专利名称：产气荚膜梭菌选择性显色培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于快速培养和鉴定产气荚膜梭菌的选择性显色培养基。
技术背景-
产气荚膜梭菌广泛分布于自然界以及人和动物的肠道中，并能引起人和动物 的多种疾病，临床上最常见的是由产气荚膜梭菌引起的气性坏疽和食物中毒。气 性坏疽为病原菌侵入伤口引起的严重急性感染，以组织坏死、水肿、胀气、全身 中毒为特征，好发于下肢，死亡率高达40%-100%。本病常为两种以上细菌参与 的混合感染，其中60%-80%为产气荚膜梭菌引起。因此，早期快速地从标本中 分离培养出本菌，对于疾病的珍断和治疗显得极为重要。产气荚膜梭菌为革兰氏 阳性粗大杆菌，厌氧但要求不高，在有少量有氧的环境中也能生长，营养要求不 高，生长繁殖迅速。传统的培养鉴定方法，是将标本接种于血琼脂平板和卵黄琼 脂平板上，在37'C条件下培养18-24小时，挑选可疑菌落再继续接种鉴别培养 基继续培养，或在庖肉培养基增菌培养8-IO小时后，转种血琼脂平板和卵黄琼 脂平板。传统方法耗费时间长，和产气荚膜梭菌培养特性相似的其它细菌也会生 长，使鉴别'诊断缺乏特异性，做出初步鉴定诊断往往需要24小时以上。
发明内容
鉴于以上现状，本发明提供一种产气荚膜梭菌选择性显色培养基，解决了上 述传统培养鉴定方法存在的培养时间长，缺乏't会断特异性的问题。 本发明的技术方案是通过如下内容实现的
一种产气荚膜梭菌选择性显色培养基，其特征在于配置1000ml培养基的 成分为酪蛋白酶水解物12.0g-20.0g，酵母浸粉6.0g-12.0g，亚硫酸钠0.20g-0.80g，多粘菌素B 0.005g-0.015g，磺胺嘧啶0.05g-0.20g，柠檬酸铁0.20g-0.80g'胰苏 宁4-12单位，琼脂粉10.0g-18.0g，加蒸馏水至lOOOml。
所述配置1000ml培养基的成分为酪蛋白酶水解物12.0g-14.0g，酵母浸粉 10.0g-12.0g，亚硫酸钠0.20g-0.40g，多粘菌素B 0.010g-0.015g，磺胺嘧啶 0.05g-0.10g，柠檬酸铁(J.60g-0.80g,胰苏宁4-6单位，琼脂粉16.0g-18.0g，加蒸 馏水至1000ml 。
所述配置lOOOml培养基的成分为酪蛋白酶水解物14.0g-16.0g，酵母浸粉 8.0g-10.0g，亚硫酸钠0.40g-0.60g，多粘菌素B 0.008g-0.010g,磺胺嘧啶 0.10g-0.15g，柠檬酸铁0.40g-0.60g，胰苏宁6-10单位，琼脂粉12.0g-16.0g，加 蒸馏水至1000ml 。
所述配置lOOOml培养基的成分为酪蛋白酶水解物16.0g-20.0g，酵母浸粉 6.0g-8.0g，亚硫酸钠0.60g-0.80g,多粘菌素B 0.005g-0.008g ，磺胺嘧啶 CU5g-0.20g，柠檬酸铁0.20g-0.40g，胰苏宁10-12单位，琼脂粉10.0g-12.0g，加 蒸馏水至1000ml 。
所述蒸馏水为双蒸水。
所述培养基通过高压蒸汽灭菌，其压力值为103.4kPa。 所述培养基最终PH值在25。C条件下为7.0土0.2。
配置过程在3 5-37'C的温度条件下，先加入适量双蒸水至容器中，再将酪 蛋白酶水解物、酵母浸粉、亚硫酸钠、多粘菌素B、磺胺嘧啶、柠檬酸铁、胰苏 宁、琼脂粉加入双蒸水中充分溶解后,用容量瓶定容至1000ml，通过往溶液中 添加酸性(HCL)或者碱性物质(NaOH)使其在25'C下最终PH值为7.0±0.2， 最后通过103.4kPa(1.05kg/cm"的高压蒸汽灭菌，分装时需要在超净工作台，且 分装于无菌平皿。
本发明优点培养时间较传统方法明显縮短，具有相同培养特性的其它细菌 受到抑制均不生长，从而实现了快速培养和鉴定产气荚膜梭菌的效果。
具体实施例方式
在35-37X:条件下，先加入适量双蒸水至容器中，再将酪蛋白酶水解物、酵母浸粉、亚硫酸钠、多粘菌素B、磺胺嘧啶、柠檬酸铁、胰苏宁、琼脂粉加入双 蒸水中充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，通过往溶液中添加酸性或者碱性 物质使其在25。C下最终PH值为7.0±0.2，最后通过103.4kPa(1.05kg/cm、的高压 蒸汽灭菌，分装时需要在超净工作台，且分装于无菌平皿。
酪蛋白酶水解物，酵母浸粉，提供细菌生长所需的氮源、碳源和生长因子; 琼脂粉是培养基的，形剂；多粘菌素B，磺胺嘧啶抑制其它杂菌生长；胰苏宁为 生长促进因子；柠檬酸铁和亚硫酸钠为显色指示剂，亚硫酸钠还可抑制其它革兰 氏阳性菌生长。
用此培养基在35-37'C培养8-12小时，产气荚膜梭菌生长良好，菌落显黑色， 其他还原亚硫酸盐的革兰氏阳性和阴性菌不生长，从而实现快速培养和鉴定产气 荚膜梭菌。
实施例1
提供一种培养基，用于快速培养和鉴定产气荚膜梭菌。主要成分为酪蛋白 酶水解物12.0g，酵母浸粉12.0g，亚硫酸钠0.20g，多粘菌素B0.015g，磺胺嘧 啶0.05g，柠檬酸铁0.80g，胰苏宁4单位，琼脂粉18.0g。精确称量以上成分， 用双蒸水充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，在103.4kPa(1.05kg/cm、的条件 下进行高压蒸汽灭菌，分装于无菌平皿备用，最终PH (25°C)值为6.8。用此培 养基在35'C条件下培养8小时，产气荚膜梭菌生长良好，菌落显黑色，其他还 原亚硫酸盐的革兰氏阳性和阴性菌不生长，从而实现快速培养和鉴定产气荚膜梭 菌。
实施例2
提供一种培养基，用于快速培养和鉴定产气荚膜梭菌。主要成分为酪蛋白
酶水解物20.0g，酵母浸粉6.0g，亚硫酸钠0.80g，多粘菌素B 0.005g，磺胺嘧 啶0:20g，柠檬酸铁0.20g,胰苏宁12单位，琼脂粉10.0g。精确称量以上成分， 用双蒸水充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，在103.4kPa(1.05kg/cn )的条件 下进行高压蒸汽灭菌，分装于无菌平皿备用，最终PH (25")值为7.2。用此培养基在37C条件下培养12小时，产气荚膜梭菌生长良好，菌落显黑色，其他还 原亚硫酸盐的革兰氏阳性和阴性菌不生长，从而实现快速培养和鉴定产气荚膜梭
菌o ,
实施例3 '
提供一种培养基，用于快速培养和鉴定产气荚膜梭菌。主要成分为酪蛋白
酶水解物14.0g，酵母浸粉10.0g，亚硫酸钠0.40g，多粘菌素B 0.0lg，磺胺嘧 啶0.10g,柠檬酸铁0.60g，胰苏宁6单位，琼脂粉16.0g。精确称量以上成分， 用双蒸水充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，在103.4kPa(1.05kg/cm"的条件 下进行高压蒸汽灭菌，分装于无菌平皿备用，最终PH (25°C)值为7.0。用此培 养基在36'C条件下培养10小时，产气荚膜梭菌生长良好，菌落显黑色，其他还 原亚硫酸盐的革兰氏阳性和阴性菌不生长，从而实现快速培养和鉴定产气荚膜梭 菌。
实施例4
提供一种培养基，用于快速培养和鉴定产气荚膜梭菌。主要成分为酪蛋白
酶水解物16.0g，酵母浸粉8.0g，亚硫酸钠0.60g，多粘菌素B 0.008g，磺胺嘧 啶0.10g，柠檬酸铁0.40g，胰苏宁10单位，琼脂粉12.0g。精确称量以上成分， 用双蒸水充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，在103.4kPa(1.05kg/cn )的条件 下进行高压蒸汽灭菌，分装于无菌平皿备用，最终PH (25°C)值为6.9。用此培 养基在36'C条件下培养9小时，产气荚膜梭菌生长良好，菌落显黑色，其他还 原亚硫酸盐的革兰氏阳性和阴性菌不生长，从而实现快速培养和鉴定产气荚膜梭 菌。
实施例5
提供一种培养基，用于快速培养和鉴定产气荚膜梭菌。主要成分为酪蛋白
酶水解物18.0g,酵母浸粉10.0g，亚硫酸钠0.60g，多粘菌素B0.012g,磺胺嘧 啶0.15g，柠檬酸铁0.60g，胰苏宁10单位，琼脂粉16.0g。精确称量以上成分， 用双蒸水充分溶解后，用容量瓶定容至1000ml，在103.4kPa(1.05kg/cm、的条件下进行高压蒸汽灭菌，分装于无菌平皿备用，最终PH (25°C)值为7.1。用此培 养基在37'C条件下培养11小时，产气荚膜梭菌生长良好，菌落显黑色，其他还 原亚硫酸盐的革兰氏阳性和阴性菌不生长，从而实现快速培养和鉴定产气荚膜梭 菌。
权利要求
1、一种产气荚膜梭菌选择性显色培养基，其特征在于配置1000ml培养基的成分为酪蛋白酶水解物12.0g-20.0g，酵母浸粉6.0g-12.0g，亚硫酸钠0.20g-0.80g，多粘菌素B 0.005g-0.015g，磺胺嘧啶0.05g-0.20g，柠檬酸铁0.20g-0.80g，胰苏宁4-12单位，琼脂粉10.0g-18.0g，加蒸馏水至1000ml。
2、 根据权利要求1所述的产气荚膜梭菌选择性显色培养基，其特征在于 配置lOOOml培养基的成分为酪蛋白酶水解物12.0g-14.0g，酵母浸粉10.0g-12.0g， 亚硫酸钠0.20g-0.40g，多粘菌素B 0.010g-0.015g，磺胺嘧啶0.05g-0.10g，柠檬 酸铁0.60g-0.80g,胰苏宁4-6单位，琼脂粉16.0g-18.0g，加蒸馏水至lOOOml。
3、 根据权利要求1所述的产气荚膜梭菌选择性显色培养基，其特征在于 配置lOOOml培养基的成分为酪蛋白酶水解物14.0g-16.0g，酵母浸粉8.0g-10.0g， 亚硫酸钠0.40g-0.60g，多粘菌素B 0.008g-0.010g，磺胺嘧啶0.10g-0.15g，柠檬 酸铁0.40g-0.60g，胰苏宁6-10单位，琼脂粉12.0g-16.0g，加蒸馏水至lOOOml。
4、 根据权利要求1所述的产气荚膜梭菌选择性显色培养基，其特征在于 配置lOOOml培养基的成分为酪蛋白酶水解物16.0g-20.0g，酵母浸粉6.0g-8.0g， 亚硫酸钠0.60g-0.80g，多粘菌素B 0.005g-0.008g，磺胺嘧啶0.15g-0.20g，柠檬 酸铁0.20g-0.40g，胰苏宁10-12单位，琼脂粉10.0g-12,0g，加蒸馏水至lOOOmI。
5、 根据权利要求1-4中任意一项所述的产气荚膜梭菌选择性显色培养基， 其特征在于所述蒸馏水为双蒸水。
6、 根据权利要求1-4中任意一项所述的产气荚膜梭菌选择性显色培养基， 其特征在于所述培养基通过高压蒸汽灭菌，其压力值为103.4kPa。
7、 根据权利要求1-4中任意一项所述的产气荚膜梭菌选择性显色培养基， 其特征在于所述培养基最终PH值在25'C条件下为7.0±0.2。
全文摘要
本发明涉及一种用于快速培养和鉴定产气荚膜梭菌的选择性显色培养基，本发明其特征在于配置1000ml培养基需要酪蛋白酶水解物12.0g-20.0g，酵母浸粉6.0g-12.0g，亚硫酸钠0.20g-0.80g，多粘菌素B 0.005g-0.015g，磺胺嘧啶0.05g-0.20g，柠檬酸铁0.20g-0.80g，胰苏宁4-12单位，琼脂粉10.0g-18.0g，最后加蒸馏水至1000ml；本发明的优点在于培养时间较传统方法明显缩短，具有相同培养特性的其它细菌受到抑制均不生长，从而实现了快速培养和鉴定产气荚膜梭菌的效果。
文档编号C12Q1/04GK101659980SQ20091016778
公开日2010年3月3日 申请日期2009年9月28日 优先权日2009年9月28日
发明者军 王 申请人:成都瑞琦科技实业有限责任公司