求
1.增强eNOS活性的方法，其中所述方法包括对需要此类增强的患者施用选自P3(SEQ ID NO1)、P4(SEQ ID NO2)和P6(SEQ ID NO3)的肽。
2. 根据权利要求l的方法，其中用可药用载体施用所述肽。
3. 才艮据权利要求1的方法，其中通过选自经口、腹膜内、肌内、经 肺、皮下、动脉内、静脉内、鞘内注射和导管插入术的途径施用所述肽。
4. 4艮据权利要求1的方法，其中通过能够表达所述肽的RNA或者 DNA载体施用所述肽。
5. 根据权利要求l的方法，其中需要eNOS活性增强的患者是人。
6. 抑制PDE活性的方法，其中所述方法包括对需要此类抑制的患者 施用选自P3 (SEQ ID NO: 1)、 P4 (SEQ ID NO: 2)和P6 (SEQ ID NO: 3)的 肽。
7. 根据权利要求9的方法，其中用可药用载体施用所述肽。
8. 根据权利要求10的方法，其中通过选自经口、腹膜内、经肺、肌 内、皮下、动脉内、静脉内、鞘内注射和导管插入术的途径施用所述肽。
9. 根据权利要求9的方法，其中通过能够表达所述肽的RNA或者 DNA载体施用所述肽。
10. 根据权利要求9的方法，其中需要eNOS活性增强的患者是人。
11. 调节cGMP和/或cAMP水平的方法，其中所述方法包括对需要 此类调节的患者施用选自P3 (SEQ ID NO: 1)、 P4 (SEQ ID NO: 2)和P6 (SEQ ID NO:3)的肽。
12. 根据权利要求ll的方法，其中用可药用载体施用所述肽。
13. 根据权利要求12的方法，其中通过选自经口、腹膜内、经肺、 肌内、皮下、动脉内、静脉内、鞘内注射和导管插入术的途径施用所述肽。
14. 根据权利要求11的方法，其中通过能够表达所述肽的RNA或者 DNA载体施用所迷肽。
15. 根据权利要求11的方法，其中需要eNOS活性增强的患者是人。
16. 治疗选自肺动脉高压、性功能障碍和缺血的状况或者减少血小板 聚集的方法，其中所述方法包括对需要此类治疗的患者施用选自P3 (SEQ ID NO: 1)、 P4 (SEQ ID NO: 2)和P6 (SEQ ID NO: 3)的肽。
17. 根据权利要求13的方法，其中用可药用载体施用所述肽。
18. 根据权利要求13的方法，其中通过选自经口、腹膜内、经肺、 肌内、皮下、动务^内、静脉内、鞘内注射和导管插入术的途径施用所述肽。
19. 根据权利要求13的方法，其中通过能够表达所述肽的RNA或者 DNA载体施用所述肽。
20. 根据权利要求13的方法，其中需要eNOS活性增强的患者是人。
21. 通过升高的一氧化氮浓度治疗肺动脉高压的方法，其包括对需要 此类治疗的患者施用选自P3 (SEQ ID NO: 1)、 P4 (SEQ ID NO: 2)和P6 (SEQ ID NO: 3)的肽。
22. 选自P3 (SEQ ID NO: 1)、 P4 (SEQ ID NO: 2)和P6 (SEQ ID NO: 3) 的肽。
23. 根据权利要求22的肽，其中所述肽是P3 (SEQ ID NO:l)。
24. 编码选自P3 (SEQ ID NO: 1)、 P4 (SEQ ID NO: 2)和P6 (SEQ ID NO:3)的肽的多核苦酸。
25. 根据权利要求24的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码PS (SEQ ID NO:l)。
26. 药物组合物，其包含药物载体和选自P3 (SEQ ID NO: 1)、 P4 (SEQ ID NO: 2)和P6 (SEQ ID NO: 3)的肽。
全文摘要
本发明提供了用于调节血流的物质和方法。在优选实施方案中，本发明提供了能够增强一氧化氮(NO)活性和/或升高细胞一磷酸鸟苷(cGMP)的肽。通过这些机制，本发明可以有利地用于实现血管舒张，从而在多种背景中提供治疗益处。在特定实施方案中，本发明提供了新肽，已经发现其增强内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的活性。还已经发现这些肽降低cGMP特异性磷酸二酯酶活性。
文档编号C12N9/02GK101171332SQ200680015698
公开日2008年4月30日 申请日期2006年5月12日 优先权日2005年5月12日
发明者J·M·帕特尔 申请人:佛罗里达大学研究基金公司