用于癌症治疗基因的肿瘤选择性和高效率表达的新型hTMC启动子和载体的制作方法

专利名称：：用于癌症治疗基因的肿瘤选择性和高效率表达的新型hTMC启动子和载体的制作方法用于癌症治疗基因的肿瘤选择性和高效率表达的新型hTMC启动子和载体
背景技术：
：本申请涉及2005年3月9日提交的美国临时专利申请60/659,935，所述临时专利申请在此整体引入作为参考。基于国立卫生研究院的授予号CA71618和美国国防部的授予号DAMD17-02-l-0706,政府在本申请中拥有权利。1.发明领域本发明一般涉及分子生物学、癌症生物学和基因治疗领域。更具体而言，本发明涉及包括新型启动子的组合物和使用其的方法，所述可操作地偶联的第二种启动子序列，其中第二种启动子序列包括最小启动子序歹'J(minimalpromotersequence)，优选病毒最小启动子序歹寸(minimalviralpromotersequence)。2.相关领域的描述成功的基因治疗的一个主要障碍是缺乏可以靶向目的组织的有效递送系统。例如，能够将用于癌症的基因治疗靶向癌症患者中的肿瘤将是有益的。用于肿瘤靶向的转基因表达的一种方法是经由使用对肺瘤是选择性的启动子控制基因表达。一种此类启动子是人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子。hTERT是端粒酶的催化亚单位。端粒酶是负责染色体末端完全复制的核糖核蛋白复合物(Blackburn,1991)。许多研究已证实大多数恶性肿瘤表达端粒酶活性(Kim等人，1996)，而大多数正常细胞则不是(Shay和Wright,1996)。已鉴别出与人中的端粒酶活性相关的3种主要组分(a)RNA组分[hTER(Feng等人，1995)];(b)端粒酶相关蛋白[hTEPl(Harrington等人，I997)];和(c)端粒酶催化亚单位或人端粒酶逆转录酶[hTERT(Meyerson等人，1997;Nakamura等人，1997)]。然而，只有hTER和hTERT是体外重建端粒酶活性所必需的(Nakayama等人，1998)并且因此代表人中端粒酶的最小催化核心(Beattie等人，1998)。hTERT的启动子区先前已克隆和表征(Takakura等人，1999)。细胞毒性或促凋亡基因例如白喉毒素A链、FADD、胱天蛋白酶和Bax经由hTERT启动子的端粒酶特异性表达已在各种基因转移系统例如质粒和腺病毒中成功完成和报道(参见，例如Abdul-Ghani等人，2000;和Komata等人，2001)。然而，如同大多数其他固有的哺乳动物启动子，hTERT启动子的转录促进强度通常比常用的病毒启动子例如CMV和SV40早期启动子弱得多。因此，其用于基因治疗的用途受到低转基因表达问题的阻碍。为了克服未修饰的hTERT启动子在哺乳动物中体外和体内的弱转录促进能力，某些研究者已开发了二元腺病毒栽体系统，其中hTERT启动子和转基因在第一种载体中置于Gal4基因或四环素应答元件(TRE)的控制下(Gu等人，2000;Gu等人，2002)。第二种载体表达增强子例如VP16蛋白质或Tet-0n/Tet-0ff反式激活蛋白以增强来自hTERT的转基因表达。然而，由于与使用2种分开的栽体相关的缺陷，所以该系统对于临床应用太复杂且不实际。特别地，双重载体系统是随机且无法控制的，因为对于2种载体同时进入同一细胞是困难的。此外，由于该系统中涉及多重载体和多重治疗无关组分和基因产物的使用，所以很可能导致毒性增加。因此，需要更有效的组织选择性启动子或促进启动子功能的改进方法以允许组织选择性转基因表达增强。这个领域中的启动子技术将促进用于在基因治疗中使用的栽体以及需要高转基因表达的其他技术例如基于报道分子的成像模式的临床应用和开发。发明概述本发明人已开发了某些新型嵌合启动子，其是组织选择性的并且促进转基因在体外和体内高效率表达。特别地，本发明人已开发了由组织选择性启动子序列融合至病毒最小启动子序列构成的某些新型嵌合启动子，以及使用这些新型启动子的方法。例如，已开发了包括融合至miniCMV(hTMC)启动子序列的hTERT序列的新型嵌合启动子，其通过将基本hTERT启动子序列与miniCMV启动子序列最佳融合进行改造。他们还开发了改善组织选择性启动子功能的方法。使用这些启动子，本发明人能够实现体外和体内的高肿瘤特异性和高转基因表达。如本文所述，这些启动子在将基因转移到细胞内的方法中具有广泛的应用，例如为了治疗受试者中的过度增生性疾病或为了使细胞中的报道分子序列成像的目的。本发明的某些实施方案一般涉及包括组织选择性启动子序列以及与组织选择性启动子序列可操作地偶联的第二种启动子序列的启动子，其中第二种启动子序列包括病毒最小启动子序列，其中组织选择性启动子序列与第二种启动子序列可操作地偶联导致组织选择性启动子序列的启动子功能改善。"启动子序列"是在其上控制转录起始和速率的核酸序列区域的控制序列。启动子序列在下文说明书中更详细地讨论o"组织选择性启动子序列，，在本文中指在一种组织中能够驱动基因转录，同时在其他组织类型中很大程度上保持"沉默"或以相对低水平表达的启动子序列。组织特异性启动子序列在下文说明书中更详细地讨论。本领域普通技术人员已知的任何组织选择性启动子序列考虑包括在本发明的启动子序列中。示例性组织选择性启动子包括hTERT启动子序列、CEA启动子序列、PSA启动子序列、probasin启动子序列、ARR2PB启动子序列、或AFP启动子序列、人ot-乳白蛋白启动子序列、羊P-乳球蛋白启动子序列、U6启动子序列、Hl启动子序列、7SL启动子序列、人Y启动子序列、人MRP-7-2启动子序列、腺病毒VA1启动子序列、人tRNA启动子序列、5S核糖体RNA启动子序列、或任何这些启动子序列的功能杂交物或组合。组织选择性启动子序列可以在受试者无论是人还是其他哺乳动物的任何组织类型中是活跃的。例如，组织选择性启动子在下列组织中可以是活跃的心脏、肺、食管、肌肉、肠、乳房、前列腺、胃、膀胱、肝、脾、胰腺、肾、神经元、肌细胞、白细胞、永生化细胞、赘生细胞、肺瘤细胞、癌细胞、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、唾液腺、胆囊、膀胱、气管、喉、咽、大动脉、动脉、毛细管、静脉、胸腺、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结、骨髓、垂体腺、甲状腺、甲状旁腺、肾上腺、脑、大脑、小脑、髓质、脑桥、脊髓、坐骨神经、骨骼肌、平滑肌、骨、睾丸、附睾、前列腺、精嚢、阴茎、卵巢、子宫、乳腺、阴道、皮肤、眼或视神经。在某些实施方案中，组织选择性启动子序列是肿瘤选择性启动子序列。肿瘤选择性启动子序列在本文中限定为在肺瘤细胞中能够驱动基因转录，同时在其他组织类型中很大程度上保持"沉默"或以相对低水平表达的启动子序列。例如肿瘤选择性启动子序列可以是hTR启动子序列、hTERT启动子序列、CEA启动子序列、PSA启动子序列、probasin启动子序列、ARR2PB启动子序列、或AFP启动子序列、MUC-1、粘液样糖蛋白、C-erbB2/neu致癌基因、环加氧酶、E2F转录因子1、酪氨酸酶相关蛋白、酪氨酸酶、或存活素。在某些实施方案中，组织选择性启动子序列是低氧特异性启动子序列。低氧特异性启动子序列在本文中限定为在细胞暴露于低氧条件时能够驱动基因转录，同时在其他组织类型中在非低氧条件下很大程度上保持"沉默"或以相对低水平表达的启动子序列。本领域普通技术人员已知的任何低氧特异性启动子序列考虑包括在本发明中。例如，低氧特异性启动子序列可以是低氧应答元件(HRE)或缺氧诱导因子。例如，缺氧诱导因子可以是HIF-lot、HIF-2a或HIF-3ot在本发明的某些具体实施方案中，组织选择性启动子序列是hTERT启动子序列。例如，hTERT启动子序列可以是SEQIDNO:1。病毒最小启动子序列或核心启动子序列在本文中指包括核苷酸序列的启动子部分，该核苷酸序列维持反式激活蛋白或转录复合物的组分结合和定位至核酸中的特定位置的能力。在不存在上游激活的情况下是无活性的或启动子活性极大减少的启动子元件，特别是TATA元件，称为最小或核心启动子。在合适的转录因子存在下，最小启动子起作用以允许转录。最小或核心启动子因此仅由转录起始所需的所有基本元件例如TATA盒和/或起始子组成。本领域普通技术人员已知的任何病毒最小启动子序列考虑包括在本发明的启动子序列中。病毒最小启动子序列例如可以是腺病毒启动子序列、杆状病毒启动子序列、CMV启动子序列、细小病毒启动子序列、疱渗病毒启动子序列、痘病毒启动子序列、腺伴随病毒启动子序列、塞姆利基森林病毒启动子序列、SV40启动子序列、痘苗病毒启动子序列、或逆转录病毒启动子序列。在某些具体实施方案中，启动子序列是mini-CMV启动子序列。例如，mini-CMV序列可以是SEQIDNO:2。在某些实施方案中，组织选择性启动子序列是hTERT启动子序列，并且第二种启动子序列是mini-CMV启动子序列。例如，启动子序列可以包括SEQIDNO:3,其包括与mini-CMV序列可操作地偶联的hTERT启动子序列。本发明的某些其他实施方案一般涉及包括启动子的核酸，其中启地偶联的第二种启动子序列，其中所:第:种启动子序列包括i毒最小启动子序列，其中组织选择性启动子序列与第二种启动子序列可操作地偶联导致第一种启动子序列的启动子功能改善。如本文使用的，"核酸"一般指DNA、RNA分子(即，链)或其包括核碱基(nucleobase)的衍生物或类似物。核酸在下文说明书中更详细地讨论。上文所述的任何组织选择性启动子序列和病毒最小启动子序列可以掺入本发明的核酸序列中。如上文讨论的，在某些实施方案中，组织选择性启动子序列可以进一步限定为肿瘤选择性启动子序列或低氧特异性启动子序列。在某些具体实施方案中，组织选择性启动子序列是hTERT启动子序列，例如SEQIDN0:1中所示序列。此外，在某些实施方案中，核酸包括一种或多种另外的启动子序列，所述启动子序列可以与组织选择性启动子序列可操作地偶联或不偶联。在本发明的某些实施方案中，核酸包括与启动子可操作地偶联的一个或多个基因。本领域普通技术人员已知的任何基因考虑包括在将基因递送至细胞的方法中。术语"基因"用于简单地指功能蛋白质、多肽或肽编码单位。基因在下文说明书中更详细地讨论。任何基因考虑在本发明的核酸序列中。例如，基因可以是治疗基因或选择标记。治疗基因在本文中指为了治疗或预防疾病的目的可以给受试者施用的基因。例如，治疗基因可以是为了治疗或预防过度增生性疾病给受试者施用的基因。在某些具体实施方案中，过度增生性疾病是癌症。治疗基因可以是例如肿瘤抑制基因、诱导凋亡的基因、编码酶的基因、编码抗体的基因、或编码激素的基因。示例性治疗基因包括Rb、CFTR、p16、p21、p27、p57、p73、C-CAM、APC、CTS-1、zacl、scFVras、DCC、NF-1、NF-2、WT-1、MEN-I、MEN-II、BRCA1、VHL、薩AC1、FCC、MCC、BRCA2、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-IO、IL-11IL-12、GM-CSF、G-CSF、胸苷激酶、mda7、,KS7、干扰素a、干扰素P、干扰素Y、ADP、p53、ABLI、BLC1、BLC6、CBFA1、CBL、CSFIR、ERBA、ERBB、EBRB2、ETS1、ETS2、ETV6、FGR、兩、FYN、HCR、HRAS、JUN、KRAS、LCK、LYN、MDM2、MLL、MYB、MYC、MYCL1、MYCN、NRAS、PIM1、PML、RET、SRC、TAL1、TCL3、YES、MADH4、RB1、TP53、WT1、TNF、B層、CNTF、NGF、IGF、GMF、aFGF、bFGF、NT3、NT5、ApoAI、ApoAIV、ApoE、RaplA、胞嘧咬脱氨酶、Fab、ScFv、BRCA2、zacl、ATM、HIC-1、DPC-4、FHIT、PTEN、ING1、N0EY1、N0EY2、0VCA1、MADR2、53BP2、IRF-1、zacl、DBCCR—1、rks-3、C0X-1、TFPI、PGS、Dp、E2F、ras、/s/c、/zei/、ra,、er6、尸迈s、frir、ret、^s;、AW、a6厶E1A、p300、VEGF、FGF、血小板反应蛋白、BAI-1、GDAIF、Gene26(CACM2D2)、PL6、Beta*(BLU)、LUCA-1(HYAL1)、LUCA-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)、SEMA3或MCC。在某些具体实施方案中，治疗基因是尸^S7。选择标记在本文中指当表达时赋予细胞可鉴别特征的核酸序列，所述特征允许容易鉴别、分离和/或选择包含选择标记的细胞与不含选择标记的细胞。本领域普通技术人员已知的任何选择标记考虑包括在本发明的核酸中作为选择标记。例如，选择标记可以是药物选择标记、酶、免疫学标记。在某些实施方案中，本发明的核酸包括在质粒中。本发明的核酸序列的某些实施方案包括与启动子序列可操作地偶联的一种或多种报道分子序列。如本文使用的，"报道分子"、"报道基因"或"报道分子序列"指任何遗传序列或编码的多肽序列，所区分。示例性报道分子序列包括编码生长抑素受体氨基酸序列、钠碘同向转运体氨基酸序列、真核绿色荧光蛋白氨基酸序列、红色荧光蛋白氨基酸序列、萤光素酶氨基酸序列、P-半乳糖苷酶氨基酸序列、或胸苷激酶氨基酸序列的多核苷酸。生长抑素受体氨基酸序列可以是例如，重组生长抑素受体氨基酸序列、生长抑素2型受体氨基酸序列、或突变型生长抑素2型受体氨基酸序列。在某些实施方案中，生长抑素2型受体氨基酸序列是生长抑素2A型受体氨基酸序列。报道分子序列可以用IRES偶联至第二种基因。IRES在本说明书的其他地方讨论。第二种基因可以是本领域普通技术人员已知的任何基因，包括上文讨论的任何基因。基因可以与第二种报道分子可操作地偶联或不偶联。第二种报道分子可以是本领域普通技术人员已知的任何报道分子，包括上文讨论的那些报道分子。例如，第二种报道分子可以是生长抑素受体氨基酸序列、钠碘同向转运体氨基酸序列、萤光素酶氨基酸序列、真核绿色荧光蛋白氨基酸序列、或胸苷激酶氨基酸序列。在某些实施方案中，第二种基因包括选择标记或治疗基因。治疗基因在上文以及本说明书的其他地方讨论。在本发明的核酸的某些实施方案中，组织选择性启动子序列是hTERT启动子序列，第二种启动子序列是mini-CMV启动子序列，并且启动子与编码FUS1的基因可操作地偶联。在这些实施方案中，核酸序列可以包括或不包括在质粒中。本发明一般还涉及包括启动子的组合物，其中启动子包括上文所述的本发明的任何启动子。本发明的组合物可以包括或不包括用于将启动子递送至受试者中的细胞的递送媒介物。递送媒介物在本文中指可以促进核酸递送到细胞内的任何物质。细胞可以是受试者的任何细胞。受试者可以是任何受试者，例如哺乳动物。在某些具体实施方案中，受试者是人。本领域普通技术人员将熟悉用于促进核酸序列递送至受试者中的细胞内的递送媒介物。例如，递送媒介物可以是核酸、质粒、病毒载体、原核细胞、真核细胞、或脂质。任何病毒载体考虑包括在本发明的组合物中。例如，病毒栽体可以是腺病毒载体、逆转录病毒载体、症苗病毒载体、腺伴随病毒载体、或痘病毒载体。在本发明的某些具体实施方案中，病毒载体是腺病毒。此外，考虑了用作递送媒介物的本领域普通技术人员已知的任何脂质。在某些实施方案中，脂质包括在脂质体中。脂质体可以是本领域普通技术人员已知适合用作递送媒介物的任何脂质体。例如，脂质体可以包括阳离子脂质，例如DOTAP:Chol。脂质体可以包括在纳米颗粒例如DOTAP:Chol纳米颗粒中。纳米颗粒在本文中指直径小于1微米的颗粒。本发明的某些进一步的实施方案一般涉及包括上文所述的任何核酸的组合物。包括上文所述的任何核酸的组合物可以进一步包括递送媒介物，其中递送媒介物用于将核酸递送至受试者中的细胞。上文所述的任何递送媒介物适合于包括在本发明的这些实施方案中。例如，在某些实施方案中，如上文讨论的，递送媒介物是病毒载体或脂质。本发明的其他实施方案一般涉及改善组织选择性启动子的功能的方法，其包括(1)选择组织选择性启动子序列；(2)选择第二种启动子序列，其中第二种启动子序列包括病毒最小启动子序列；和(3)将组织选择性启动子序列与第二种启动子序列可操作地偶联，其中组织选择性启动子序列与第二种启动子序列可操作地偶联导致组织选择性启动子序列的功能改善。上文讨论的任何组织选择性启动子序列适合于在本发明的这些实施方案中使用。例如，如上文讨论的，组织选择性启动子序列可以是hTERT启动子序列、CEA启动子序列、PSA启动子序列、probasin启动子序列、ARR2PB启动子序列、AFP启动子序列、人a-乳白蛋白启动子序列、绵羊p-乳球蛋白启动子序列、U6启动子序列、Hl启动子序列、7SL启动子序列、人Y启动子序列、人MRP-7-2启动子序列、腺病毒VA1启动子序列、人tRNA启动子序列、5S核糖体RNA启动子序列、或任何这些启动子序列的功能杂合体或组合。如上文讨论的，组织选择性启动子序列可以是任何低氧特异性启动子序列。在本发明方法的某些具体实施方案中，组织选择性序列是hTERT启动子序列，例如SEQIDN0:1。本方法的病毒最小启动子序列可以包括上文讨论的任何病毒最小启动子序列。例如，在本发明方法的某些具体实施方案中，病毒最小启动子序列是mini-CMV启动子序列。例如，mini-CMV序列可以是SEQIDNO:2。在某些实施方案中，组织选择性启动子序列是hTERT启动子序列，并且其中第二种启动子序列是raini-CMV启动子序列。例如，启动子可以包括SEQIDNO:3。本发明的再进一步的实施方案一般涉及将基因递送到细胞内的方法，其包括(1)制备包括与启动子可操作地偶联的基因的组合物，其中启动子是上文所述的本发明的任何新型启动子；和(2)使组合物与细胞接触，其中接触导致基因递送至细胞内。细胞可以是受试者的任何细胞。此外，如上文讨论的，受试者可以是任何受试者，例如哺乳动物。在某些具体实施方案中，受试者是人。例如，人可以是具有疾病例如过度增生性疾病的患者。例如，过度增生性疾病可以是癌症。过度增生性疾病例如癌症在下文说明书中更详细地讨论。在某些实施方案中，组合物包括用于促进基因递送至细胞内的递送媒介物。上文讨论的任何递送媒介物适合于在本发明的这些实施方案中使用。例如，递送媒介物可以是上文所述的任何病毒载体或脂质。病毒栽体和脂质还在下文说明书中更详细地讨论。在某些具体实施方案中，病毒载体是腺病毒栽体。例如，载体可以是鱼精蛋白复合的病毒载体。本发明的再进一步的实施方案一般涉及治疗具有过度增生性疾病的受试者的方法，其包括(1)获得包括上文所述的任何新型核酸序列的多核苷酸的药物组合物；和(2)给受试者施用药学有效量的所述组合物。如上文讨论的，受试者可以是任何受试者，例如哺乳动物。哺乳动物可以是人，例如具有疾病的患者。疾病可以是折磨受试者的任何疾病。在某些具体实施方案中，受试者是人，并且疾病是过度增生性疾病例如癌症。癌症可以是任何癌症，例如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、肝癌、子宫颈癌、结肠癌、肾癌、皮肤癌、头与颈癌、骨癌、食管癌、膀胱癌、子宫癌、淋巴癌、胃癌、胰腺癌、睾丸癌、淋巴瘤、或白血病。在某些具体实施方案中，癌症是肺癌。在某些实施方案中，受试者经历第二种抗癌治疗。考虑了本领域普通技术人员已知的任何第二种抗癌治疗，例如化学治疗、手术治疗、放射治疗、免疫治疗、或另外的基因治疗。第二种抗癌治疗在下文说明书中更详细地讨论。本发明一般还涉及使细胞成像的方法，其包括(1)使细胞与包括上文所述的任何核酸的组合物接触，其中启动子与报道分子氨基酸序列可操作地偶联；和(2)通过测量来源于报道分子的信号检测报道分子序列的细胞表达。如本文使用的，术语"报道分子"、"报道基因"或"报道分子序列"指任何遗传序列或编码的多肽序列，所述序列是道分子在下文说明书中更详细地讨论。细胞可以是任何细胞。在某些实施方案中，细胞是受试者例如哺乳动物中的细胞。哺乳动物可以是人。人可以是具有疾病例如过度增生性疾病的患者。例如，过度增生性疾病可以是癌症。在某些实施方案中，例如，细胞在受试者中，并且使细胞成像的方法进一步限定为使受试者中的组织成像的方法。"组织"在本文中指在机体中共同执行特定功能的形态学相似的细胞和相关的细胞间物质的集合。例如，组织可以是肺组织、肾组织、乳房组织等等。组织还可以包括赘生细胞，例如在癌性肿瘤中。在成像方法的某些实施方案中，细胞是癌细胞，并且其中使细胞成像的方法进一步限定为使具有癌症的患者中的肿瘤成像的方法。报道分子可以是本领域普通技术人员已知的任何报道分子。例如，报道分子可以是酶氨基酸序列、受体氨基酸序列、或核酶RNA序列。例如，报道分子氨基酸序列可以是重组的七跨膜G蛋白偶联受体氨基酸序列、胸苷激酶氨基酸序列、多巴胺受体氨基酸序列、内皮生长因子受体(EGFR)氨基酸序列、纤溶酶原氨基酸序列、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)氨基酸序列、激素受体氨基酸序列、或钠/碘同向转运体氨基酸序列。在本发明的某些具体实施方案中，报道分子氨基酸序列是重组的七跨膜G蛋白偶联受体(GPCR)氨基酸序列。本领域普通技术人员已知的任何重组的GPCR氨基酸序列考虑用作报道分子。例如，GPCR可以是乙酰胆碱受体Ml、M2、M3、M4或M5;腺苷受体；Al;A2A;A2B;或A3;肾上腺素受体；ot1A、oclB、a1D、a2A、ot2B、a2C、pi、P2或P3;血管紧张素受体ATI或AT2;蛙皮素受体BB1、BB2或BB3;緩激肽受体Bl、B2、降钙素、Ainilin、CGRP或肾上腺髓质素受体；大麻素受体CB1或CB2;趋化因子受体CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCRIO、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CX3CR1或XCR1;趋化受体C3a、C5a或fMLP;缩胆嚢素和胃泌素受体CCK1或CCK2;促肾上腺皮质激素释放因子受体CRF1或CRF2;多巴胺受体Dl、D2、D3、D4或D5;内皮素受体ET(A)或ET(B);甘丙肽受体GAL1、GAL2或GAL3;谷氨酸受体mgll、mgl2、mgl3、mgl4、mgl5、mgl6、mgl7或mgl8;糖蛋白激素受体FSH、LSH或TSH;组胺受体Hl、H2、H3或H4;5-HT受体:5-HTlA、5-HT1B、5-HTlD、5-HTlB、5-HTlF、5HT2A、5-HT2F、5—HT2C、5-HT3、5—HT4、5-HT5A、5—HT5B、5-HT6或5—HT7;白三烯受体BLT、CysLTl或CysLT2;溶血磷脂受体edgl、edg2、edg3或edg4;黑皮质素受体MC1;MC2;MC3;MC4或MC5;褪黑激素受体MT1、MT2或MT3;神经肽Y受体Yl、Y2、Y4、Y5或Y6;神经降压素受体NTS1或NTS2;阿片样物质D0P、K0P、M0P或NOP;P2Y受体P2Y1、P2Y2、P2Y4、P2Y6、P2Y11或P2Y12);过氧化物酶体增殖物PPAR-a、PPAR-0或PPAR-y;前列腺素类受体DP、FP、IP、TP、EP1、EP2、EP3或EP4;蛋白酶-激活受体PAR1、PAR2、PAR3或PAR4;生长抑素受体SSTR1、SSTR2、SSTR2A、SSTR3、SSTR4或SSTR5;速激肽受体NK1、NK2或NK3;促甲状腺激素释放激素受体TRH1或TRH2;硬骨鱼紧张肽-II受体；血管活性肠肽或垂体腺苷酸环化酶激活肽受体VPAC1、VPAC2或PAC1;或血管加压素或催产素受体Vla、Vlb、V2或0T。在成像方法的某些具体实施方案中，重组GPCR氨基酸序列是重组生长抑素受体氨基酸序列、重组生长抑素2型受体氨基酸序列、或突变型生长抑素2型受体氨基酸序列。例如，重组生长抑素2型受体氨基酸序列可以是重组生长抑素2A型受体氨基酸序列。在本发明的某些具体实施方案中，重组GPCR氨基酸序列包括编码截短的重组GPCR的核酸。截短可以是在N末端或C末端的截短。在某些实施方案中，截短是羧基末端的截短。截短可以导致或不导致GPCR作为GPCR的功能的改变。例如，在某些实施方案中，截短导致重组GPCR氨基酸序列的内化和/或信号转导的改变。在本发明的某些实施方案中，编码报道分子氨基酸序列的核酸在报道分子氨基酸序列的N末端或C末端包括异源前导序列，其中前导序列将报道分子氨基酸序列导向特定的亚细胞定位。在本发明的进一步的实施方案中，编码报道分子氨基酸序列的核酸进一步包括融合至报道分子氨基酸序列的N末端或C末端的蛋白质标签。术语"标签"、"标签序列"或"蛋白质标签"指化学部分，其为核苷酸、寡核普酸、多核苷酸或氨基酸、肽或蛋白质或其他化学品，其当加至另一种序列时提供另外的功用或赋予有用的特性，特别是在那种序列的检测和分离中。因此，例如，同聚物核酸序列或与捕获寡核苷酸互补的核酸序列可以加入至引物或探针序列以促进延伸产物或杂交产物的后续分离。在蛋白质标签的情况下，组氨酸残基(例如4-8个连续组氨酸残基)可以加入蛋白质的氨基或羧基末端以促进通过螯合金属色谱法分离蛋白质。可替代地，具有与特异性抗体分子或其他分子反应的表位或结合决定簇(例如flag表位、c-myc表位、曱型流感病毒血凝素蛋白的跨膜表位、A蛋白、纤维素结合结构域、钙调素结合蛋白、麦芽糖结合蛋白、几丁质结合结构域、谷胱甘肽S-转移酶等)的氨基酸序列、肽、蛋白质或融合配偶体可以加入蛋白质以通过操作例如亲和力或免疫亲和层析、免疫组织化学或本文描述的非侵入性检测方法促进蛋白质分离、定位和/或鉴别。化学标签部分包括此类分子如生物素，其可以加入核酸或蛋白质以通过与抗生物素蛋白反应物等的相互作用促进分离或检测。众多其他标签部分是受过训练的技工已知的并且可以由其设想，并且预期在这个定义的范围内。在某些实施方案中，蛋白质标签可以具有酶促活性。在本发明的某些实施方案中，蛋白质标签具有酶促活性。此类蛋白质标签的例子包括血凝素A、p-半乳糖苷酶、胸苷激酶、转铁蛋白、myc-标签、VP16、(His)6-标签、或氯霉素乙酰转移酶。在本发明的某些具体实施方案中，成像在受试者的手术期间进行。受试者可以经历由于任何原因的手术，例如用于切除患病组织。例如，在本发明的某些实施方案中，患者经历肿瘤的外科切除术。在本发明的成像方法的进一步的实施方案中，基因与启动子可操作地偶联，并且使细胞成像的方法进一步限定为将基因递送至细胞的方法。因此，例如使细胞成像和将基因递送至细胞可以在本发明的某些实施方案中同时进行。例如，基因可以是上文在本发明的其他实施方案背景中讨论的任何基因。例如，基因可以是治疗基因。如上文讨论的，治疗基因的例子包括肿瘤抑制基因、诱导凋亡的基因、编码酶的基因、编码抗体的基因、或编码激素的基因。例如，治疗基因可以是Rb、CFTR、p16、p21、p27、p57、p73、C-CAM、APC、CTS-1、zacl、scFV環、DCC、NF-1、NF-2、WT-1、MEN-I、MEN-II、BRCA1、VHL、MMAC1、FCC、MCC、BRCA2、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-IO、IL-11IL-12、GM-CSF、G-CSF、胸苷激酶、mda7、/^57、干扰素oc、干扰素^、干扰素Y、ADP、p53、ABLI、BLC1、BLC6、CBFA1、CBL、CSFIR、ERBA、ERBB、EBRB2、ETS1、ETS2、ETV6、FGR、F0X、FYN、HCR、HRAS、JUN、KRAS、LCK、LYN、MDM2、MLL、MYB、MYC、MYCL1、MYCN、NRAS、PIM1、PML、RET、SRC、TAL1、TCL3、YES、MADH4、RB1、TP53、WT1、TNF、BDNF、CNTF、NGF、IGF、GMF、aFGF、bFGF、NT3、NT5、ApoAI、ApoAIV、ApoE、RaplA、胞嘧咬脱氨酶、Fab、ScFv、BRCA2、zacl、ATM、HIC-1、DPC-4、FHIT、PTEN、ING1、N0EY1、N0EY2、0VCA1、MADR2、53BP2、IRF-1、zacl、DBCCR-1、rks-3、C0X-1、TFPI、PGS、Dp、E2F、ras、迈yc、/7ez/、ra/、er6、尸釘、frl、ref、^s/、A仏aW、E1A、p300、VEGF、FGF、血小板反应蛋白、BAI-1、GDAIF、Gene26(CACNA2D2)、PL6、Beta*(BLU)、LUCA-1(HYAL1)、LUCA-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)、SEMA3或MCC。在本发明的某些具体实施方案中，治疗基因是i^S7。如上文讨论的，成像方法可以进一步包括将基因递送到细胞内的方法。在本发明的某些实施方案中，使报道分子成像以追踪递送到细胞内的基因，例如递送到受试者的患病组织内的基因。因此，在本发明的某些实施方案中，成像方法进一步限定为在给受试者施用基因后测量受试者中基因的生物分布的方法。在某些实施方案中，成像方法进一步限定为测量受试者中针对施用的治疗基因的应答的方法。本领域普通技术人员已知的任何测量信号的方法考虑包括在本发明的成像方法中。示例性成像方法包括执行荧光成像分析、免疫组织化学分析、化学发光成像、光学成像、磁共振成像、或放射成像。测量信号的方法在本说明书的其他地方详细讨论。其他例子包括CT成像和超声。本领域普通技术人员已知的任何放射成像方法考虑在本发明的背景中用作测量信号的方法。例如，在某些实施方案中，放射成像进一步限定为y照相机成像。本领域普通技术人员将非常熟悉y照相机成像。在某些具体实施方案中，信号的测量进一步限定为使用mIn-奥曲肽-生长抑素2A型受体(SSRT2A)报道分子系统的y照相机成像。此外，本领域普通技术人员将熟悉磁共振成像。在某些具体实施方案中，信号的测量进一步限定为使用超顺磁性氧化铁(SPIO)-奥曲肽-SSTR2A报道分子和对比增强剂系统的磁共振成像。SPIO是用于MRI的对比剂并且通过增强与正常组织背景的对比用于增强胂瘤组织的分辨率(参见，Arte隨等人,2003;Zhao等人，2002;Gupta和Curtis,2004，其各自特别引入本文作为参考)。本领域普通技术人员将熟悉对比剂(contrastagent)在成像例如在磁共振成像中的使用。对比本发明的某些方面包括增强组织选择性启动子功能的方法以促进其他技术例如目的组织的成像的开发。在Umeoka等人，2004中得到综述。各种成像技术可用于使肺瘤成像。这些成像技术可以应用于癌症检测、诊断和治疗监控。外部成像方法例如计算机断层摄影术、磁共振成像和超声技术的改进已增加了显现肿瘤和转移灶的灵敏性(Tearney等人，1997;MacDonald和Hansel1，2003)。然而，结构和解剖学成像中的限制因素是不能特异性鉴别恶性组织。组织病理学检查仍是用于检测瘤性病变的最有效方法。因此，肿瘤选择性的成像在人癌症治疗中将具有相当大的价值，因为它将允许定位肿瘤而无需显微镜分析。特别地，如果太小而不能直接视觉检测的肿瘤可以原位成像，那么外科医生可以精确地切除具有合适的外科手术边缘的肿瘤。这些成像模式需要肿瘤选择性的合适标记。如上文讨论的，改善组织方法。如本文说明书中使用的，"a"或"an"可以指一个(种)或多个(种)。如本文权利要求中使用的，当与单词"包括，，结合使用时，单词"a"或"an"可以指一个(种)或超过一个(种)。如本文^f吏用的，"另一个(种)"可以指至少第二个(种)或多个(种)。本发明的其他目的、特征和优点由于下列详细描述将是显而易见的。然而，应当理解详细描述和具体实施例在指出本发明优选实施方案的同时只作为举例说明而给出，因为本发明精神和范围内的各种改附图简述下列附图形成了本说明书的一部分并且被包括以进一步证实本发明的某些方面。通过参照这些附图中的一个或多个并结合本文呈现的具体实施方案的详细描述可以更好地理解本发明。图1.质粒载体pLJ143/KGB2/FUSl的图解。图2.质粒载体pLJ280/KGB2/EV的图解。图3.质粒栽体pLJ331/dCpG-KGB2/FUSl的图解。图4.包含hTMC的质粒载体pLJ336/dCPG-KGB2/hTMC-FUSl的图图5.包含hTMC的质粒载体pLJ284/pKGB2/hTMC-EV的图解。图6.包含hTMC的质粒载体pLJ286/pKGB2/hTMC-EGFP的图解。图7.质粒栽体pLJ293/pKGB2/EGFP的图解。图8.质粒栽体pU287/pKGB2/hTERT-EGFP的图解。图9.质粒载体pLJ296/KGB2/SSRT2A的图解。图10.包含hTMC的质粒载体pU346/KGB2/hTMC-SSRT2A的图解。图11.包含hTMC的质粒载体pLJ294/hTMC-FUSl-IRES-SSTR2A的图解。图12.质粒载体pLJ290/pKGB2/FUSl-IRES-SSTR2A的图解。图13.质粒载体pU340/pKGB2/hTMC-Luc的图解。图14.质粒载体pLJ341/pKGB2/hTMC/FU1-IRES-Luc的图解。图15A、图15B、图15C:通过荧光成像分析(图15A)和通过FACS定量分析(图15B，EGFP阳性细胞，和图15C，总焚光强度/1000细胞)的正常细胞和癌细胞转染林中EGFP的表达。图16A、图16B:通过全身注射EGFP-阳离子脂质体复合物(lipoplexes)在小鼠各种组织中EGFP的表达。图16A:通过在棵小鼠中胸腔内注射1x106N417细胞建立肺H417肿瘤。通过静脉内注射用各种EGFP-阳离子脂质体复合物(20jagDM:40nmolDOTAP:胆固醇/小鼠)处理小鼠。注射后48小时杀死动物并立即制备新鲜冷冻的肿瘤、肾、脾、肺和肝样品。冷冻切片在4%多聚曱醛中固定并且立即在荧光显微镜下检查EGFP的表达。hTMC，人TERT-mini-CMV启动子。图16B:通过FACS分析在肿瘤和正常小鼠组织中定量EGFP的表达。图17A、图17B、图17C、图17D:图17A:在HT1080转染林中SSRT2A表达的免疫荧光图像分析。图17B:具有由图17A中显示的相应SSRHA表达(图17A的A、B和C)和不表达(图17D)细胞接种的皮下肿瘤的棵小鼠的Y照相机图像。动物静脉内注射mIn-奥曲肽(13MBq)并在24小时后进行成像。图17C:在pLJ290/FUSl-IRES-SSRT2A质粒转染的H1299细胞中SSRT2A(绿色)和FUS1(红色)的共表达。图17D:通过肿瘤摄取的放射性示踪剂的相关性。％ID/g=%注射剂量/克。图18。经由尾静脉注射通过全身施用hTMC-EGFP-或hTMC-FUSl纳米颗粒+Glevec处理前后具有N417SCLC肿瘤的小鼠的MRI、CT和肺阻断面LungBlockFace(LBF)成4象分析。通过胸腔内注射接种N417肿瘤细胞后14天，通过MRI(之前)篩选动物的肿瘤发展。处理后2周，动物通过MR或CT进行成像，随后杀死并立即冷冻整只动物并制备阻断面切片并完整成像以匹配体内MRI和CT图像。图19。通过原位细胞死亡分析使用TUNEL反应在hTMC-或CMV-FUS1纳米颗粒处理的小鼠中诱导凋亡。举例说明性实施方案的描述成功的癌症基因治疗的一个主要障碍是缺乏可以特异性靶向肿瘤的有效递送系统。用于肿瘤靶向转基因表达的一种方法是经由肿瘤特异性启动子控制转基因表达。人端粒酶逆转录酶(hTERT)是端粒酶的催化亚单位，它在永生化细胞中以及>85%的人癌症中是高度活跃的，但在大多数正常体细胞中是静止的。hTERT启动子已克隆并显示能够在肿瘤而不是正常细胞中靶向转基因表达。然而，如同大多数其他固有的哺乳动物启动子，hTERT启动子的转录促进强度比常用的病毒启动子例如CMV和SV40早期启动子弱得多。因此，其用于癌症基因治疗的用途受到低转基因表达问题的阻碍。为了避开这些问题，本发明人已开发了包括组织选择性启动子序列以及与组织选择性启动子序列可操作地偶联的第二种启动子序列的某些新型嵌合或杂合启动子，其中第二种启动子序列包括病毒最小启动子序列。他们还开发了改善组织选择性启动子功能的某些新型方法，其涉及将组织选择性启动子序列与第二种启动子序列可操作地偶联，其中第二种启动子序列包括病毒最小启动子序列。本文所述的新型启动子可以应用于将基因转移到细胞内的方法中，例如为了治疗受试者中的过度增生性疾病或为了使细胞例如受试者中的细胞成^f象的目的。本文所述的新型启动子可以应用于其中转基因表达改善将是有益的任何方法中。A.启动子和包括启动子的核酸本发明的核酸包括包含组织选择性启动子序列以及与组织选择性启动子序列可操作地偶联的第二种启动子序列的嵌合或杂合启动子，其中第二种启动子序列包括最小启动子序列，优选病毒最小启动子序文描述的各种核酸栽体和核酸载体系统。1.核酸术语"核酸"是本领域众所周知的。如本文使用的，"核酸"一般指DNA、RNA分子(即，链)或其包括核碱基的衍生物或类似物。核碱基包括例如在DNA(例如腺嘌呤"A"、鸟嘌呤"G"、胸腺嘧啶"T"或胞嘧啶"C")或RNA(例如A、G、尿嘧啶"U，，或C)中发现的天然存在的嘌呤或嘧啶碱基。术语"核酸"包括术语"寡核苷酸"和"多核苷酸"，各自作为术语"核酸"的亚属。术语"寡核苷酸"指长度约3-约100个核碱基的分子。术语"多核苷酸"指长度大于约100个核碱基的至少一种分子。这些定义一般指单链分子，但在具体实施方案中还将包括与单链分子部分、基本上或完全互补的另外的链。因此，核酸可以包括双链分子或三链分子，其包括构成分子的特定序列的一条或多条互补链或"补足物"。术语"载体"用于指核酸序列可以插入其中以用于引入细胞中的运载体，在所述细胞中它可以进行复制。术语"表达载体"或"核酸载体"指包含编码能够被转录的至少部分基因产物的核酸序列或"盒"以及"调节"或"控制"序列的载体，所述"调节"或"控制，，序列指可操作地连接的编码序列在特定宿主细胞中转录和可能的翻译必需的核酸序列。除了支配转录和翻译的控制序列以外，表达载体还可以包含起其他功能的核酸序列。2.启动子序列"启动子"序列是控制序列，其是在其上控制转录起始和速率的核酸序列区域。它可以包含在其上可以结合调节蛋白和分子例如RNA聚合酶和其他转录因子的遗传元件。短语"可操作地定位"、"可操作地连接"、"在……控制下"和"在……转录控制下"指启动子相对于核酸序列的正确功能定位和定向以控制那种序列的转录起始和表达。启动子可以与"增强子"结合或不结合使用，所述"增强子"指涉及核酸序列转录激活的顺式作用调节序列。总之，合适的启动子或启动子/增强子组合，以及目的基因构成表达盒。一种或多种表达盒可以存在于给定的核酸载体或表达载体中。在某些方面，一种表达盒可以编码与第二种表达盒的启动子相互作用的反式激活蛋白。一种或多种表达盒可以存在于相同和/或不同的表达载体上。启动子可以是与基因或序列天然締合的启动子，如可以通过分离位于编码区段或外显子上游的5'非编码序列的部分获得。此类启动子可以称为"内源的"。类似地，增强子可以是位于那种序列的上游或下游、与核酸序列天然締合的增强子。可替代地，某些优点可以通过将编码的核酸区段置于重组或异源启动子的控制下获得，所述重组或异源启动子指在其天然环境中与核酸序列通常不締合的启动子。在本发明的某些方面，异源启动子可以是嵌合启动子，其中2种或多种内源、异源或合成启动子序列的元件可操作地偶联以产生重组启动子。重组或异源增强子也指在其天然环境中与核酸序列通常不締合的增强子。此类启动子或增强子可以包括其他基因的启动子或增强子，和从任何其他原核、病毒或真核细胞中分离的启动子或增强子，以及非"天然存在的"启动子或增强子，即包含不同转录调节区的不同元件和/或改变表达的突变的启动子或增强子。除了合成生产启动子和增强子的核酸序列以外，序列可以使用重组克隆和/或核酸扩增技术包括PGR,与本文公开的组合物结合产生(参见美国专利4,683,202和5，928，906，各自引入本文作为参考)。此类启动子可以用于驱动报道分子表达，例如、半乳糖苷酶或萤光素酶。此外，考虑还可以采用指导序列在非核细胞器例如线粒体、叶绿体等内的转录和/或表达的控制序列。一般将使用有效指导DM区段在选择用于表达的细胞类型、细胞器和生物中表达的启动子和/或增强子。分子生物学领域的技术人员一般了解用于蛋白质表达的启动子、增强子和细胞类型組合的使用，例如参见引入本文作为参考的Sambrook等人，(1989)。采用的启动子可以是组成型、组织特异性、诱导型和/或在合适条件下可指导引入的DNA区段表达的，例如在重组蛋白质和/或肽的生产中有利的。启动子可以是异源的或内源的或其组合。a.组织选择性启动子序列启动子可以在各种组织类型和几种不同的生物种类中有功能，或者其功能可以限制于特定种类和/或特定组织或细胞类型。此外，启动子可以是组成型活性的，或者它可以经由某些物质(例如组织特异性因子)、在一定条件下(例如低氧、或在包含启动子的表达盒中增强子元件的存在)、或在生物的某一发育阶段过程中(例如在胎儿中活跃，在成人中沉默)选择性激活。在本发明实践中有用的启动子优选是組织特异性的，即，它们能够驱动基因在一种组织中转录，同时在其他组织类型中很大程度上保持"沉默"或以相对低的水平表达。然而，应当理解组织特异性或组"背景，，或一"基础"、活性。启动子在耙组织中选;性激活;程度可以点上:在本发明实践中有用的组织特异性启动;一般具有大于约2、3、、4或5的选择性比率。优选地，选择性比率大于约10或15。应进一步理解某些启动子虽然在活性方面不限制于单一组织类型，仍然可以显示选择性，因为它们在一群组织中可以是活跃的，并且在另一群中较不活跃或沉默。此类启动子也称为"组织特异性"或"组织选择性"，并且考虑用于与本发明一起使用。例如，在各种肿瘤细胞中活跃的启动子在治疗癌症中可以是治疗上有用的，其可以影响机体的许多不同区域中的任何一个。组织特异性启动子可以来源于例如基因的启动子区域，所述基因在不同组织或不同生长阶段或增生细胞中差异表达。基因在特定启动子控制下的表达水平可以通过操纵启动子区域进行调节。例如，启动子区域内的不同结构域可以具有不同的基因调节活性。这些不同区域的作用一般使用具有不同启动子变体的载体构建体进行评估，所述启动子变体具有特异性区域缺失(即，缺失分析)。用于此类实验的载体一般包含报道分子序列，其用于测定每种启动子变体在不同条件下的活性。此类缺失分析的应用使得能够鉴别包含所需活性的启动子序列并因此鉴别包括核心启动子元件的特定启动子结构域。这种方法可以用于鉴别例如当与其他启动子元件例如但不限于核心CMV启动子，mini-CMV组合时，能够赋予组织特异性的最小区域，或赋予强转录应答的最小区域。本文描述的许多组织特异性启动子在本发明的实践中可以是特别有利的。在大多数情况下，这些启动子可以分离为适合于克隆到选择的载体中的方便的限制性消化片段。本发明的某些方面包括但不限于hTERT启动子。可替代地，启动子片段可以使用聚合酶链式反应或通过寡核苷酸合成进行分离。这些启动子片段的克隆可以通过在引物的端掺入限制性位点来促进。本领域普通技术人员将熟悉可以包括在本发明背景中的各种类型的组织选择性启动子序列。这些启动子的示例性列表包括在表1中。表1列出了可以在本发明背景中用作组织选择性启动子序列来源的元件/启动子的非限制性例子。表1-启动子和/或增强子<table>complextableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>b.可操作地偶联启动子序列的方法术语"启动子"与"启动子元件"和"启动子序列"可互换使用。同样地，术语"增强子"与"增强子元件"和"增强子序列"可互换使用。启动子可以与其他启动子、启动子元件和/或调节序列/元件偶联，其当结合合适的细胞内调节因子时，增强("增强子")或抑制("抑制子")启动子依赖性转录。当此类元件控制或影响转基因转录速率或功效时，启动子、增强子或抑制子可以说成与转基因"可操作地连接"。例如，定位接近转基因编码序列的5'端的启动子序列通常与转基因可操作地连接。如本文使用的，术语"调节元件，，与"调节序列，，可互换使用，并且指启动子、增强子和其他表达控制元件、或此类元件的任何组合。启动子位于它们控制的基因的5'(上游)。许多真核启动子包含2种类型的识别序列TATA盒和上游启动子元件。位于转录起始位点上游25-30bp的TATA盒被认为涉及指导RM聚合酶II在正确位点开始RNA合成。相反，上游启动子元件决定转录起始的速率。不管其定向，这些元件都可以起作用，但它们必须定位于TATA盒上游的100—200bp区内。1000倍。即使其定向是反向的，增强子元件通常也保持活性(Li等人，J.Bio.Chem.1990,266:6562-6570)。此外，不《象启动子元件，当置于转录起始位点下游时，例如在内含子内，或甚至在与启动子有相当距离处，增强子仍可以是活跃的(Yutzey等人，Mol.andCell.Bio.1989,9:1397-1405)。如本领域已知的，可以适应这种距离中的某些变化而不丧失启动子功能。类似地，调节元件相对于转基因的定位可以显著改变而不丧失功能。调节元件的多重拷贝可以协同起作用。一般地，表达载体在-3'方向上包括一种或多种增强子序列，随后为启动子序列，它们全部可操作地连接至转基因，转基因后面为多腺苷酸化序列。3.基因本发明的某些实施方案涉及包括与一种或多种目的基因可操作地偶联的本文所述新型启动子序列之一的核酸序列。本发明的某些其他实施方案涉及使细胞成像的方法，其中该方法进一步限定为将基因递送到细胞内的方法。在这些实施方案中，基因与启动子可操作地偶联。细胞的方法中。术语"基因"用于简单地指功能蛋白质、多肽或肽编码单位。在本发明的某些实施方案中，基因是治疗基因。"治疗基因"是可以为了治疗或预防疾病的目的施用于受试者的基因。例如，治疗基因可以是施用于受试者用于治疗或预防癌症的基因。治疗基因的例子包括但不限于，Rb、CFTR、p16、p21、p27、p57、p73、C-CAM、APC、CTS-1、zacl、scFVras、DCC、NF-1、NF-2、WT-1、MEN-I、MEN-II、BRCA1、VHL、MMAC1、FCC、MCC、BRCA2、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-IO、IL-llIL-12、GM-CSF、G-CSF、胸苷激酶、mda7、fus、干扰素ot、干扰素P、干扰素y、ADP、p53、ABLI、BLC1、BLC6、CBFA1、CBL、CSFIR、ERBA、ERBB、EBRB2、ETS1、ETS2、ETV6、FGR、F0X、FYN、HCR、HRAS、JUN、KRAS、LCK、LYN、MDM2、MLL、MYB、MYC、MYCL1、MYCN、NRAS、PIM1、PML、RET、SRC、TAL1、TCL3、YES、MADH4、RB1、TP53、WT1、TNF、BDNF、CNTF、NGF、IGF、GMF、aFGF、bFGF、NT3、NT5、ApoAI、ApoAIV、ApoE、RaplA、胞嘧咬脱氨酶、Fab、ScFv、BRCA2、zacl、ATM、HIC-1、DPC-4、FHIT、PTEN、ING1、N0EY1、N0EY2、0VCA1、MADR2、53BP2、IRF-1、Rb、zacl、DBCCR-1、rks-3、C0X-1、TFPI、PGS、Dp、E2F、屮、迈yc、細、ra八er6、/迈s、"ir、r"、柳、力"、a仏E1A、p300、VEGF、FGF、血小板反应蛋白、BAI-1、GDAIF或MCC。在本发明的某些实施方案中，治疗基因是肿瘤抑制基因。肿瘤抑制基因是当存在于细胞中时减少细胞的致肿瘤性、恶性或过度增生性表型的基因。这个定义包括肿瘤抑制基因的全长核酸序列，以及来源于全长序列的任何长度的非全长序列。应进一步理解序列包括天然序列的筒并密码子或可以引入以在特定宿主细胞中提供密码子偏爱的序列。在这个定义内的肿瘤抑制核酸的例子包括，但不限于，APC、CYLD、HIN-1、KRAS2b、p16、p19、p21、p27、p27mt、p53、p57、p73、PTEN、Rb、子宫珠蛋白、Skp2、BRCA-1、BRCA-2、CHK2、C訓2A、DCC、DPC4、MADR2/JV18、MEN1、MEN2、MTS1、NF1、NF2、VHL、画、WT1、CFTR、C-CAM、CTS-1、zacl、scFV、r"、薩C1、FCC、MCC、Gene26(CACM2D2)、PL6、Beta*(BLU)、Luca-l(HYAL1)、Luca-2(HYAL2)、123F2(RASSF1)、101F6、Gene21(NPRL2)、或编码SEMA3多肽的基因和FUS1。染色体3p21.3基因，例如FUS1，在特别整体引入本文作为参考的美国专利申请发明者J·A·罗瑟,L·X·基,方炳良申请人:得克萨斯大学体系董事会