专利名称：一种中华真地鳖抗氧化肽的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种酶法制备抗氧化肽的方法。尤其是一种以中华真地鳖为原料制备 抗氧化肽的方法。
背景技术：
随着抗氧化机理研究的深入和对肽类抗氧化性的认识，利用生物技术生产抗氧化 肽的研究受到广泛的关注。生物科学的发展表明，采用各种酶或微生物水解动植物原料蛋 白的水解产物中存在多种抗氧化肽，其抗氧化活性比原料蛋白质往往更为显著，而且具有 较高的食用安全性。因此，在功能性食品领域展现出极好的应用前景。目前，国内外关于抗氧化肽的研究很多，其来源主要有玉米、大豆、花生、菜籽、鱼 类、贝类等，但是以昆虫为原料制备抗氧化肽的研究在国内外尚未见报道。地鳖虫是拥有2000多年历史的传统名贵中药材，传统上，主要用来治疗跌打损 伤，风湿骨痛，消肿，吹喉症等。近年来，经过大量的现代医学实验研究和临床观察证实，地 鳖虫具有抗癌、降血脂、耐缺氧、提高免疫力以及对肝硬化、脑损伤、脉管炎、骨髓炎、血液病 等具有保健和辅助治疗作用，为此地鳖虫作为药物开发材料得到了专业人士的关注。中华真地鳖是在地鳖虫种类中蛋白质含量最高的品种之一，不仅是一种传统的中 药材，还由于含有丰富的蛋白质、脂肪、维生素A、D、E、K及硒、铁、锌等微量元素，成为一种 在国内认知度较高的药食兼用昆虫。目前，中华真地鳖的养殖已成为农民增收的新途径，其养殖规模也在不断的扩大。 “中华真地鳖农业产业化”项目已被定为‘2006年黑龙江省和山东省扶贫计划项目’。所以对 其进行加工或提取生理活性物质，并研制和开发新产品将成为摆在我们面前的重要课题， 并且将具有较大的市场前景。中华真地鳖的主要产品有油炸小食品、酒、酱、胶囊等初级阶 段的产品，加工工艺简单、品种单一，远远不能满足现代社会不同层次的消费要求。如果没 有高科技的产品开发，很难适应市场发展需求的多样性。因此，本发明以中华真地鳖为原料利用酶法制备具有抗氧化活性的肽，为抗氧化 功能食品的开发提供理论依据与技术支持。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用高效蛋白质分解酶酶解中华真地鳖制备具有抗氧 化功能的肽的方法，为抗氧化功能食品的开发提供技术支持。本发明的特征在于以中华真地鳖为原料，利用从韩国引进的高效蛋白质分解酶一 Arazyme〔Arazyme酶是蜘蛛(N^hila Clavata)消化道内的共生微生物(HY-3)所分泌的 一种高活性金属蛋白质分解酶〕对其进行酶解，将酶解产物经凝胶层析和离子交换层析，收 集目标峰，进行冷冻干燥。本发明采用的技术方案是一种具有抗氧化活性的中华真地鳖肽的酶法制备方 法，是选用蛋白质含量大于60%的中华真地鳖，冻干粉碎、脱脂后，按一定料水比加水勻浆，用10% NaOH溶液调节pH值至8. 0 9. 0后，将一定量的Arazyme蛋白酶添加到勻浆中，在 37°C恒温水浴振荡器中进行酶解2 10小时。将酶解液加热到50 60°C灭酶15min，待 冷却后在3000rpm下离心15min，取上清液。将上清液经凝胶层析和离子交换层析后，收集 目标峰，进行冷冻干燥。本发明以中华真地鳖为原料，利用Arazyme高效蛋白质分解酶所得的酶解产物， 经层析、冻干后，以亚油酸自动氧化抑制率为指标，制备具有抗氧化活性达50%以上的中华
真地鳖肽。
具体实施例方式一种酶法制备中华真地鳖抗氧化肽的方法包括以下步骤。1、中华真地鳖的脱脂将新鲜的中华真地鳖冷冻干燥后，用索氏提取法除去其中的脂肪。2、脱脂中华真地鳖的酶解取一定量的脱脂中华真地鳖粉末，按1 10-1 50料水比加入蒸馏水溶解。然 后用10 % NaOH溶液调pH值至8. 0 9. 0后，迅速加入100 1000U的Arazyme蛋白酶，摇 勻，在温度为37°C、转速为150rpm/min的恒温水浴振荡器中进行酶解2 10小时。将酶解 液加热到50 60°C灭酶15min，待冷却后在3000rpm下离心15min，取上层离心液。此脱脂 中华真地鳖酶解液以下简称为酶解液。3、凝胶层析用S印hadex G_25交换树脂，将酶解液以一定浓度的PBS缓冲液进行洗脱，分离 出分子量为1000 5000道尔顿的抗氧化活性最高的分离组分。4、离子交换层析用SP S印hadex C_25阳离子交换树脂，将活性高的凝胶层析分离组分以不同浓 度的NaCl溶液进行洗脱，进行再次分离，并测定其各组分对亚油酸自动氧化的抑制率，选 择最高抗氧化活性的分离组分。6、抗氧化活性的测定对凝胶层析分离组分与离子交换层析分离组分，分别测定其抗氧化活性。各分离 组分的抗氧化活性以亚油酸自动氧化抑制率为指标。7、冷冻干燥收集被选定的最高抗氧化活性的目标峰，进行冷冻干燥，得到中华真地鳖抗氧化 肽。
权利要求
1.一种中华真地鳖抗氧化肽的制备方法，其特征在于选用蛋白质含量大于60%的中 华真地鳖，脱脂粉碎，按料水比1 10-1 50水料比加水勻浆，然后用10% NaOH溶液调 pH值至8. 0 9. 0后，迅速加入100 1000U的Arazyme蛋白酶，摇勻，在温度为37°C、转 速为150rpm/min的恒温水浴振荡器中进行酶解2 10小时。将酶解液加热到50 60°C 灭酶15min，待冷却后在3000rpm下离心15min，取上层离心液经凝胶层析和离子交换层析 后，收集目标峰，进行冷冻干燥。
2.根据权利要求1所述的中华真地鳖抗氧化肽的制备方法，其特征在于酶解原料为 中华真地鳖昆虫。
3.根据权利要求1所述的中华真地鳖抗氧化肽的制备方法，其特征在于酶解使用的 酶是从韩国引进的高效蛋白质分解酶-Arazyme，Arazyme酶是蜘蛛(N印hila Clavata)消 化道内的共生微生物(HY-3)所分泌的一种高活性金属蛋白质分解酶。
4.根据权利要求1所述的中华真地鳖抗氧化肽的制备方法，其特征在于所用的肽分 离方法为凝胶层析与离子交换层析。
5.根据权利要求1所述的中华真地鳖抗氧化肽的制备方法，其特征在于抗氧化活性 的测定以亚油酸自动氧化抑制率为指标。
6.根据权利要求1所述的中华真地鳖抗氧化肽的制备方法，其特征在于收集最高抗氧化活性的目标峰，进行冷冻干燥，得到中华真地鳖抗氧化肽。
全文摘要
一种中华真地鳖抗氧化肽的制备方法，其特征是选用蛋白质含量大于60％的中华真地鳖，脱脂粉碎后，按1∶10-1∶50水料比加入蒸馏水溶解，然后用10％NaOH溶液调pH值至8.0～9.0后，迅速加入100～1000U的Arazyme蛋白酶，摇匀，在温度为37℃、转速为150rpm/min的恒温水浴振荡器中进行酶解2～10小时。将酶解液灭酶、离心得到的上清液再经凝胶层析和离子交换层析后，以亚油酸自动氧化抑制率为指标，判断抗氧化程度，收集目标峰，进行冷冻干燥。本发明以中华真地鳖为原料，利用从韩国引进的Arazyme高效蛋白质分解酶〔Arazyme酶是蜘蛛(Nephila Clavata)消化道内的共生微生物(HY-3)所分泌的一种高活性金属蛋白质分解酶〕制备中华真地鳖抗氧化肽，其抗氧化活性可达50％以上。
文档编号C12P21/06GK101993908SQ20091016709
公开日2011年3月30日 申请日期2009年8月14日 优先权日2009年8月14日
发明者朴美子, 王莹, 金玉兰 申请人:朴美子